HPLC测定复方银杏叶刺梨胶囊中银杏黄酮醇苷的含量△

尹红卫，潘苏华

(1.南京中医药大学 药学院，南京 210023；2.上海卡乐康包衣技术有限公司，上海 201108)

HPLC测定复方银杏叶刺梨胶囊中银杏黄酮醇苷的含量△

尹红卫1，2，潘苏华1*

(1.南京中医药大学 药学院，南京 210023；2.上海卡乐康包衣技术有限公司，上海 201108)

目的：建立复方银杏叶刺梨胶囊银杏黄酮醇苷的HPLC测定方法。方法：色谱柱为汉邦C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50)；流速为1.0 mL·min-1；检测波长为360 nm；柱温为30 ℃。结果：槲皮素、山柰素、异鼠李素分别在12.8～63.8 μg·mL-1、12.9～64.4 μg·mL-1、2.6～13.2 μg·mL-1线性关系良好，平均回收率槲皮素为99.48 %，山柰素为102.69%，异鼠李素为100.15 %。结论：该测定方法简便易行、准确性好、灵敏度高、重复性好，可用于复方银杏叶刺梨胶囊中银杏黄酮醇苷的质量控制。

复方；银杏叶刺梨胶囊；黄酮醇苷；含量测定

近年来，高血脂并发症有逐年上升的趋势，高甘油三酯血症作为高血脂中最常见的类型愈加被重视。目前降甘油三酯(TG)首选贝特类，但此类药易引起转氨酶升高、腹泻、急性肝损伤等诸多不良反应。国外研究早就发现银杏叶制剂有较好的降TG的作用，但是其中含有毒性物质银杏酸(GA)，口服偶见有恶心、呕吐等胃肠道不良反应或过敏反应[1]，市场缺乏安全有效的降TG药物。复方银杏叶刺梨胶囊采用具有健脾消食、保肝护肝的刺梨与银杏叶提取物配伍，能有效降低银杏酸的毒副作用[2]，更加有利于高血脂症等老年性疾病的预防和治疗。本研究采用HPLC对复方银杏叶刺梨胶囊中的槲皮素、山柰素和异鼠李素3种银杏叶萜黄酮醇苷进行定量分析，目的是建立一个能够有效控制该胶囊内在质量的方法，以利于临床更广泛、更安全地使用。此方法简单快捷，结果准确，专属性强，可用于复方银杏叶刺梨胶囊的质量控制。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Agilent 1100 series高效液相色谱仪(G1311二元高压梯度泵、G1329B脱气机、1290 Infinity 二极管阵列检测器、7693A自动进样器，美国Agilent 公司)；AG285电子天平(0.01 mg，METTLER，SWITERLAND)；KQ-250DB型数显超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；电热恒温水浴锅(上海浦东荣丰科学仪器有限公司)；TGL-16C台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。

1.2 材料

对照品槲皮素、山柰素、异鼠李素(中国食品药品检定研究院，批号分别为0081-9304，110861-200606，110860-200407；含量分别为98.1%，98.3%，98.4%)；银杏叶提取物(江苏富伟生化制品有限公司，批号：130616)；甲醇、盐酸(AR，南京化学试剂有限公司，批号分别为060614871，061130589)；重蒸水(娃哈哈饮用纯净水)；磷酸(AR，上海久亿化学试剂有限公司，批号：20130320)；明胶空心胶囊(药用级，安徽黄山胶囊股份有限公司，批号：20130408)；复方银杏叶刺梨胶囊(自制，批号分别为20140104，20140111，20140123)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50)；检测波长为360 nm；柱温为30 ℃；流速为1.0 mL·min-1；进样量为10 μL，理论板数按槲皮素峰计算不得低于2500。

2.2 对照品溶液的制备

分别精密称取对照品槲皮素(quercetin，Q)6.38 mg、山柰素(kaempferol，K)6.44 mg、异鼠李素(isorhamnetin，I)1.32 mg置100 mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，得槲皮素、山柰素、异鼠李素质量浓度分别为63.8、64.4、13.2 μg·mL-1的标准储备液，4 ℃冰箱保存备用。

