PSA、TNF⁃α及Bax⁃α在前列腺癌中的表达

薛晓婕 程勇

PSA、TNF⁃α及Bax⁃α在前列腺癌中的表达

薛晓婕 程勇

目的 探讨前列腺特异性抗原（PSA）、肿瘤坏死因子α（TNF⁃α）及B细胞淋巴瘤基因⁃2相关x蛋白（Bax⁃α）与前列腺癌的关系。 方法 选取前列腺癌患者30例（Ⅰ期12例、Ⅱ期8例、Ⅲ期5例、Ⅳ期5例），正常对照20例，采用电化学发光仪检测患者空腹PSA，放射免疫法测定TNF⁃α，免疫组织化学SP法检测Bax⁃α蛋白的表达，分析Bax⁃α的表达与前列腺癌组织临床病理学特征的关系。 结果 前列腺癌中Bax⁃α的阳性率高于正常组织（P＜0.01），前列腺癌患者的临床分期越高、有淋巴结转移者Bax⁃α的阳性率越高（P＜0.01）；Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者PSA水平以及Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期患者的TNF⁃α水平均明显高于正常对照者。 结论 Bax⁃α在细胞凋亡调节中起着重要的作用，其过度表达在前列腺癌的发生、发展中扮演着重要的角色。联合检测Bax⁃α、PSA和TNF⁃α水平的变化对前列腺癌的诊断、治疗和预后判断均具有一定的临床价值。

前列腺癌；前列腺特异性抗原；肿瘤坏死因子α；B细胞淋巴瘤基因⁃2相关x蛋白

由男性重要的性腺器官前列腺引起的疾病在不同的年龄阶段有不同的特点，老年人多为前列腺增生（benign prostate hyperplasia，BPH）及前列腺癌（prostate cancer，PCa）。随着年龄的增加，PCa的发病率呈明显增加的趋势，PCa是男性泌尿生殖系最常见的肿瘤。应用前列腺特异抗原（prostatic specific antigen，PSA）进行大规模PCa筛查，是目前早期诊断PCa的最有效方法，但其对PCa的早期诊断仍有一定困难和偏差，容易漏诊。分子生物技术的发展已经证明PCa的发生和发展是多种癌基因和抑癌基因共同作用的结果，本研究通过联合检测PSA和TNF⁃α的浓度以及Bax⁃ α蛋白的表达，探讨3者在PCa的发生发展过程中的作用，为临床诊断提供更多的依据。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集黄石市中心医院病理科2010～2013年经明确诊断的PCa患者30例，年龄50～70岁，平均（54.9±0.27）岁，收集全部组织标本。患者术前均未行放疗、化疗及生物治疗；按国际抗癌联盟2010年TNM分期标准进行临床分期：Ⅰ期12例、Ⅱ期8例、Ⅲ期5例、Ⅳ期5例。同期收集有组织学标本的正常对照20例，家族无肿瘤病史，所有组织液氦保存。

1.2 血标本采集方法 无抗凝的采血管采集肘静脉全血4 ml，室温静置1 h凝固，然后4℃、2000 r／min离心10 min，取出上层血清，分装于聚丙烯EP管中，置－80℃冰箱保存待测。

1.3 主要试剂 RPMI1640培养液、小牛血清购自Gibco公司；鼠抗人Bax⁃α单克隆抗体购自日本MBL公司；羊抗鼠IgG／HRP购自美国Proteintech Group公司；化学发光试剂盒购自德国Roche公司。

1.4 细胞培养 以含10%胎牛血清的1640培养基，于37℃、5%CO2孵箱内培养，每2～3 d传代1次，用于检测Bax⁃α蛋白的表达。

1.5 指标检测方法

1.5.1 血清PSA测定：使用德国罗氏P800全自动生化分析仪检测患者血清中的PSA，采用电化学发光方法，标本均为同批测定，以上检测均受控于卫生部临检中心、湖北省临检中心的室间质评。

1.5.2 血清TNF⁃α检测：采用放射免疫分析方法，试剂盒由厦门新创生物科技有限公司提供，操作按说明书。

1.5.3 Bax⁃α蛋白检测：采用链霉菌抗生物素蛋白⁃过氧化酶连接（SP）免疫组织化学方法。每例标本解冻后经10%甲醛固定24 h内行石蜡包埋，石蜡包埋组织后4 μm连续切取切片，常规脱蜡水化，PBS冲洗。高温修复抗原，冷却至室温，PBS冲洗2次，3 min／次，滴加一抗，4℃孵育过夜。PBS冲洗，滴加生物素标记的二抗。室温下孵育15 min，PBS冲洗，联苯二胺（DAB）显色5 min，苏木索复染，脱水，透明，封片。

1.6 Bax⁃α蛋白结果判定 在组织切片中显示胞核或胞浆染为淡黄至黄棕色者为阳性细胞标志。凡显色强度与背景无明显差别者为阴性。

1.7 统计学处理 所有结果均取自1次代表性实验，结果被3次独立实验所证实。所测数据用均数±标准差（¯x±s）表示，以SPSS 13.0统计软件进行处理，2组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Bax⁃α的表达与PCa患者临床病理特征的关系Bax⁃α表达阳性染色主要定位于肿瘤细胞胞浆中，为粗细不一的棕黄色颗粒。正常前列腺组织中Bax⁃α基因表达微弱；Ⅰ期12例PCa组织标本中，1例Bax⁃α的表达呈阳性，占8.33%。Ⅱ期8例中4例Bax⁃α的表达呈阳性，占50%。Ⅲ期、Ⅳ期标本中Bax⁃α的表达均为强阳性，随PCa临床分期的增加，Bax⁃α阳性率增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。有淋巴结转移病人Bax⁃α阳性率高于无淋巴结转移者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。见表1。

