雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的实验研究分析

王　艺　陈金石　魏晚霞　李隆玉



·基础研究·

雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的实验研究分析

王艺陈金石魏晚霞李隆玉

【摘要】目的分析雌孕激素在人上皮性卵巢癌裸鼠模型中的实验研究。方法建立上皮性卵巢癌裸鼠模型30只,裸鼠随机分为三组：雌激素组(A 组)10只、雌孕激素联合组(B 组)10只、对照组(C组)10只；分别肌肉注射苯甲酸雌二醇注射液0.06 ml、苯甲酸雌二醇注射液0.06 ml联合黄体酮注射液0.06 ml、灭菌油剂0.06 ml，每3天给药及测量和记录裸鼠体重、肿瘤体积等指标，给药3周后取血检测血清肿瘤标记物Ca125。结果3组肿瘤重量、体积比较有统计学差异(P<0.05)；3组裸鼠体重比较无统计学差异(P>0.05)；3组肝、脾、网膜、淋巴结转移比较无统计学差异(P>0.05)；3组血清肿瘤标记物Ca125值比较无统计学差异(P>0.05)。结论雌激素可促进裸鼠肿瘤组织的生长，雌孕激素联合不增强裸鼠肿瘤组织的生长，且均不改变血清肿瘤标记物Ca125水平。

【关键词】人上皮性卵巢癌；雌激素；孕激素；Ca125

(ThePracticalJournalofCancer,2015,30:633～635)

上皮性卵巢癌死亡率居妇科肿瘤首位,此类患者日趋年轻且治疗后的围绝经期症状严重影响其生活质量。激素替代治疗能明显改善围绝经期综合征，但存在的问题是使用激素是否会增加卵巢癌复发、转移的风险尚不明确。本文建立人上皮性卵巢癌裸鼠模型,通过对人上皮性卵巢癌裸鼠模型使用激素与未使用激素的比较，明确雌孕激素的干预是否会导致人上皮性卵巢癌裸鼠模型病情进展、病灶转移，为卵巢癌患者激素治疗的可行性及安全性评价提供可靠依据。

1材料与方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物BALB/Cnu-nu 小鼠,SPF 级,由国家噬齿类种子中心中国药品生物制品检验所实验动物中心提供,合格证号:SCXK(京) 2005-004。实验动物饲养在江西省药物研究所IVC 笼具内,使用许可证SYXK(赣) 2008-0005。雌性,鼠龄8～10 周龄,体重18～22 g,SPF 级。饲料由江西省饲料生产基地提供,饲料、饮水、垫料均经高压蒸汽灭菌121 ℃,20 min,取出垫料再放入电热鼓风干燥箱干燥后使用。水和饲料自由饮食。按江西省实验动物伦理委员会批准的方案进行实验。

1.1.2实验药物与试剂苯甲酸雌二醇注射液、黄体酮注射液购自天津市颧洋生物制品科技有限责任公司(美国 Santa Cruz公司产品)；血Ca125检测试剂盒购自武汉市伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.2实验方法

1.2.1实验动物模型的构建将人卵巢癌实体瘤皮下移植裸鼠成功的实体瘤剪碎后，通过裸小鼠背部将瘤块置于裸小鼠卵巢上。实现实体瘤原位移植裸鼠模型的建立。重复上述手术,进行实体瘤传代。得到稳定的人卵巢癌实体瘤原位移植裸鼠模型。取8～10周龄裸鼠30只，进行接种，速眠新合剂按0.5 mg/kg剂量腹腔注射麻醉，将已稳定传代的人卵巢癌实体瘤原位移植裸鼠处死、剥离皮下肿瘤，选择生长良好、无坏死、呈淡黄色、鱼肉状瘤组织，剪成1～2 mm大小组织块，消毒已麻醉裸鼠右肩胛部皮肤，剪一长约5 mm小口，由破口处在皮下分离出一小腔隙，用眼科镊将肿瘤组织块送入腔隙内，缝合，再次消毒，放回IVC 笼具内。接种肿瘤后的裸鼠一周后分组给药。

1.2.2血清CA125 的检测方法裸鼠采用摘眼球法取血，血清 CA125 采用ELISA测定方法。

1.3统计学处理

应用SPSS 13.0软件进行统计学分析。3组裸鼠体重、肿瘤重量、肿瘤体积、血清 CA125值比较采用方差分析；肝、脾、淋巴结、网膜转移采用秩和检验进行统计学处理。

2结果

2.1裸鼠移植瘤生长、转移的影响

将30只裸鼠随机分为雌激素组(A 组)、雌孕激素联合组(B 组)及对照组(C组)。接种肿瘤后的裸鼠一周后分组给药共21天，比较3组裸鼠体重、肿瘤重量、肿瘤体积和肿瘤转移状况。3组裸鼠体重比较无统计学差异(P>0.05)；肿瘤重量A组与B、C组间有统计学差异(P<0.05)，而B组与C组间差异无统计学意义(P>0.05)；肿瘤体积A组与B、C组间有差异(P<0.05)，而B、C组间差异无统计学意义(P>0.05)；3组肝、脾、网膜、淋巴结转移比较无统计学差异(P>0.05),见表1～2。

