不同辅料蒸制对滇黄精化学成分含量的影响*

戴万生，赵声兰，朱智芸，曹冠华，张鹏慧，许兆熙

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

不同辅料蒸制对滇黄精化学成分含量的影响*

戴万生，赵声兰，朱智芸，曹冠华，张鹏慧，许兆熙

(云南中医学院，云南 昆明 650500)

目的 研究不同辅料蒸制对滇黄精化学成分含量的影响，探讨滇黄精蒸制的辅料。方法 采用紫外分光光度法测定滇黄精不同辅料蒸制(清蒸、酒蒸、黑豆蒸、熟地蒸、蜂蜜蒸、蔓荆蒸)品中还原糖、小分子总糖、多糖和总皂苷的含量，并按药典方法测定其浸出物含量，以此综合评分比较。结果 6个指标综合评分从大到小依次为：蜂蜜蒸(93.47)>熟地蒸(90.80)>酒蒸(89.86)>清蒸(89.59)>蔓荆蒸(79.67)>黑豆蒸(78.82)>生品(55.27)。结论 滇黄精蒸制时应优先选用蜂蜜、熟地汁和黄酒。

滇黄精；辅料；蒸制；综合评价

黄精为百合科黄精属植物滇黄精(Polygonatum kingianum Coll.Et Hemsl.)黄精(Polygonatum sibiricum Red.)或多花黄精(Polygonatum cyrtonema Hua.)干燥根茎，根据其形状，分别习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精为药食两用中药，味甘，性平，归脾、肺、肾经。具有养阴润肺，补脾益气，滋肾填精的功能。黄精主要含有多糖、低聚糖、皂苷、氨基酸、黄酮、蒽醌等活性成分，具有广泛的药理作用和保健功能，其中黄精多糖具有调节免疫、延缓衰老、降血糖、降血脂等药理作用，黄精小分子糖有增强免的作用，黄精总皂苷具有降血糖、增强免疫、抗肿瘤、改善学习记忆等药理作用[1-2]。黄精生用“刺人咽喉”，故多炮制后食用或药用，通过炮制可消除其麻味，减轻对咽喉的刺激，增强补脾润肺益肾的功效，炮制过程中常加入一定量的辅料起解毒、增效、影响药物药性等作用。目前，主要的炮制方法为酒蒸法(2010版《中国药典》收载法)，研究报道较多，但从历代文献和各省、市、自治区炮制法规看，应用辅料除黄酒外，还有黑豆、蜂蜜、蔓荆子、熟地等多种辅料，其研究鲜有报道[3-4]。本文以滇黄精为原料，研究加不同辅料蒸制对其水浸出物、乙醇浸出物、还原糖、多糖、总皂苷等成分的影响，并对其进行综合评分比较，以优选蒸制滇黄精的辅料，为滇黄精炮制方法和工艺的制定提供参考。

1 仪器和材料

UV-1800PC紫外可见分光光度计(翱艺仪器(上海)有限公司)，CP214电子天平(奥豪斯仪器(上海)有限公司)，SK3300型超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)，无水葡萄糖(天津市风船化学试剂科技有限公司)，人参皂苷Rbl(南京都莱生物技术有限公司，批号RSZGB2P20140712)，其余试剂均为分析纯。

黄精(购自云南绿生药业有限公司，经云南中医学院赵荣华教授鉴定为滇黄精Polygonatum kingianum Coll.Et Hemsl.的根茎。)

2 实验方法

2.1 样品的炮制及制备

2.1.1 生黄精 取黄精片，除去杂质，70 ℃干燥，粉碎，过40目筛，备用。

2.1.2 蒸黄精 取净黄精片200 g 6份，分别置适宜的容器内，加入不同辅料(水、黄酒、蜂蜜、黑豆汁、熟地汁、蔓荆汁，均按净黄精片20%量加入)及适量水拌匀，浸润过夜，置蒸制容器内蒸24 h，取出，70 ℃干燥，粉碎，过40目筛，备用。

2.2 浸出物的含量测定 取粉碎过筛后的黄精样品约4 g，精密称定，按《中国药典》2010版一部附录XA项下热浸法[5]，用蒸馏水、稀乙醇作溶剂，测定水溶性浸出、醇溶性浸出物，结果见表2。

2.3 糖类成分的含量测定

2.3.1 葡萄糖对照溶液的配制 取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品55.0 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1mL中含无水葡萄糖1.1mg)。

2.3.2 苯酚溶液的配制[6]精密称取2.5 g 苯酚，用蒸馏水溶解并定容于50 mL 棕色量瓶中。

2.3.3 DNS 溶液的配制[6]称取0.650 g 3，5-二硝基水杨酸(DNS)，以50 mL蒸馏水溶解并转移至100 mL棕色量瓶中，加入32.5 mL 的2 mol/L的NaOH 溶液，再加入4.5 g 丙三醇，以蒸馏水定容，即得。