表1 PCa患者临床病理特征与Bax⁃α表达的关系（n，%）

2.2 正常人和PCa患者血清PSA和TNF⁃α含量比较

Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者PSA含量均高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）；Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期、Ⅳ期患者TNF⁃α含量也高于正常对照组，差异有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）。见表2。

表2 正常对照组和PCa患者血清PSA和TNF⁃α含量比较（¯x±s）

3 讨论

PSA是由前列腺上皮细胞分泌产生的一种丝氨酸蛋白酶，直接分泌到前列腺导管系统内，它的正常功能是帮助精液凝块水解液化，与男性生育功能有关［1］。正常的前列腺导管系统周围存在血⁃上皮屏障，能避免前列腺上皮产生的PSA直接进入血液之中，从而维持了血液中PSA的低浓度。一般认为，血清PSA浓度＜4 ng／ml为正常，＞10 ng／ml则患PCa的危险性增加。当前列腺发生癌变时可破坏血⁃上皮屏障，同时癌细胞分泌的PSA增多，致使更多的PSA直接进入血液内［2］。目前临床用于PCa诊断最广泛的分子标志物是PSA，在临床上已将其作为PCa的一个重要的筛查指标［3］。大多数PCa病人血清PSA水平超过正常值，已成为重要的PCa肿瘤标记物，目前具有很好的PCa诊断预测率，有助于低分级、小病灶的早期发现与诊断。但它并不是一个特异性的肿瘤标记物，当其浓度在4～10 μg／L时存在一定比例的假阴性、假阳性的病例［4］。TNF⁃α是激活的单核巨噬细胞及脂肪细胞分泌的一种细胞因子，研究表明，败血症、恶性肿瘤、心力衰竭和慢性炎性疾病患者血清TNF⁃α水平升高。Bcl⁃2是细胞凋亡过程中的一类调节因子，此基因家族包含2类功能相反的基因，一类是抑制细胞凋亡的基因Bcl⁃2、Bcl⁃XL、Bcl⁃w、Bfl⁃1、Brag⁃1、Mcl⁃1和A1等，另一类是促进细胞凋亡的基因Bax、Bak、Bok、Bcl⁃Xs、Bad、Bid、Bik、Blk和Hrk等。Bax⁃α过表达可促进细胞色素C的释放，使正常细胞原癌基因激活，受病毒感染的机会增加，导致细胞恶性转化；另外也延缓了肿瘤细胞凋亡，增加恶性细胞数量［5］。

本研究将不同分化程度的PCa患者血清中PSA、TNF⁃α的含量和Bax⁃α蛋白的表达与正常对照者的血清联合进行比较，结果显示PCa（Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期）患者血清PSA、TNF⁃α和Bax⁃α蛋白表达均显著高于正常对照组，但当PCa在Ⅰ期时，按照血清PSA浓度＜4 ng／ml为正常时，仅仅通过检测PSA含量难以将其与正常对照组区分开，PSA用于检测PCa缺乏特异性。因此，同时将PSA、TNF⁃α和Bax⁃α蛋白进行联合检测，可明显提高对PCa诊断的准确性，提高了PCa诊断的灵敏度和特异性，减少病人不必要的活检，为PCa疾病诊断、治疗、预后观察提供临床价值。

［1］ 华立新，乔迪，宋宁宏，等.应用前列腺特异抗原筛查诊断前列腺癌的临床意义［J］.中华肿瘤杂志，2009，31（9）：705⁃709.

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［3］ 赵旭宏，田野，靳胜，等.前列腺增生的尿液蛋白质组学分析［J］.首都医科大学学报，2009，30（3）：277⁃281.

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Expression of Bax⁃α，PSA and TNF⁃α in prostate cancer

XUE Xiao⁃jie．
Department of Clinical Laboratory，Huangshi Central Hospital，Huangshi 435000，China；CHENG Yong．Huangshi Center for Disease Control，Huangshi 435000，China

Objective To explore the relationship between prostatic specific antigen（PSA），tumor necrosis factor⁃α（TNF⁃α），Bax⁃α and prostate cancer. Methods The serum PSA levels were detected by electro⁃chemiluminescence，TNF⁃α examined by RIA，and immunohisto⁃chemical method was used to detect the expression of Bax⁃α in the prostate cancer tissue of 30 cases and 20 healthy persons. Results The expression of Bax⁃α in the patients with prostate cancer was significantly higher than that in healthy persons（P＜0.01）.The expression of Bax⁃α was related with clinical stage，me⁃tastasis in lymph node in prostatic patients（P＜0.01）.The concentration of TNF⁃α in stageⅠ、Ⅱ、ⅢandⅣand PSA in stageⅠ、Ⅱ、ⅢandⅣpatients was significantly higher than that in control group（P＜0.05 or P＜0.01）. Conclusions Bax⁃α is correlated with the modulation of proliferation in the development of prostate cancer.The over⁃expression of Bax⁃α plays an important role in the development of prostate cancer.Detection of serum PSA，TNF⁃α and Bax⁃α level shows clini⁃cal value for diagnosis，treatment and prognosis prediction of prostate cancer.

prostate cancer；prostatic specific antigen；TNF⁃α；Bax⁃α

R 737.25

A

10.3969／j.issn.1003⁃9198.2015.03.012

2014⁃02⁃26）

435000湖北省黄石市，黄石市中心医院检验科（薛晓婕）；435000湖北省黄石市，黄石市疾病预防控制中心（程勇）

程勇，Email：715309678＠qq.com