奥沙利铂联合天晴甘美对人胃癌细胞体外增殖的影响

郭曼，赵园园，何信佳，于丽，张蕊，叶宝玲

(青岛大学附属医院，山东 青岛 266003； 1 肿瘤科； 2 检验科)



奥沙利铂联合天晴甘美对人胃癌细胞体外增殖的影响

郭曼1，赵园园1，何信佳1，于丽1，张蕊2，叶宝玲1

(青岛大学附属医院，山东 青岛 266003； 1 肿瘤科； 2 检验科)

目的 探讨奥沙利铂联合天晴甘美对人胃癌细胞SGC-7901体外增殖的影响。方法 培养人胃癌SGC-7901细胞株，分为对照组、奥沙利铂组、天晴甘美组及低、中、高剂量天晴甘美联合奥沙利铂组(简称低、中、高剂量联合组)。对照组给予葡萄糖处理，奥沙利铂组和天晴甘美组分别给予不同浓度的奥沙利铂(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L)和不同浓度的天晴甘美(2、4、8、16、32、64 μmol/L)处理，各联合组用4 mg/L奥沙利铂分别联合低、中、高剂量(2、8、32 μmol/L)的天晴甘美作用于细胞48 h，MTT法检测各组细胞增殖抑制率。结果 奥沙利铂组随着奥沙利铂剂量的增高，对肿瘤细胞的抑制作用逐渐增强；天晴甘美组中低剂量(2 μmol/L)的天晴甘美对胃癌细胞的增殖无明显抑制作用，较高剂量的天晴甘美表现出抑制胃癌细胞增殖的趋势，但抑制作用不明显；各剂量联合组中随着天晴甘美浓度的增加，对胃癌细胞的抑制作用明显增强。结论 天晴甘美能明显增强奥沙利铂对胃癌细胞株SGC-7901的增殖抑制作用，两者具有协同作用，且呈剂量依赖性。

甘草酸；奥沙利铂；胃肿瘤；细胞增殖

胃癌是我国常见的消化道肿瘤，中晚期胃癌以综合治疗为主，化疗是其主要的治疗手段之一[1]。奥沙利铂作为常用的化疗药物，其肝损伤作用严重影响病人的耐受性[2]。临床常用各种保肝药物来预防和治疗化疗性肝损伤，但其对化疗疗效的影响尚存有争议。天晴甘美是一种用来改善肝功能的国家一类新药，具有抗炎、保护肝细胞膜及改善肝损伤的作用，临床常用其治疗慢性病毒性肝炎、乙醇性肝损伤等[3]，对药物性肝损伤也有一定的治疗作用，但其是否会影响化疗药物的疗效尚无定论。本实验旨在探讨天晴甘美对奥沙利铂抗肿瘤作用的影响。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源

奥沙利铂购买自江苏恒瑞有限公司(国药准字H20000337)；天晴甘美购买自江苏正大天晴药业股份有限公司(国药准字H20051942)；人胃癌SGC-7901细胞由青岛大学医学院实验中心惠赠；四甲基偶氮唑盐(MTT)、二甲基亚砜(DMSO)和DMEM培养液购自美国Sigma公司；胎牛血清由杭州四季青有限公司提供。

1.2 细胞培养

将人胃癌细胞株SGC-7901培养于DMEM培养液(含体积分数0.10的胎牛血清、10 U/L青霉素及10 U/L链霉素)中，于37 ℃含体积分数0.05的CO2培养箱中培养。