2.3 供试品溶液的制备

取复方银杏叶刺梨胶囊内容物1 g，精密称定，加甲醇30 mL溶解，再加25%盐酸溶液5 mL，置90 ℃水浴加热回流30 min，迅速冷却至室温，转移至50 mL量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，于12 000 r·min-1离心15 min后即得，备用。

2.4 阴性对照溶液的制备

按处方比例制备不含银杏叶提取物的阴性样品，按照2.3方法制备阴性对照溶液。

2.5 专属性试验

精密量取槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品溶液，供试品溶液，阴性对照品溶液各20 μL，分别注入高效液相色谱仪，结果见图1。可见供试品与槲皮素、山柰素、异鼠李素对照品相应位置有吸收，而阴性对照无吸收，表明其他成分对银杏黄酮醇苷的测定无干扰。

1.槲皮素；2.山柰素；3.异鼠李素A.混合对照品；B.复方银杏叶刺梨胶囊供试品；C.刺梨阴性供试品。图1 专属性试验HPLC图谱

2.6 线性关系考察

分别精密吸取2.2的槲皮素、山柰素、异鼠李素标准储备液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL于5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，各对照品溶液分别进样10 μL，记录峰面积。以峰面积为纵坐标，质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程分别为槲皮素：Y=13 547X+1.947 6，r=0.999 9；山柰素：Y=12 593X-7.085 7，r=0.999 7；异鼠李素：Y=13 447X-2.933 3，r=0.999 4。结果表明槲皮素在12.8～63.8 μg·mL-1，山柰素在12.9～64.4 μg·mL-1，异鼠李素在2.64～13.2 μg·mL-1与峰面积线性关系良好。

2.7 精密度试验

取2.2标准储备液，按2.1色谱条件连续进样6次，测定槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积的RSD分别为0.38%、0.69%、2.31%，表明仪器的精密度良好。

2.8 稳定性试验

取复方银杏叶刺梨胶囊(批号：20140104)内容物，按2.3方法制备供试品溶液，分别在供试品溶液制备后0、2、4、6、8、10 h进样，测定峰面积。结果槲皮素、山柰素、异鼠李素峰面积的RSD分别为1.87%、0.68%、1.17%，表明供试品溶液在室温条件下放置10 h内基本稳定。

2.9 重复性试验

取复方银杏叶刺梨胶囊(批号：20140104)内容物，平行6份，按2.3方法分别制备供试品溶液，依法测定，结果复方银杏叶刺梨胶囊中槲皮素、山柰素、异鼠李素的质量分数分别为8.72 mg·g-1、5.68 mg·g-1、1.28 mg·g-1，RSD分别为1.7%、1.5%、1.8%，表明该方法重复性良好。

2.10 加样回收试验

精密称取复方银杏叶刺梨胶囊(批号：20140104)内容物约0.36 g，共6份，加入槲皮素对照品溶液(63.8 μg·mL-1)12 mL、山柰素对照品溶液(64.4 μg·mL-1)8 mL、异鼠李素对照品溶液(13.2 μg·mL-1)9 mL，按2.3方法制备供试品溶液，按2.1色谱条件测定峰面积，计算回收率，结果槲皮素的平均回收率为99.48%，RSD值为2.74%；山柰素的平均回收率为102.69%，RSD值为1.35%；异鼠李素的平均回收率为100.15%，RSD值为2.81%，表明该方法的准确度良好。加样回收率数据见表1～3。

表1 槲皮素的回收率考察

表2 山柰素回收率考察

表3 异鼠李素回收率考察

2.11 样品测定

取3批复方银杏叶刺梨胶囊(批号分别为20140104，20140123，20140111)，按2.3方法制备供试品溶液，依法进样并测定槲皮素、山奈素、异鼠李素的峰面积，依照《中华人民共和国药典》2010版规定，银杏黄酮醇苷含量=(槲皮素含量+山柰素含量+异鼠李素含量)×2.51[3]。结果见表4。

