消肿止痛膏对角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型IL－1β、TNF－α炎症因子的影响＊

杨 进 胡彦伟 李彦民 陕西中医药大学附属医院骨科 （咸阳712000）

急性软组织损伤作为临床骨伤科常见疾病，如不及时治疗，轻者则出现迁延日久的慢性持续性疼痛，影响患者的肢体活动及功能的恢复，甚者导致患者自理能力受阻［1］。消肿止痛膏是我院创伤骨科基于急性软组织损伤“气滞血瘀”的基本病机特点，临床主要用于创伤引起的急性软组织损伤的早期。角叉菜胶诱导大鼠足肿胀模型是如今医学动物实验中常用的经典急性炎症模型，主要用于临床筛选和评价药物的抗炎作用和炎症机制的实验性研究［2］。本此研究主要通过建立角叉菜胶足肿胀模型评价消肿止痛膏的抗炎消肿作用，为消肿止痛膏广泛推广于临床提供实验基础。现将研究结果汇报如下。

1 材 料 1.1实验动物 成年的SD级大鼠84只，雌雄各半，体重200g±20g，由西安交通大学医学部实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（陕）2012－005。

1.2 药物和试剂 消肿止痛膏，由陕西中医学院附属医院制剂室提供；双氯芬酸钠凝胶（扶他林乳膏），由陕西中医学院附属医院提供（国药准字 H10900074）；角叉菜胶Sigma公司，批号：122k14456；IL－1β、TNF－αELISA 试剂盒，购自伊莱瑞特生物科技有限公司。

1.3 实验仪器 酶标仪，RT－6000，深圳雷杜生命科学股份有限公司；隔水式恒温培养箱，DHG－9140A型，上海一恒科技有限公司；离心机，KDC－40，科大创新股份有限公司中佳分公司；台式电子天平，FA1104，上海恒平科学仪器有限公司。

2 方 法 2.1 动物分组 实验动物在室温20～25℃，湿度40～70%的条件下，自由饮食常规适应性饲养1周。将64只大鼠称重后按照体重大小编号后，完全随机法将大鼠随机分为空白组、模型组、消肿止痛膏组、扶他林乳膏组，每组16只。

2.2 造模及给药 模型组大鼠给予凡士林赋形剂取适量外涂，1d1次；消肿止痛膏组给予消肿止痛膏外敷治疗，将消肿止痛膏取适量均匀涂抹于大鼠右足处，并用胶布固定，1d1次，如有脱落及时更换。扶他林乳膏组给予扶他林乳膏治疗，1d3次；空白组不做处理。各组用药均以完全包裹肿胀区域为度，各组疗程均为7d，7d后纯净水冲洗静每只大鼠右后腿相应药物，自然风干。

2.3 大鼠血清中IL－1β、TNF－α的测定 分别于致炎后3h、8h同时间内于消肿止痛膏组、扶他林乳膏组、模型组、空白组各随机选取8只动物，在无菌条件下腔静脉取血5mL，于抗凝管中，2500r／min转速离心5min，取血清4℃保鲜冰箱保存备用；采用酶联免疫吸附法（ELISA）对大鼠血清内IL－1β、TNF－α定量进行检测，具体操作按试剂盒说明书进行，终止反应后于450nm处读取吸光度值。

2.4 统计学方法 各组实验结果运用统计软件SPSS19.0统计分析，IL－1β及TNF－α含量数据均用均数加减标准差（±s）表示。对结果进行统计检验，若正态分布，方差齐，组间采用t检验；若方差不齐则采用单因素或非参数卡方检验，P＜0.05为有统计学意义。

3 结 果 3.1 各组大鼠3、8h血清内IL－1β、TNF－α含量检测结果 各组血清内IL－1β、TNF－α含量在致炎后各时相均高于空白组（P＜0.05）。各时相点各组血清内IL－1β、TNF－α含量均低于模型组，组间差异有统计学意义（P＜0.05）。消肿止痛膏组与扶他林乳膏组相比，3h消肿止痛膏组血清内IL－1β、TNF－α含量较扶他林乳膏组略高，两组间差异无明显统计学意义（P＞0.05）。8h消肿止痛膏组血清内IL－1β、TNF－α与扶他林乳膏组相比组间差异无统计学意义（P＞0.05）。结果见表1、2。

