老年非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体基因突变情况及其与切割修复交叉互补基因1表达的相关性

张利诚

(武警浙江省总队嘉兴医院呼吸科，浙江　嘉兴　314000)



老年非小细胞肺癌组织中表皮生长因子受体基因突变情况及其与切割修复交叉互补基因1表达的相关性

张利诚

(武警浙江省总队嘉兴医院呼吸科，浙江嘉兴314000)

目的探讨老年非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表皮生长因子受体(EGFR)基因突变情况及其与切割修复交叉互补基因(ERCC)1表达的关系。方法选择老年NSCLC患者150例作为研究对象，采用PCR技术检测老年NSCLC组织中EGFR基因突变和ERCC1基因表达水平。结果150例老年NSCLC组织中EGFR基因突变62例，突变率为41.3%，外显子21和外显子19突变率分别为18.7%和18.0%。老年NSCLC组织中，男性EGFR基因突变率低于女性(P<0.05)，吸烟患者EGFR基因突变率低于非吸烟患者(P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突变率高于非腺癌患者(P<0.05)，有肿瘤家族史患者EGFR基因突变率高于无肿瘤家族史患者(P<0.05)，不同TNM分期患者EGFR基因突变率比较有差异(P<0.05)。EGFR基因突变型ERCC1高表达率低于EGFR基因野生型(P<0.05)。结论老年NSCLC患者EGFR基因突变以外显子21和外显子19突变为主，性别、吸烟、腺癌、肿瘤家族史、TNM分期为EGFR基因突变的影响因素，EGFR基因突变者ERCC1基因表达量低。

非小细胞肺癌；表皮生长因子受体基因；基因突变

手术治疗是非小细胞肺癌(NSCLC)最有效的治疗方法，但有部分肺癌患者发现时已为肺癌晚期，或者已经有远处转移，使其失去了手术机会，而化疗和放疗的治疗效果有限，分子靶向药物的出现为NSCLC的治疗提供了新的治疗方法，表皮生长因子受体(EGFR)-酪氨酸激酶抑制剂(TKI)类药物对NSCLC的治疗作用越来越受到关注，EGFR-TKI类药物治疗是否有效的基础为EGFR基因突变，在治疗之前进行EGFR基因突变检测具有重要意义。研究发现NSCLC组织中存在EGFR基因突变情况〔1～3〕，EGFR基因突变和切割修复交叉互补基因(ERCC)1基因水平有一定关系〔4～6〕。本文对老年NSCLC组织中EGFR基因突变情况进行研究，并探讨其影响因素及其与ERCC1表达水平的相关性。

1　资料与方法

1.1研究对象选择2010年1月至2013年12月我院65岁以上经病理证实的老年NSCLC患者150例，年龄(74.25±3.28)岁，男61例，女89例，吸烟77例，腺癌104例，有肿瘤家族史45例，淋巴结转移64例，TNM分期Ⅰ期71例、Ⅱ期42例、Ⅲ期37例。所有患者签署知情同意书，经我院伦理委员会同意；所有患者手术前均未进行放疗或者化疗治疗。

1.2主要试剂和仪器人EGFR基因突变检测试剂盒(美国Sigma公司)，ERCC1基因表达量检测试剂盒、DNA提取试剂、RNA提取试剂(Qiagen公司)等；荧光定量PCR仪(Stratagene公司)，紫外线分光光度计(Thermo公司)等。

1.3病史及标本收集收集患者的年龄、性别、吸烟史、肿瘤家族史、肺癌类型、TNM分期、淋巴结转移等临床资料。将150例手术患者术中切除的肺癌组织标本经甲醛溶液固定，送检验科，石蜡包埋备用。

1.4EGFR基因突变检测将肺癌组织石蜡包块切成厚5 μm切片，提取DNA，提取DNA的纯度和浓度用紫外分光光度计进行测量，将DNA浓度稀释为10 ng/μl。根据EGFR基因突变试剂盒说明书步骤检测肺癌组织DNA中EGFR基因突变情况，经PCR扩增后，收集荧光信号，荧光定量PCR分析软件对结果进行分析。结果判定：老年NSCLC组织中检测到突变位点有扩增，且CT值≤35时为阳性；35