表4 复方银杏叶刺梨胶囊中银杏黄酮的含量测定结果(n=3)

3 讨论

本试验中银杏总黄酮醇苷的含量测定是通过3个黄酮单体的含量换算而来的。银杏叶提取物中大部分黄酮苷类化合物的水解产物为槲皮素、山柰素、异鼠李素3种黄酮苷元，刺梨汁粉水解产物中黄酮苷类成分主要是以杨梅素、槲皮素、山柰素为母核的黄酮苷元[4-5]。复方银杏叶刺梨胶囊中刺梨的用量较低[6]，比较发现阴性制剂中刺梨水解后生成的槲皮素等成分含量极低，经测定其含量小于各待测成分含量的1%，对复方银杏叶刺梨胶囊中银杏叶总黄酮醇苷的含量测定产生的干扰可忽略。

本研究参考《中华人民共和国药典》2010版一部，银杏叶项下总黄酮苷含量测定方法，以甲醇-0.4%磷酸水溶液(50∶50)为流动相测定复方银杏叶刺梨胶囊中总黄酮醇苷含量，各成分的分离效果良好，符合中药质量分析要求。

试验结果表明，该方法简便可行，灵敏度高，重复性好，可为复方银杏叶刺梨胶囊的质量控制提供参考。

[1] 王琛，李昌煜.银杏叶提取物药理作用研究新进展[J].中国现代中药，2009，11(3)：10-12.

[2] 潘苏华，吴丽.复方银杏叶制剂配伍减毒初步研究[J].南京中医药大学学报，2007，23(6)：389-390

[3] 国家药典委员会，中华人民共和国药典：一部[S]北京，中国医药科技出版社，2010：904-905.

[4] 邓朝晖.HPLC法测定复方银杏叶胶囊中总黄酮醇苷的含量[J].解放军药学学报，2008，24(3)：249-250.

[5] 李利锋，孙国祥.银杏叶片HPLC定量指纹图谱和4个成分含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2014，20(12)：52-56.

[6] 董玉中，潘苏华，张丽.HPLC法比较与不同比例刺梨汁配伍前后银杏酸的含量变化[J].黑龙江医药，2009，22(5)：601-602.

DeterminationofflavonolglycosidesinCompoundGinkgoandRosaroxburghiicapsule

YIN Hongwei1，2，PANSuhua1*

(1.NanjingUniversityofChineseMedicine，Nanjing210023，China；2.ShanghaicoloronCoLtd，Shanghai201108，China)

Objective：To determine the content of flavonol glycosides in Compound Ginkgo and Rosa roxburghii capsule.Methods：The HPLC method was established for the determination of the flavonol glycosides in Compound Ginkgo and Rosa roxburghii capsule.The HPLC was performed on Hanban C18(4.6 mm×200 mm，5 μm)column，mobile phase consisted methanol -0.4% phosphoric acid(50∶50).column temperature 30 ℃，and flow rate was 1.0 mL·min-1.The detection wavelength was 360nm.Results：A good linearity was obtained in the range of 12.8-63.8 μg·mL-1of quercetin，12.9-64.4 μg·mL-1of kaempferide and 2.6-13.2 μg·mL-1of isorhamnetin.The average recovery rates of quercetin，kaempferide and isorhamnetin were 99.48%，102.69 % and 100.15 %，respectively.Conclusion：The established method is simple，accurate and sensitive，and suitable for quality control of Compound Ginkgo and Rosa roxburghii capsule.

Compound；Ginkgo and Rosa roxburghii capsule；flavonol glycosides；determination

2014-10-14)

江苏高校优势学科建设工程资助项目(2011ZYX6-010)

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潘苏华，教授，硕士研究生导师；研究方向：中药药理及保健产品研发，E-mail：13851664089@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.1.014