2.2血清 CA125检测结果

3组血清 CA125表达水平比较无显著性差异P=0.36，见表3。

表1　3组裸鼠体重、肿瘤重量、肿瘤体积比较

A、 B、C三组裸鼠体重比较，P=0.292；肿瘤重量比较，P=0.0001；肿瘤体积比较，P=0.0001。

表2　3组肝、脾、淋巴结、网膜转移情况比较/例

注：实验过程中A组有1只裸鼠死亡，B组有2只裸鼠死亡。

表3　3组用药前后血清 CA125值的比较

A、 B、C三组用药前后血清 CA125表达水平比较无显著性差异，P>0.05。

3讨论

卵巢癌是女性生殖系统中死亡率最高的肿瘤，其中上皮性卵巢癌是最常见的卵巢恶性肿瘤，约占90%，平均5年生存率为30%～40%[1-2]。上皮性卵巢癌患者除了忍受各种治疗所带来的痛苦外，还要经历接受治疗后因雌激素降低所引起的围绝经期不适，如潮热多汗、烦躁失眠等。如何提高此类患者治疗后的生存质量问题日益受到重视。激素替代治疗(HRT) 应运而生，对这些患者实施HRT，可以缓解其生理和心理不适，提高其生活质量。但存在的问题是使用激素是否会增加卵巢癌复发、转移的风险尚不明确，其安全性问题一直受到关注。且多数妇科恶性肿瘤，如子宫内膜癌、乳腺癌等的发生发展与雌激素密切相关，因此，HRT[3-8]是否会增加肿瘤的复发和患者的病死率，一直是妇科肿瘤医生顾虑和担心的问题。

雌激素致肿瘤作用的确切机制目前尚不清楚，揭示雌激素介导的肿瘤发生途径，有助于从根本上解决雌激素的潜在致癌作用。本实验对上皮性卵巢癌裸鼠模型,分别给予苯甲酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液联合黄体酮注射液与注射用灭菌油剂，治疗21 天，发现苯甲酸雌二醇注射液组与对照组相比，注射苯甲酸雌二醇注射液组裸鼠模型肿瘤重量更重、肿瘤体积更大，肿瘤重量、肿瘤体积在两组间有显著性差异，而苯甲酸雌二醇注射液联合黄体酮注射液组与对照组相比无显著性差异。研究表明使用雌激素组促进上皮性卵巢癌裸鼠皮下移植肿瘤的生长，而雌孕激素联合组不增加裸鼠皮下移植肿瘤的生长。同时研究还发现3组肝、脾、网膜、淋巴结转移无统计学差异，表明组织转移与单用雌激素及雌孕激素联合应用无相关性。

我们在实验中采用放射免疫测定方法，检测裸鼠模型血清CA125值，结果发现3组用药前后血清 CA125值的比较无统计学差异，说明雌孕激素的干预对裸鼠模型血清CA125[9-10]的表达无影响。

此为动物实验，人和动物有物种差别，药物在鼠体内的代谢和人可能存在一定差异，但移植瘤是人上皮性卵巢癌，其结果接近人体情况[11]，本研究从肿瘤大体变化和分子生物学水平两个层次，为雌孕激素在卵巢癌患者中应用提供了研究基础。但需进行大样本前瞻性临床研究才能最后证实雌孕激素联合应用在卵巢癌患者中的安全性。

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(编辑：吴小红)

Analysis of Estrogen and Progesterone in Human Epithelial Ovarian Cancer

in Nude Mice Model

WANGYi,CHENJinshi,WEIWanxia,etal.JiangxiMaternalandChildHealthHospital,Nanchang，330006

【Abstract】ObjectiveTo study the estrogen and progesterone in human epithelial ovarian cancer xenograft in nude mice.Methods30 nude mice model of epithelial ovarian cancer were randomly divided into 3 groups,the estrogen group (group A) 10 rats,estrogen and progesterone combination group (group B) 10 rats，the control group (group C) 10 rats;3 groups received intramuscular injection of estradiol benzoate 0.06 ml,0.06 ml estradiol benzoate injection combined with progesterone injection 0.06ml,sterilization oil 0.06ml,respectively,administered every 3 days,and weight of nude mice,tumor volume and other indicators,blood serum tumor marker Ca125 after 3 weeks were measured and recorded.ResultsThere were statistical differences among the 3 groups in tumor weight and volume(P<0.05);There were no statistical differences among the 3 group s in nude body weight(P>0.05);There were no statistical differences among the 3 groups in liver,spleen,omentum,and lymph node metastasis(P>0.05);There were no statistical differences among the 3 groups in serum tumor marker Ca125 (P>0.05).ConclusionEstrogen can promote the growth of tumors in nude mice,estrogen and progesterone combined group does not increase tumor growth in nude mice,and does not change expression of serum tumor marker Ca125 level.

【Key words】Human epithelial ovarian cancer;Estrogen；Progesterone;Ca125

(收稿日期2014-09-09修回日期 2014-12-05)

中图分类号：R737.31

文献标识码：A

文章编号：1001-5930(2015)05-0633-03

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2015.05.001

通讯作者：李隆玉

基金项目：江西省自然科学基金(编号：20114BAB205013)
作者单位:330006 江西省妇幼保健院