1.5ERCC1基因表达检测将老年NSCLC组织切片切成厚10 μm切片，常规进行RNA提取。将提取得到的老年非小细胞肺癌组织RNA进行逆转录反应，加入ERCC1基因表达量检测试剂盒中ERCC1基因表达量检测试剂，并根据试剂盒说明书进行荧光定量扩增，收集荧光信号，在PCR仪中输出ERCC1基因表达量。以β-actin基因为内参，△Ct>4.3为ERCC1基因高表达，△Ct≤4.3为ERCC1基因低表达。

1.6统计学方法采用SPSS20.0软件进行t及χ2检验。

2　结　果

2.1老年NSCLC组织中EGFR基因突变情况150例老年非小细胞肺癌组织中EGFR基因突变62例，突变率为41.3%，其中外显子21和外显子19突变率比较高，突变率分别为18.7%和18.0%，外显子18、外显子20和双突变的突变率比较低，分别为2.7%、1.3%和2.0%。

2.2老年非小细胞肺癌组织中EGFR基因突变的影响因素老年NSCLC组织中，男性EGFR基因突变率低于女性(29.2% vs 59.0%,χ2=13.257,P=0.000)，吸烟患者EGFR基因突变率低于非吸烟患者(31.2% vs 52.1%,χ2=6.741,P=0.009，P<0.05)，腺癌患者EGFR基因突变率高于非腺癌患者(51.9% vs 17.4%,χ2=15.684,P=0.000)，有肿瘤家族史患者EGFR基因突变率高于无肿瘤家族史患者(64.4% vs 31.4%,χ2=14.160,P=0.000)，不同TNM分期患者EGFR基因突变率比较差异有统计学意义(Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期分别为54.9%、33.3%、24.3%，χ2=9.573,P=0.008)，有淋巴结转移和无淋巴结转移患者EGFR基因突变率比较差异无统计学意义(37.5% vs 44.2%,χ2=0.676,P=0.411)。

2.3EGFR基因突变型和野生型ERCC1表达情况EGFR基因突变型ERCC1基因表达量低于EGFR基因野生型(21.36±9.75 vs 49.21±12.42,t=6.365,P=0.003)。EGFR基因突变型ERCC1高表达率低于EGFR基因野生型〔30.6%(19/62) vs 60.2%(53/88)，χ2=12.753,P=0.000〕。

3　讨　论

EGFR基因由28个外显子组成，长约118 kb，EGFR基因的外显子18～24是编码酪氨酸激酶功能的区域，这些区域存在一定的基因突变，这些基因突变区域和EGFR-TKI类药物的治疗效果关系密切，其中EGFR基因最常见的突变是外显子21和外显子19的突变〔7，8〕。郑军等〔9〕发现214例NSCLC组织中EGFR基因突变98例，突变率为45.8%，其中外显子19的突变率为22.0%，外显子21的突变率为20.6%。本研究也发现老年NSCLC组织中外显子21和外显子19的突变率比较高，和郑军等〔9〕的研究结果也一致，表明老年NSCLC和非老年NSCLC患者肺癌组织中EGFR基因突变情况相似。

因EGFR-TKI类药物对非小细胞肺癌的治疗效果和EGFR基因突变有关，因此研究EGFR基因突变的影响因素具有重要意义。近年来不少学者对NSCLC患者肺癌组织中EGFR基因突变的影响因素进行研究，但研究结果不完全一致，不少研究发现NSCLC患者中女性患者、非吸烟者、腺癌患者EGFR基因突变率比较高〔9～11〕，郑军等〔9〕研究发现NSCLC患者中女性患者的EGFR基因突变率为57.0%，男性为36.0%，女性患者的EGFR基因突变率高于男性患者，有淋巴结转移非小细胞肺癌患者的EGFR基因突变率高于无淋巴结转移患者，而EGFR基因突变率和NSCLC患者的临床分期、肿瘤分级以及患者的年龄无显著相关性。王殿军等〔11〕研究认为NSCLC患者EGFR基因突变和患者的性别、年龄、腺癌、分期和淋巴结转移均无相关性，吸烟患者的EGFR基因突变率高于非吸烟患者。各研究结果之间存在差异可能和病例选择例数少有关，但大多数研究认为女性、腺癌和非吸烟患者的EGFR基因突变率较男性、非腺癌、吸烟患者的EGFR基因突变率高。

