绝经前后子宫内膜息肉芳香化酶表达的对比研究

孙淑红，王树鹤，孙艳斌，赵巧棉，吉海莲，于淑莉，徐金环，马秀芹

1.067000，河北省承德市妇幼保健院妇科;2.100700，北京军区总医院妇产科;3.067000,河北省承德市中心医院麻醉科

绝经前后子宫内膜息肉芳香化酶表达的对比研究

孙淑红1，王树鹤2，孙艳斌3，赵巧棉1，吉海莲1，于淑莉1，徐金环1，马秀芹1

1.067000，河北省承德市妇幼保健院妇科;2.100700，北京军区总医院妇产科;3.067000,河北省承德市中心医院麻醉科

子宫内膜息肉(endometrial polyps, EP)是妇科常见疾病。其病因和发病机制至今尚未明确。起初认为，EP的发病原因为炎性反应，但随着研究的深入，众多学者认为EP是一种与激素刺激，尤其是与雌激素增高密切相关的疾病[1]。绝经后，体内雌激素水平明显低于绝经前。据报道，绝经后EP的发生率并不低于绝经前[2]。临床病例分析也阐释了绝经前后不同生理阶段的EP在临床表现，EP的大小、数量等方面均存在不同[3]。由于绝经前后EP的恶变率不同[4]，所以考虑绝经前后EP的发生可能存在不同的机制。基于以前EP的激素刺激理论的研究，EP组织的雌激素检测确存在困难。为此，本课题组以子宫内膜局部雌激素合成的关键酶——芳香化酶为研究的出发点，对比分析绝经前后EP中芳香化酶的表达是否存在不同,以期进一步揭示EP的发病机制。

1对象与方法

1.1对象选取2013-01至2014-01在北京军区总医院因EP行宫腔镜手术，经石蜡病理诊断为EP病例40例，均满足BMI为13～25 kg/m2，无子宫内膜异位症及子宫肌瘤病史，至少3个月内未服用任何外源性激素。其中，绝经前组患者还符合以下条件：既往月经规律，无内分泌系统疾病史，为非功能性EP，且处于子宫内膜增生期，均选择月经干净3～7 d手术(因异常阴道流血月经周期不规律者剔除)。绝经后组需满足至少绝经1年以上。每组20例。对于满足以上筛选条件者，选绝经后EP组织为实验1组，绝经后EP患者的远离息肉的内膜组织为对照1组，绝经前EP组织为实验2组，绝经前EP患者的远离息肉的内膜组织为对照2组，每组20例。本研究经过本院伦理委员会批准，并签署知情同意书。

1.2试剂和仪器兔抗人 CYP19A1 多抗、Immuno-Bridge+二步法免疫组化检测试剂、DAB显色试剂盒(黄)，尼康E100型生物显微镜，佳能600D数码单反相机。

1.3实验方法采用免疫组化的方法检测子宫内膜及息肉中芳香化酶的表达。标本制作后在光镜下再次排除子宫内膜癌、内膜非典型增生，然后行芳香化酶表达量的检测。每例标本随机选取3张切片(1张进行指标检测，1张备用，1张阴性对照)。显微镜下放大400倍，随机选取5个视野拍照。芳香化酶表达的阳性区域染色为淡黄色至棕褐色。Image-Pro Plus 6.0图像分析软件进行图片分析,选取平均光密度值[平均光密度值=整张图片的累积IOD/(图片面积-空白面积)]为比较指标，以每例标本的5个视野的平均光密度值的均值代表每例标本的平均光密度值，作为最终比较指标。

2结果

2.1形态学比较无论绝经前后，芳香化酶在EP中均有较强表达，光镜下切片中受体阳性区域显色为黄色。实验1组表达最强，表达区域呈深褐色，集中分布于息肉腺体中(图1A)；实验2组呈浅棕色，集中分布于息肉腺体中(图1B)。对照1组腺体中，细胞核大浆少，仅细胞浆中少量表达芳香化酶，间质中可见大量的梭型细胞，基本无芳香化酶表达(图1C)；对照2组中芳香化酶呈低表达，且主要集中于腺体中(图1D)。

2.2光密度值比较实验1组和2组分别为0.1001±0.0140和0.0651±0.0098，前者大于后者，差异有统计学意义(t=9.16，P<0.01)；对照1组和2组分别为0.0269±0.0066和0.0342±0.0083，两组比较差异无统计学意义；实验1组和2组均远远高于相对应的对照1组和2组，差异有统计学意义(t=21.16，t=8.49，P均<0.01)。

3讨论

3.1EP的类型EP是指子宫内膜表面有蒂的良性结节状突起，镜下检查至少有灶状纤维化纤维性间质，间质中有厚壁、弯曲、扩张的血管。根据腺体的不同可分为：非功能性息肉、功能性息肉、腺肌瘤性息肉和老年萎缩性息肉4种类型。对于绝经前EP，非功能性EP对孕激素无反应，而持续对雌激素反应，因此大部分腺体呈不同程度的增生状态，息肉内的腺体和间质无周期性改变，与息肉外的周围内膜组织能够分辨出来；老年萎缩性息肉与绝经后子宫内膜不同，较少受卵巢功能的衰退而萎缩，较多表现为不同程度的增生。所以本实验绝经前组选择非功能性子宫内膜息肉与绝经后EP相比，更有比较的价值。