1.3 分组及处理

取对数生长期的细胞制成单细胞悬液，调整密度为5×107/L，接种于96孔板中，每孔100 μL，分为对照组、奥沙利铂组、天晴甘美组及低、中、高剂量天晴甘美联合奥沙利铂组(简称低、中、高剂量联合组)，每组设6个平行对照孔。各组置于37 ℃体积分数0.05的CO2培养箱中培养24 h，使细胞贴壁。吸去上清液，对照组给予50 g/L葡萄糖200 μL处理，奥沙利铂组和天晴甘美组分别给予不同浓度的奥沙利铂(0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L)和不同浓度的天晴甘美(2、4、8、16、32、64 μmol/L)处理，各联合组用4 mg/L奥沙利铂分别联合低、中、高剂量(2、8、32 μmol/L)的天晴甘美处理，各组均作用细胞48 h，MTT法检测各组细胞增殖抑制率。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 各组细胞形态结构的变化

不同药物处理后，培养48 h，置于倒置显微镜下观察各组细胞形态变化。对照组细胞生长良好，排列密集，细胞呈圆梭形，大小较均匀，胞质丰富，核圆形；奥沙利铂组随着奥沙利铂浓度的增加，坏死、凋亡细胞数量增加，可见质膜崩解，核皱缩，脱落细胞增多；天晴甘美组有少量坏死细胞，并且随着天晴甘美浓度的增加，坏死细胞增多。联合组出现细胞皱缩、变形，坏死细胞脱落明显。

2.2 各组胃癌细胞增殖抑制率的变化

2.2.1 天晴甘美对肿瘤细胞的抑制作用 浓度为2、4、8、16、32、64 μmol/L天晴甘美的抑瘤率分别为(0.60±0.39)%、(1.18±0.61)%、(4.08±0.58)%、(6.14±0.34)%、(9.22±0.72)%与(9.92±1.05)%。除2 μmol/L天晴甘美组与对照组(0.00±0.01)%比较差异无显著性(P>0.05)外，其余各组与对照组比较差异均有统计学意义(F=210.55，q=4.33～33.85,P<0.05)；除2 μmol/L与4 μmol/L及32 μmol/L与64 μmol/L的天晴甘美组比较差异无显著性(P>0.05)外，天晴甘美其余各组间比较差异均有显著性(q=7.56～31.64,P<0.05)。

2.2.2 奥沙利铂对肿瘤细胞的抑制作用 0.5、1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 μmol/L奥沙利铂的抑瘤率分别为(9.66±1.82)%、(14.70±3.42)%、(22.06±1.99)%、(36.14±4.95)%、(51.38±3.79)%与(59.18±3.35)%。各浓度奥沙利铂组抑瘤率与对照组(0.00±0.01)%相比差异有均统计学意义(F=244.42，q=6.88～42.13,P<0.05)；奥沙利铂不同剂量组间抑瘤率比较差异均有统计学意义(q=3.59～35.25,P<0.05)。

2.2.3 联合组对肿瘤细胞的抑制作用 以4 mg/L的奥沙利铂和不同浓度天晴甘美(2、8、32 μmol/L)联合作用48 h,其抑瘤率分别为(41.44±4.53)%、(48.48±1.94)%、(55.60±6.65)%。各联合组两两比较差异均有显著性(F=10.98，q=3.29～6.63,P<0.05)。

3 讨 论

在我国，大部分胃癌发现时已是中晚期，对于进展期胃癌，化疗是提高疗效的重要手段[4]。在接受化疗的过程中，病人往往出现不同程度的肝脏损伤，这使得保肝药物在接受化疗的病人中应用较多[5]。奥沙利铂作为第3代铂类化合物，近年来较多地应用于胃肠道肿瘤的治疗[6]。多烯磷脂酰胆碱和硫普罗宁是临床常用的保肝药物，姜韬等[7]的体外实验研究表明，奥沙利铂与低浓度多烯磷脂酰胆碱可产生协同抗肿瘤作用，而与高浓度多烯磷脂酰胆碱却产生拮抗作用；王丹宁等[8]的裸鼠体内实验则显示，多烯磷脂酰胆碱对奥沙利铂化疗疗效有拮抗作用。赵东河等[9]研究显示，硫普罗宁对奥沙利铂的化疗疗效具有拮抗作用。研究显示，天晴甘美对CCl4引起的大鼠慢性肝损伤、D-氨基半乳糖引起大鼠急性肝损伤具有防治作用[10]。亦有研究显示，天晴甘美对化疗后肝功能异常疗效肯定，不良反应较少，值得在临床上推广应用[11]。但其与化疗药物联用时是否会影响化疗的疗效尚无定论。