ERCC1基因在DNA损伤修复和剪切方面具有重要作用，和铂类化疗药物的治疗效果有一定关系，近年来不少研究发现ERCC1基因水平和EGFR基因突变有关，EGFR基因突变非小细胞肺癌患者的ERCC1基因表达量较EGFR基因野生型者低〔12～14〕。本研究表明老年NSCLC患者EGFR基因突变和ERCC1基因之间存在一定关系，因此考虑EGFR突变型老年NSCLC患者可能对铂类化疗药物比较敏感，铂类化疗药物对EGFR突变型老年NSCLC患者的治疗效果可能比较好。

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2成志强，王晓玫，贺黎升，等.应用特异性突变抗体检测人非小细胞肺癌组织中EGFR突变〔J〕.临床与实验病理学杂志，2014；30(5)：531-4，539.

3Berge EM，Doebele RC.Re-examination of maintenance therapy in non-small cell lung cancer with the advent of new anti-cancer agents〔J〕.Drugs，2013；73(6)：517-32.

4Mlak R，Krawczyk P，Ramlau R，etal.Predictive value of ERCC1 and RRM1 gene single-nucleotide polymorphisms for first-line platinum-and gemcitabine-based chemotherapy in non-small cell lung cancer patients〔J〕.Oncol Rep，2013；30(5)：2385-98.

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6Yamashita F，Azuma K，Yoshida T，etal.Prognostic value of EGFR mutation and ERCC1 in patients with non-small cell lung cancer undergoing platinum-based chemotherapy〔J〕.PLoS One，2013；8(8)：e71356.

7Mu X，Zhang Y，Qu X，etal.Ubiquitin ligase Cbl-b is involved in icotinib (BPI-2009H)-induced apoptosis and G1 phase arrest of EGFR mutation-positive non-small-cell lung cancer〔J〕.Biomed Res Int，2013;2013：726375.

8Zou Y，Ling YH，Sironi J，etal.The autophagy inhibitor chloroquine overcomes the innate resistance of wild-type EGFR non-small-cell lung cancer cells to erlotinib〔J〕.J Thorac Oncol，2013；8(6)：693-702.

9郑军，谢贵元，李姣，等.非小细胞肺癌EGFR基因突变的临床意义研究〔J〕.中国肿瘤临床，2014；30(14)：904-7.

10Boch C，Kollmeier J，Roth A，etal.The frequency of EGFR and KRAS mutations in non-small cell lung cancer (NSCLC)：routine screening data for central Europe from a cohort study〔J〕.BMJ Open，2013；3(4):pii：e002560.

11王殿军，梁乃新，莫敏俐，等.非小细胞肺癌患者EGFR基因突变与ERCC1基因表达水平间的关联〔J〕.中国卫生检验杂志，2012；22(1)：56-9.

12Ren S，Chen X，Kuang P，etal.Association of EGFR mutation or ALK rearrangement with expression of DNA repair and synthesisgenes in never-smoker women with pulmonary adenocarcinoma〔J〕.Cancer，2012；118(22)：5588-94.

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14Krawczyk P，Wojas-Krawczyk K，Mlak R，etal.Predictive value of ERCC1 single-nucleotide polymorphism in patients receiving platinum-based chemotherapy for locally-advanced and advanced non-small cell lung cancer-A pilot study〔J〕.Folia Histochem Cytobiol，2012；50(1)：80-6.

〔2015-03-06修回〕

(编辑安冉冉/曹梦园)

张利诚(1966-)，男，主任医师，主要从事呼吸病学研究。

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A

1005-9202(2016)17-4234-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.048