3.2EP的形成与雌激素密切相关目前认为，EP发生的可能机制有雌/孕激素受体(ER/PR)分布不均衡、细胞增殖/凋亡失衡、遗传因素、炎性刺激、蛋白表达异常、他莫昔芬等药物的影响，以及细胞因子的参与等[5]。雌孕激素对子宫内膜的增殖及分化起调节作用，对于不同的生理阶段，体内激素水平不同，子宫内膜的组织结构不同，所以，不同的生理阶段EP可能存在差异。对于绝经前后EP发病机制的研究发现，无论绝经前后，EP中雌激素受体的表达均明显高于相应生理阶段的子宫内膜中该受体的表达，而孕激素受体的表达在绝经前后却存在差异，绝经前EP中孕激素受体的表达低于相应生理阶段的子宫内膜中该受体的表达[6]，而绝经后EP中孕激素受体的表达明显高于绝经后内膜组织中该受体的表达[7]；绝经后EP中COX-2的表达明显高于绝经前EP中该蛋白的表达[8]，且有研究发现在绝经后EP及恶变的EP中COX-2呈高表达[9]。关于EP发病原因的系统回顾显示：外源性雌激素的增加、类雌激素的应用、非保护性的单一雌激素的激素替代[1]、内源性雌激素增加等因素均可诱发EP的形成。总之，EP的形成与雌激素密切相关。而芳香化酶，无论在体循环雌激素还是在子宫内膜局部雌激素形成中都发挥关键性作用。

3.3芳香化酶与EP的关系芳香化酶是细胞色素P450酶系的一种，由血红蛋白和酶蛋白构成,是CYP19 基因编码的产物,是细胞色素P450 产物中唯一由单基因编码的酶, 定位在染色体15q21.1,在不同的组织中可以有不同的转录起始点,调节不同组织P450arom 蛋白的表达[10]。芳香化酶在性腺组织中高表达，在性腺外的多种组织中呈低表达，随着研究的深入，发现在脂肪、乳腺、骨、子宫组织、血管中均存在芳香化酶的表达[11]。由于不同于性腺组织，这些组织缺乏胆固醇从头合成的关键酶——CYP17A1，所以循环中雄激素是这些组织原位雌激素合成的唯一来源[12]。芳香化酶是雌激素合成过程中最后一步限速酶，是催化雄烯二酮和睾酮转变为雌酮和雌二醇的关键酶，其数量和活性直接决定了正常和异常组织中雌激素的水平。芳香化酶的表达及其功能调节会使雌激素生成量发生显著变化，同时干扰局部或系统的雌激素水平[13]。

王伟娟等[14]对绝经后EP发病机制的研究发现，绝经后EP患者与非EP患者体循环雌激素水平无统计学差异，而子宫内膜局部雌孕激素受体的表达均高于远离息肉的内膜组织中的表达，因此考虑绝经后EP发生可能与子宫内膜局部雌激素形成有关。Biron等[15]同样证实，在64例绝经后服用TAM治疗子宫内膜息肉的乳腺癌患者中,体循环雌激素水平均在正常范围,提示绝经后子宫内膜息肉可能与子宫内膜局部的性激素水平有关。本实验对绝经后EP及内膜组织中芳香化酶表达进行对比发现，绝经后EP中芳香化酶的表达明显高于该生理阶段远离息肉的子宫内膜中的表达，进一步证明绝经后EP的发生可能与子宫内膜局部雌激素形成密切相关，而不依赖于体循环雌激素水平的增加。

对于绝经前患者，Maia等[16]研究了118例绝经前内膜息肉标本，发现息肉中芳香化酶 P450 的表达水平显著高于正常内膜组织。纪统慧等[17]对于绝经前子宫内膜息肉中芳香化酶表达的研究同样发现：绝经前子宫内膜息肉中芳香化酶的表达明显高于相同生理时期的子宫内膜组织中该酶的表达。本实验对绝经前EP与远离EP的内膜组织中该酶的表达进行对比研究，也同样发现绝经前EP中芳香化酶的表达明显高于该生理阶段子宫内膜中的表达，所以，无论绝经前后，EP中芳香化酶的表达均高于相应生理阶段的远离息肉的子宫内膜中该酶的表达，推测芳香化酶通过促进局部雌激素合成，在息肉形成过程中起关键性作用。