表1 致炎后3h各组大鼠IL－1β、TNF－α含量比较（±s，n＝8）

表1 致炎后3h各组大鼠IL－1β、TNF－α含量比较（±s，n＝8）

注：与空白组相比，△P＜0.05，与模型组相比，▲P＜0.05；与扶他林乳膏组相比，◆P＞0.05

组 别 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白组 82.17±3.13 96.80±6.31▲模型组 211.06±10.53 218.57±7.57△消肿止痛膏组 195.52±8.60 207.15±9.37△▲◆扶他林乳膏组 195.50±9.50 205.52±8.69△▲

表2 致炎后8h各组大鼠IL－1β、TNF－α含量比较（±s，n＝8）

表2 致炎后8h各组大鼠IL－1β、TNF－α含量比较（±s，n＝8）

注：与空白组相比，△P＜0.05；与模型组相比，▲P＜0.05；与扶他林乳膏组相比，◆P＞0.05

组 别 IL－1β（ng／L） TNF－α（ng／L）空白组 84.78±4.30 89.07±6.36◆▲◆模型组 120.69±11.68 133.19±14.34△消肿止痛膏组 84.74±4.30 94.37±5.91▲◆△扶他林乳膏组 83.64±7.62 93.64±5.83▲△

4 讨 论 消肿止痛膏是陕中附院创伤骨科依据中医药的基础理论及软组织损伤机理，总结临床及前辈经验，以活血化瘀为治疗准则，经过临床反复验证，不断加减运用配制出的临床经验方。消肿止痛膏主要以熟地、当归、川芎、赤芍、酒大黄、川乌、草乌、乳香、没药、三七、黄柏、苍术、香附、连翘、藏红花、冰片、蛰虫、骨碎补、自然铜为佐使药19味中药共同组成，急性软组织损伤其临床表现以红、肿、热、痛为主，其病因主要是外伤损伤血络，血溢脉外，形成瘀血阻滞，故本方以四物汤的熟地、当归、川芎、赤芍为君药主活血化瘀；以酒大黄、川乌、草乌、乳香、没药、苍术、香附、藏红花三七等温经通脉，活血行气药帮助君药行气、活血化瘀；瘀血阻脉，阻碍气机，气郁化热，所以临床损伤部位常见发热，红肿，故在治疗中配以黄柏、连翘清热兼以凉血止血，主要合用共为臣药；外伤出血，血溢脉外，故以寒凉之冰片凉血止血，其性辛香，又能活血，使血止而无留瘀之弊，蛰虫、骨碎补、自然铜为临床活血疗伤之常用药，可活血疗伤，生新接骨，共为佐使药；诸药合用具有活血止血，理气化瘀、止痛之功，临床疗效显著。中药外用是通过透皮吸收作用于创伤局部，从而维持局部相对稳定的血药浓度，起到、散瘀、消肿和止痛的功效［3］。急性软组织损伤的早期，现代研究表明其特点是微循环破坏出血以及急性炎症反应［4］，因此抑制微循环破坏导致的出血，促进微循环的恢复以及抑制炎症反应成为治疗的关键［5－6］。本实验表明消肿止痛膏可能是以减少或降低血清内IL－1β、TNF－α含量，减少炎症介质的释放，消除或改善损伤组织充血水肿，抑制炎症反应的发生发展，且具有与扶他林乳林膏相当的抗炎消肿效果。

［1］ 赵艺平，牛淑亮，窦群立.消肿喷剂促进急性软组织损伤修复66例［J］.陕西中医，2012，33（9）：1174－1175.

［2］ 朱 蕾，李 娟，武丹威，等.羟胺三唑对角叉菜诱导急性炎症的抗炎作用［J］.中国临床药理与治疗学杂志，2013，6（4）：601－605.

［3］ 章建华，丁伟国.三黄软膏外敷治疗大鼠急性软组织损伤的实验研究［J］.中医正骨，2012，22（3）：6－9.

［4］ 章建华，丁伟国.消肿定痛散湿敷治疗急性软组织损伤147例［J］.光明中医，2012，27（10）：2007－2008.

［5］ 肖百全，朱少璇，杨 威，等.芍药甘草汤对角叉菜诱导的炎症相关指标时序性变化的研究 ［J］.中国实验与方剂学杂志，2013，6（4）：601－605.