2.3.4 供试品溶液的制备 精密称取黄精粉末各1.0 g，置250 mL烧瓶中，加80 %乙醇100 mL，水浴回流提取1 h，过滤，滤渣用80 %乙醇洗2次(每次约10 mL)，合并滤液，挥尽乙醇，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，摇匀后用于还原糖和小分子总糖含量测定。

药渣挥干乙醇后，用100 mL水回流提取1 h，过滤，残渣用水洗二次，合并滤液，转移至250 mL量瓶中，加水至刻度，用于总多糖的测定。

2.3.5 还原糖测定标准曲线 精密量取1.1 mg/mL葡萄糖对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，加入蒸馏水至4 mL，再分别加入5 mL 的DNS 溶液，混匀后置沸水浴中煮沸6 min，冰水冷却至室温，加水至刻度，以空白管为对照，在540 nm 处测定吸光度[6-7]。以吸光度(A)为纵坐标，葡萄糖浓度(μg·mL-1)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0081X+0.0007(r=0.9995)，结果表明无水葡萄糖在22 ～ 132μg·mL-1范围内具有良好的线性关系，用于DNS 法测定还原糖。

2.3.6 总糖、多糖测定标准曲线 精密量取1.1mg/mL 的葡萄糖对照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 mL，分别置于50 mL量瓶中，加水至刻度，然后分别量取上述稀释后的不同浓度的葡萄糖对照品溶液1mL于10 mL 具塞刻度试管中，加入蒸馏水至2 mL，混匀，再加入1 mL的5% 苯酚溶液和7 mL的浓硫酸溶液，摇匀，静置5 min，水浴加热20 min，冰水冷却至室温，以空白管为对照，在490 nm 测定吸光度[6-7]。以吸光度(A)为纵坐标，葡萄糖浓度(μg·mL-1)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0594X-0.0554(r=0.9995)，结果表明无水葡萄糖在2.2 ～ 13.2μg·mL-1范围内具有良好的线性关系，用于苯酚-硫酸法测定总糖、多糖。

2.3.7 样品的测定 取滇黄精炮制品，按2.3.4项下方法制成供试品溶液，除生品不稀释外，分别精密量取供试液1.0 mL稀释到50 mL，精密量取4 mL，按照标准曲线项下的方法自“再分别加入5 mL 的DNS 溶液”起操作，测定吸光度，计算还原糖含量，结果见表1。

取滇黄精炮制品，按2.3.4项下方法制成供试品溶液，分别精密量取供试液1.0 mL稀释到50 mL，精密量取1 mL，按照标准曲线项下的方法自“加入蒸馏水至2 mL”起，测定吸光度，计算小分子总糖含量，结果见表1。

取滇黄精炮制品，按2.3.4项下方法制成供试品溶液，分别精密量取供试液0.5 mL，按照标准曲线项下的方法自“加入蒸馏水至2 mL”起操作，测定吸光度，计算多糖含量，结果见表1。

表1 不同辅料炮制黄精糖类成分含量测定结果(n=3)

注：非还原性低聚糖=小分子总糖-还原糖，总糖=小分子总糖+多糖。

2.4 总皂苷含量测定

2.4.1 标准曲线制备 称取人参皂苷Rbl标准品11.3 mg于小烧杯中，加甲醇溶解并定容至10 mL，作为标准液。吸取该标准液40，80，120，160，200 μL，置于具塞刻度试管中，挥尽溶剂，加入0.2 mL5%香草醛一冰醋酸溶液(新鲜)，冰浴时加入0.8 mL高氯酸，摇匀，60 ℃水浴加热15 min后，冰浴2 min，加入5 mL冰醋酸，摇匀，静置5 min，于550 nm处测定吸光值(A)[8]。以吸光度(A)为纵坐标，人参皂苷Rbl的质量(μg)为横坐标进行回归处理，得回归方程：Y=0.0036X+0.0024(r=0.9992)，结果表明人参皂苷Rbl在45.2～ 226μg范围内具有良好的线性关系。

2.4.2 供试液制备 称取干燥黄精炮制品粉末1.00 g，加入14倍量水饱和正丁醇，40 ℃超声提取50 min，提取2次，合并滤液至25 mL量瓶中，加水饱和正丁醇定容，摇匀，备用[9]。

2.4.3 样品测定 吸取供试液100 μL，挥干溶剂，按2.4.1显色，于550 nm波长处测定吸光度，计算总皂苷含量(%)，结果见表2。

2.5 数据处理及综合评分 以滇黄精浸出物、还原糖、小分子总糖、多糖、总皂苷含量为指标，采用综合评分法评定。评分时以各指标的实验最大值为参照将数据进行归一化处理，再根据各指标成分重要性和炮制工艺特性，给予浸出物含量加权系数为0.3，糖类成分含量加权系数为0.4，总皂苷含量加权系数0.3，以行归一化处理后的数值加权求和后，即得综合评分，其关系式：(水浸出物含量/水浸出物含量最大值+醇浸出物含量/醇浸出物含量最大值)/2×30+(还原糖含量/还原糖含量最大值+小分子总糖含量/小分子总糖含量最大值+多糖含量/多糖含量最大值)/3×40+(总皂苷含量/总皂苷含量最大值)×30。结果见表2。