本实验发现，绝经后EP中芳香化酶的表达明显高于绝经前EP中该酶的表达，进一步说明绝经前后，子宫内膜局部合成的雌激素在息肉形成中参与的程度不同，绝经后EP可能更依赖于子宫内膜局部雌激素的合成。芳香化酶促进子宫内膜局部雌激素的合成有两条途径[18]：一是芳香化酶促进C19前体物质转化为雌激素，引起局部雌激素水平的升高；二是芳香化酶促进局部内膜中COX-2的表达，后者又促进局部内膜中前列腺素E2的生成。前列腺素E2进一步促进芳香化酶和雌二醇的生成，即在局部形成PGE2-芳香化酶-雌激素之间的正反馈循环。绝经后EP中芳香化酶的过表达，可以解释绝经后EP及恶性EP中COX-2的增高，且绝经后EP较绝经前EP的高恶变率可能与此有关。同样，关于绝经后EP局部雌孕激素受体的增高，推测与EP局部雌激素的形成、雌激素对局部雌孕激素受体的正性调节作用有关。

无论绝经前后，子宫内膜息肉中芳香化酶的表达均高于相应生理阶段的子宫内膜中的芳香化酶的表达；绝经前后子宫内膜息肉中芳香化酶的表达不同，说明绝经前后EP的发生可能存在不同的机制。

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(2014-12-10收稿2015-01-12修回)

(责任编辑武建虎)

【摘要】目的探讨绝经前后子宫内膜息肉芳香化酶表达的异同。方法选择临床诊断子宫内膜息肉且行宫腔镜手术的患者，按照是否绝经分为绝经前组及绝经后组，每组20例。绝经后组取其息肉组织为实验1组，取远离息肉的子宫内膜组织为对照1组；绝经前组取其息肉组织为实验2组，取远离息肉组织的子宫内膜组织为对照2组。采用免疫组化二步法和图像分析软件检测绝经前后子宫内膜息肉及远离息肉的内膜组织中芳香化酶的表达情况。结果实验1组和2组芳香化酶的表达分别为0.1001±0.0140和0.0651±0.0098，前者大于后者，差异有统计学意义(t=9.16，P<0.01)；对照1组和2组分别为0.0269±0.0066和0.0342±0.0083，两组比较差异无统计学意义；实验1组和2组均远远高于相对应的对照1组和2组，差异有统计学意义(t=21.16，t=8.49，P均<0.01)。结论无论绝经前后，子宫内膜息肉中的芳香化酶的表达均高于相应生理阶段的子宫内膜中该酶的表达；绝经前后子宫内膜息肉中芳香化酶的表达不同，绝经前后子宫内膜息肉的发生可能存在不同的机制。

【关键词】子宫内膜息肉；子宫内膜；芳香化酶；绝经前；绝经后；发病机制

【中国图书分类号】R711.7

Comparison of aromatase expression in endometrial polyps between premenopausal and postmenopausal period

SUN Shuhong1, WANG Shuhe2, SUN Yanbin3, ZHAO Qiaomian1, JI Hailian1, YU Shuli1, XU Jinhuan1, and MA Xiuqin1.1. Department of Gynecology, Chengde Maternal and Child Health Hospital of Hebei Province, Chengde 067000, China；2. Department of Gynecology and Obstetrics, Beijing Military Command General Hospital, Beijing 100700, China；3. Department of Anesthesiology, Chengde Central Hospital of Hebei Province, Chengde 067000, China

【Abstract】ObjectiveTo investigate the differences of aromatase expression in endometrial polyps between premenopausal and postmenopausal periods. MethodsAccording to menstrual status, the patients were divided into different groups: premenopausal group and postmenopausal group. According to the strict exclusion criteria, 20 patients were selected into each group. The postmenopausal endometrial polyps were sampled as the experiment group 1, while the postmenopausal remoteendometrial tissues not belonging to the polyp were sampled as the control group 1. The premenopausal endometrial polyps were sampled as the experiment group 2, while the premenopausal remote endometrial tissues not belonging to the polyp were sampled as the control group 2. All patients underwent hysteroscopic resection of endometrial polyps. Immunohistochemistry was used to detect the expression of aromatase in endometrial polyps and the remote endometrial tissues. Images were analyzed by using Image-Pro Plus 6.0 analysis software. The mean optical density values of aromatase expression were taken as comparison index. ResultsThe expressions of aromatase in experiment group 1 and group 2 were 0.1001±0.0140 and 0.0651±0.0098, the differences was statistically significant (t=9.16, P<0.01). The expressions of aromatase in control group 1 and group 2 were 0.0269±0.0066 and 0.0342±0.0083, the differences between two groups was no statistically significant. The expressions of aromatase in two experiment groups were higher than in two corresponding control groups, the differences were statistically significant (t=21.16, P<0.01; t=8.49, P<0.01). ConclusionsThe presence of aromatase expression is significantly higher in endometrial polyps than in endometriam, both in premenopausal and in postmenopausal period. The expression of aromatase in postmenopausal endometrial polyps is higher than in premenopausal endometrial polyps, so the pathogenesis of endometrial polyps may be different in the two different physiological stages.

【Key words】endometrial polyp；endometriam；aromatase；premenopausual；postmenopausal；pathogenesis

通讯作者：王树鹤，E-mail: haotongzhi8@sina.com

作者简介：孙淑红，硕士研究生，主治医师，E-mail: ssh.0213@163.com