本实验通过体外培养人胃癌细胞株SGC-7901，给予其单独应用天晴甘美、奥沙利铂及联合应用两药后，通过MTT实验方法检测细胞的增殖抑制率，实验中药物浓度的选择参照奥沙利铂的在体外的IC50及各药在临床应用时的血药浓度。本研究结果表明,随着奥沙利铂浓度的增加，其对人胃癌细胞株SGC-7901的抑制作用增强，且呈浓度依赖性。在一定的浓度范围内，天晴甘美具有抑制人胃癌细胞株SGC-7901增殖的作用，且呈浓度依赖性，但抑制作用不显著。各联合组比较显示，天晴甘美增强了奥沙利铂的抗肿瘤作用，且呈浓度依赖性，说明两者具有协同作用。这与杨波等[12]研究结果相似。此外，亦有研究显示，甘草酸及其衍生物具有促进多种肿瘤细胞凋亡及抑制增殖的作用[13]，并可能具有逆转肿瘤耐药的作用[14]。慢性炎症是肿瘤发生发展的重要因素，天晴甘美具有强大的抗炎作用，基于本实验得出的结论，我们考虑其与奥沙利铂表现出来的协同抗肿瘤作用可能与其抗炎作用有关。本研究在一定程度上为临床用药提供了参考，但鉴于体内环境的复杂性、多样化以及个体化，体内实验并不一定能够得出相同的结论。尚需对其作用机制进行进一步研究，以为临床用药提供可靠的依据。

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(本文编辑 厉建强)

EFFECT OF OXALIPLATIN COMBINED WITH MAGNESIUM ISOGLYCYRRHIZINATE ON PROLIFERATION OF GASTRIC CANCER CELLS IN VITRO

GUOMan,ZHAOYuanyuan,HEXinjia,YULi,ZHANGRui,YEBaoling

Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Qingdao University, Qingdao 266003, China)

ObjectiveTo explore the influence of oxaliplatin (OP) combined with magnesium isoglycyrrhizinate (MI) on proliferation of gastric cancer cells in vitro.MethodsSGC-7901 cell strain of human gastric cancer was cultivated and divided into six groups as: control group, OP group, MI group, and low-dose, medium-dose and high-dose MI+OP groups. The cells in the control group were managed with glucose, that in OP and MI groups were treated with different concentrations of OP-0, 0.5, 1.0, 2.0, 4.0, 8.0, and 16.0 μmol/L-and MI-2, 4, 8, 16, 32, and 64 μmol/L, respectively. That in combined MI+OP groups were treated with 4 mg/L OP and low-dose, medium-dose and high-dose of MI-2, 8 and 32 μmol/L, respectively, for 48 hours, the inhibition rates of the cells in each group were then detected using MTT assay.ResultsIn OP group, the inhibitory action on tumor cells gradually enhanced with the increase of OP dose; in low-dose MI group (2 μmol/L), the inhibitory action was not obvious, in higher-dose groups, there was a trend of enhancement, but not significant. In each combined MI+OP group, the inhibition notably enhanced with the increase dose of MI plus OP.ConclusionMagnesium isoglycyrrhizinate markedly strengthen the inhibition of oxaliplatin on proliferation of SGC-7901 strain of gastric cancer, both of them show synergetic effect and dose dependent.

glycyrrhizic acid; oxaliplatin; stomach neoplasms; cell proliferation

2015-04-02;

2015-06-16

郭曼(1989-)，女，硕士研究生。

赵园园(1965-)，女，博士，主任医师，硕士生导师。

R735.2

A

1008-0341(2015)05-0535-03