表2 不同辅料炮制滇黄精综合评分结果

注：括号内为归一化处理后数值。

3 结果与讨论

浸出物含量测定结果表明不同辅料蒸制滇黄精水溶性浸出、醇溶性浸出物差异不大，但与生品比较，其增加明显，说明黄精蒸制后能增加有效成分的煎出，从而增强疗效。

糖类成分是滇黄精中含量最高的成分，在相同条件下蒸制后，熟地蒸品和蜂蜜蒸品的总糖含量明显增加，这可能与所用加辅料熟地汁和蜂蜜的糖含量较高有关，而其他制品与生品对照，总糖不变或略有增加；蒸制后多糖含量下降，但不同辅料蒸制品之间差别不明显；还原糖含量增加，非还原性低聚糖含量下降，不同辅料蒸制品之间差别明显。不同辅料蒸制后多糖、还原糖、非还原性低聚糖之间质量比不同，不同炮制品之间是否存在一定的功效差异，有待于的进一步深入研究。

甾体皂苷是滇黄精的主要活性成分之一，初步研究表明滇黄精蒸蒸制后总皂苷含量增加，酒蒸>清蒸>熟地蒸、蜂蜜蒸>黑豆蒸>蔓荆蒸，为生品的5～7倍，这可能是滇黄精炮制后补益作用增强的原因之一。

采用多指标综合评价，蜜蒸滇黄精得分最高为93.47，其它炮制品依次为：熟地蒸(90.80)>酒蒸(89.86)>清蒸(89.59)>蔓荆蒸(79.67)>黑豆蒸(78.82)>生品(55.27)。从滇黄精有效部位、有效成分及综合得分考察，蜂蜜为蒸制滇黄精首选辅料，其次为熟地汁、黄酒，但不同辅料蒸制滇黄精方法的优劣有待进一步综合其药性-药效的研究。

[1]陈兴荣，王成军，李龙星，等.滇黄精的化学成分及药理研究进展[J].时珍国医国药，2002，13(9)：560-561.

[2]杨云，王爽，冯云霞，等.黄精中小分子糖对小鼠免疫功能的影响[J].中国组织工程研究与临床，2009，13(18)：3447-3450.

[3]钟凌云，龚千锋，张的凤，等.黄精炮制研究现状分析[J].中药材，2007，30(12)：1618-1621.

[4]吴建华，张涓，崔於.黄精炮制工艺的研究进展[J].川北医学院学报，2013，28(1)：27-30.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京：中国中医药科技出版社，2010：288，附录XA.

[6]张志君，孙伟，李永亮，等.3，5-二硝基水杨酸法联合苯酚-浓硫酸法测定不同产地黄精中多糖含量[J].中国实验方剂学杂志，2012，18(6)：106-109.

[7]蓝松.苯酚-硫酸法测定黄精多糖含量研究[J].广东化工，2013，40(18)：132-133.

[8]尤新军，郭蕊，王琳，等.黄精总皂苷超声提取工艺研究[J].西北林学院学报，2010，25(3)：163-166.

[9]秦枫，刘靖，陈玉勇，等.三七总皂苷含量测定方法及超声提取工艺研究[J].安徽农业科学，2008，36(8)：3062-3064.

Effect of Different Excipient Steamed Processes on Polygonatum Chemical Composition

DAI Wan Sheng, ZHAO Sheng-lan, ZHU Zhi-yun, CAO Guan-hua, ZHANG Peng-hui, XU Zhao-xi

(YunnanUniversityofTraditionalMedicine,Kunming650500,Yunnan)

Objective: To study the effect of different excipient steamed processes on Polygonatum chemical composition and to explore its steamed excipients. Methods: UV spectrophotometry was used to determine the contents of sugar, small molecule total sugars, polysaccharides and total saponins processed by different excipient steamed processes (steamed with clear water, wine, black beans, foxglove, honey and vitex trifolia) and the contents of its extractions were measured according to Pharmacopeia. On this account, composite scores were compared. Results: 6 index composite scores were graded in decreasing order: honey steaming (93.47)> foxglove steaming (90.80)> wine steaming (89.86)> clear water steaming (89.59)> vitex trifolia steaming (79.67)> black beans steaming (78.82)> crude product (55.27). Conclusion: Polygonatum should be steamed preferentially with honey, foxglove juice and wine.

Polygonatum, excipient, steaming, comprehensive evaluation

云南中医学院重点学科资助项目(NO：XK201325)。

戴万生(1967-)，男，硕士研究生，副教授，研究方向：中药炮制及功能食品研发，E-mail：daws1967@126.com。

R284.2

A

1007-2349(2015)07-0070-03

2015-03-16)