黄芩药材多指标综合评价的研究△

刘征辉，魏静娜，赵琳琳，马西兰，郭永泽，程奕*

(1.天津海世达检测技术有限公司，天津 300381；2.天津市现代中药质量检验中心，天津 300381；3.天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津 300381)

黄芩药材多指标综合评价的研究△

刘征辉1，2，魏静娜1，2，赵琳琳1，2，马西兰1，2，郭永泽3，程奕3*

(1.天津海世达检测技术有限公司，天津 300381；2.天津市现代中药质量检验中心，天津 300381；3.天津市农业质量标准与检测技术研究所，天津 300381)

目的：建立黄芩药材中4种活性成分(黄芩苷，汉黄芩苷，黄芩素，汉黄芩素)薄层鉴别及高效液相色谱同时定量的方法。方法：以CPACELL PAK C18色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，流动相甲醇-0.1%磷酸溶液洗脱，测定波长275 nm，柱温30 ℃，流速1.0 mL·min-1。结果：4种成分的线性关系良好，精密度、稳定性、重复性的RSD均低于3.0%，加样回收率为95.4～98.3%。结论：该方法简便、灵敏、准确，可用于黄芩药材的质量控制。

高效液相色谱；黄芩药材；黄芩苷；汉黄芩苷；黄芩素；汉黄芩素

黄芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)属唇形科植物，主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、山东、河北、山西、河南、陕西、甘肃、内蒙古等地，其入药部位为根。据药典记载黄芩味苦性寒，有泻火解毒、清热燥湿、抗炎镇痛、止血安胎等功能，对暑温胸闷呕吐、肺热咳嗽、血热妄行、高热烦渴、湿热下痢等具有良好功效。目前《中国药典》及文献大多采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量[1-5]。由于黄芩中的功效成分主要为黄酮类，而黄酮类成分在储存过程中也会相互转换，且各成分均具有清热解毒活性，药典标准仅以黄芩苷一种成分来衡量其质量有一定片面性，故试验采用HPLC 同时测定黄芩药材中4 种活性成分的含量。该方法简单快速，重复性好，可作为黄芩药材的质量控制方法，也为相关制剂质量标准的提高提供参考依据。

1 仪器与试药

Waters Alliance 2695-2996高效液相色谱仪，CAMAG薄层分析系统，分析电子天平(METTLER AB 54)。黄芩苷(110715-200514)，黄芩素(111595-200604)，汉黄芩素(111514-200403)均购于中国药品生物制品检定所；汉黄芩苷(20 mg；98%)，购于天津金测分析技术有限公司。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为超纯水。黄芩药材(2年生，3年生，4年生，5年生)，采收于2013年9月份，由中国药材集团承德药材有限责任公司提供(恒温恒湿存放于公司标本室)，经张学文主任中药师鉴定为承德产热河黄芩。

2 室验方法的建立

2.1 薄层鉴别方法的建立

取本品粉末1.0 g，加乙酸乙酯-甲醇(3∶1)混合溶液20 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2.0 mL使溶解，取上清液作为供试品溶液。另取黄芩对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。取黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg、0.5 mg、0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取项下的供试品溶液与上述对照品溶液各2 μL，分别点于同一聚酰胺薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(10∶3∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯365 nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应位置上，显相同颜色的斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显3个相同的暗色斑点。具体薄层色谱图见图1。

1.黄芩药材；2.黄芩药材；3.黄芩苷；4.黄芩素；5.汉黄芩素；6.黄芩对照药材。图1 黄芩薄层色谱图

2.2 液相色谱条件的建立

2.2.1 色谱条件 色谱柱：CPACELL PAK(5 μm，250 mm×4.6 mm)，PDA检测器(190 nm～400 nm)，流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液(49∶51)；流速1.0 mL·min-1；检测波长275 nm，进样量10 μL，柱温：30 ℃。

2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取汉黄芩素、黄芩素、黄芩苷、汉黄芩苷3.80 mg、3.48 mg、3.04 mg、3.63 mg于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容到刻度，作为对照品储备液。精密吸取的储备液各1 mL，置5 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，即对照品混合溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 称取2年生、3年生、4年生、5年生的黄芩干燥粉末0.306 1 g、0.308 8 g、0.307 4 g、0.303 5 g，分别加70%乙醇溶液60 mL回流提取3 h，冷却，过滤，滤液置100 mL容量瓶中，用少量70%乙醇分次洗涤滤纸和残渣，洗液并入100 mL量瓶中，用70%乙醇溶液定容至刻度，即得供试品溶液。

分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件测定，不同生长年限的黄芩的液相色谱图如图2所示。

2.3 线性关系考察

分别精密量取对照品储备液0.1、0.5、1.0、2.0、4.0、5.0 mL置于25 mL 棕色量瓶中，加体积分数50%甲醇稀释至刻度，摇匀，即得系列对照品溶液。分别取10 μL平行进样测定3 次，以峰面积平均值A 对进样量C(μg)进行线性回归，得回归方程，见表1。

表1 指标成分标准曲线列表

a2年生；b3年生；c4年生；d5年生；e混标。图2 不同生长年限黄芩药材的指标性成分比较

2.4 精密度试验

精密吸取混合对照品溶液10 μL，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次，测得黄芩苷，汉黄芩苷，黄芩素，汉黄芩素峰面积RSD 分别为0.37%、0.19%、0.45%、0.21%(n=6)，其RSD均小于3.0%，表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取同一批次的供试品溶液，室温下放置，分别于制备后0、3、6、9、12、15 h进样测定。结果黄芩苷，汉黄芩苷，黄芩素，汉黄芩素峰面积RSD 分别为0.97%、1.35%、0.96%、1.43%(n=6)，表明供试品溶液在15 h内稳定。

2.6 重复性试验

取同一批次样品，照“2.2.3”项下方法，平行制备6份供试品溶液，分别进样测定，结果黄芩苷，汉黄芩苷，黄芩素，汉黄芩素平均含量分别为14.7%、1.0%、0.37% 及0.10%，RSD分别为1.35%、0.98%、1.24%、1.11%(n=6)，表明本法重复性良好。

2.7 回收率试验

取已知含量的同批次本品6份，每份0.15 g，精密称定，分别精密添加含黄芩苷对照品溶液20.0 mL，汉黄芩苷对照品溶液10.0 mL，黄芩素对照品溶液5.0 mL，汉黄芩素对照品溶液1.0 mL，照“2.2.3”项下方法制备回收率用供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件测定，进样测定峰面积并计算回收率，结果平均回收率分别为97.4%、98.3%、96.9%、95.4%，RSD为1.25%。

3 试验结果与分析

3.1 一般指标

按照中国药典对黄芩药材所含水分、灰分和浸出物进行分析测定，得到黄芩的这些指标均符合中国药典2010年版一部黄芩标准的相关规定，并且这些一般指标与年份关系不大。其结果如表1所示。

表2 不同生长年限黄芩指标性成分列表 %

3.2 有效成分测定结果

表3 样品测定结果 %

由表3可知，黄芩药材中有效成分的含量基本上是按照年份的增加而增加，可见生长年限越长功效成分含量相对也越高。

4 讨论

4.1 检测波长的选择

采用二极管阵列检测器在190～380 nm内分别扫描混合对照品溶液中黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素的色谱峰紫外吸收。其最大吸收波长分别为277.2、273.7、274.9、274.9 nm(如图3所示)，故设定检测波长275 nm。

4.2 流动相的考察

试验过程中以甲醇-0.1%磷酸溶液分离黄芩药材中黄芩苷，汉黄芩苷，黄芩素，汉黄芩素四个活性成分，参照文献色谱条件[6-8]，适当调节流动相比例至(49∶51)，上述4 种成分得到较好分离效果。

图3 各指标性成分的紫外吸收图

4.3 多指标同时定量

《中国药典》黄芩项下其质量控制是单独测定黄芩苷，由于黄酮类成分在在一定环境下会相互转换，药典标准单以黄芩苷来衡量其质量有一定片面性，本试验采取液相色谱法同时测定黄芩药材中4种活性成分[9-10]。本方法较药典方法所控制指标更全面合理，为黄芩药材质量标准的提高研究提供技术依据。市面上以黄芩为原料的中成药[11-15]较多，但均以黄芩苷单一成分来控制。多指标成分同时定量是中药质量标准提高研究的主要方向，本试验方法正是实现了这一目标，将可以广泛应用与这类中成药中以综合评价其质量。

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Multi-indexComprehensiveEvaluationofRadixScutellariae

LIU Zhenghui1，2，WEIJingna1，2，ZHAOLinlin1，2，MAXilan1，2，GUOYongze3，CHENGYi3*

(1.TianjinHigh-standardQualityTestingLab.，Tianjin300081，China；2.TianjinCenterforQualityTestingofTCM，Tianjin300081，China；3.TianjinInstituteofAgricuLturalQualityStandardandTestingTechnology，Tianjin300381，China)

Objective：：To establish a method for quantitative determination of four active ingredients(baicalin，wogonoside，baicalein，wogonin)in Radix Scutellariae by TLC and HPLC.Methods：The chromatographic separation was achieved on a CPACELL PAK C18column(5 μm，250 mm×4.6 mm)，the mobile phase was methanol -0.1% phosphate acid aqueous solution at a flow rate of 1.0 mL·min-1，the detection wavelength was 275 nm，and the column temperature was 30 ℃.Results：The established method showed a good linear relationship for four components，the RSD were less than 3.0%，recovery was 95.4%～98.3%.Conclusion：The method is simple，sensitive，accurate and can be used for quality control of Radix Scutellariae.

HPLC；Radix Scutellariae；Baicalin；Wogonoside；Baicalein；Wogonin

2014-09-16)

十二五国家科技支撑计划项目(2011BAI07B04)，华北地区黄芩规范化种植基地优化升级及系列产品综合开发研究。

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程奕，研究员，主要从事农产品、土壤肥料及中药检测及科研工作；Tel：(022)23678678，E-mail：cychengyi99@126.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.008