DNA拓扑异构酶Ⅱα在乳腺癌中的表达*

杨良权, 周东光, 娄欢欢, 毛大华

(1.秦皇岛市妇幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇岛　066000； 2.秦皇岛市开发区医院 外科, 河北 秦皇岛　066004； 3.贵州医科大学附院， 贵州 贵阳　550004)

DNA拓扑异构酶Ⅱα在乳腺癌中的表达*

杨良权1, 周东光1, 娄欢欢2, 毛大华3

(1.秦皇岛市妇幼保健院 乳腺科, 河北 秦皇岛066000； 2.秦皇岛市开发区医院 外科, 河北 秦皇岛066004； 3.贵州医科大学附院， 贵州 贵阳550004)

[摘要]目的： 分析DNA拓扑异构酶Ⅱα(TOPⅡα)在乳腺癌中的表达。方法： 收集141例病理确诊的乳腺癌组织，采用免疫组织化学的方法检测癌组织中TOPⅡα的表达，分析TOPⅡα表达与乳腺癌患者年龄、家族史、月经状况、肿瘤大小、有无淋巴结转移及病理分级的关系，观察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B样型、B-like型，HER2表达型及三阴性)乳腺癌中的表达。结果： TopⅡα表达水平与乳腺癌患者的年龄、家族史、月经状况、肿瘤大小及是否有淋巴结转移无关(P>0.05)，与乳腺癌病理分级有关(P<0.05)，随肿瘤组织学分级越高，TopⅡα表达水平越高；TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表达型和三阴性乳腺癌患者中明显高表达，在Luminal A型和B样型中低表达。结论： TopⅡα表达水平与乳腺癌病理分级及分子分型有关。

[关键词]乳腺肿瘤； DNA拓扑异构酶Ⅱα； 基因表达； 免疫组织化学

近年来，乳腺癌在我国的发病率迅速升高，在部分发达城市已成为女性恶性肿瘤的第一大疾病。乳腺癌治疗以手术、化疗、放疗、内分泌治疗及基因靶向治疗为主,其中化疗是控制复发转移的主要手段，多药耐药(multidrug resistance，MDR)是影响乳腺癌辅助化疗疗效的重要原因，MDR产生的机制是多基因及多步骤综合作用的结果[1-3]。DNA拓扑异构酶Ⅱα( topoisomerase Ⅱα, Top Ⅱα)基因是一个耐药基因，TopoⅡα能对特殊的DNA 序列进行识别，并通过Tyr 与DNA 5′断端的磷酸基以共价键结合，改变DNA 的拓扑结构，催化断裂链的重新连接DNA分子链的过程[4]。TopoⅡα在喉鳞状细胞癌、霍奇金淋巴瘤、弥漫性大B细胞性淋巴瘤等肿瘤细胞中高度表达, 并且与细胞增殖高度相关[5]。本研究通过免疫组化方法检测乳腺癌组织中TOPⅡα表达，探讨TOPⅡα表达与乳腺癌临床病理的关系及其在不同分子分型乳腺癌中的表达特点。

1资料与方法

1.1一般资料

2012年1月～2014年10月收治的乳腺癌女性患者141例，31～61岁，中位年龄42岁，病理分期Ⅰ期18例，Ⅱ期89例，Ⅲ期34例，所选标本均经病理证实为浸润性导管癌。排除术前均行化疗、放疗或内分泌治疗患者。

1.2方法

所有乳腺癌标本组织经甲醛液固定，石蜡包埋，采用免疫组织化学Envision二步法检测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、表皮生长因子受体2(HER-2)、增殖细胞相关的核抗原(Ki-67)及TOPⅡα表达(试剂盒均购自丹麦DAKO公司)，步骤严格按照说明书进行，用PBS代替一抗作阴性对照，以已知阳性组织作阳性对照，用DAB显色，苏木素复染，根据文献[6]判断结果。在细胞核内有黄色或棕黄色着色颗粒为阳性，阳性细胞<5%为(-)，5%～10%为可疑(±)，10%～50%为(+)，50%～75%为(++)，>75%为(+++)；(+)-(+++)判断为阳性患者，(-)及(±)判断为阴性患者。

1.3观察指标

分析TOPⅡα表达与乳腺癌患者年龄、家族史、月经状况、肿瘤大小、有无淋巴结转移及病理分级的关系，观察TOPⅡα在不同分子分型(Luminal A型、B样型、B-like型，HER2表达型及三阴性)乳腺癌中的表达。分子分型按文献[6]分类标准， Luminal A型(ER/PR阳性，且PR高表达，HER2阴性，Ki-67低表达)，Luminal B样型(ER/PR阳性，HER2阴性，Ki-67高表达或PR低表达)，Luminal B-like型(ER/PR阳性，HER2阳性，任何状态的Ki-67)，HER2表达型(HER2阳性，ER/PR阴性)，三阴性(HER2阴性，ER/PR阴性)。

1.4统计学处理

运用SPSS 17.0系统进行分析，计数资料用百分比或率(%)表示，组间比较采用卡方检验，以P<0.05为有差异有统计学意义。

2结果

TopⅡα表达水平与乳腺癌患者的年龄、家族史、月经状况、肿瘤大小及是否有淋巴结转移无关(P>0.05)，与乳腺癌病理分级有关(P<0.05)，随肿瘤的组织学分级越高，TopⅡα表达水平越高，见表1。TopⅡα在Luminal B-like型、HER2表达型和三阴性乳腺癌患者中明显高表达，在Luminal A型和B样型中低表达。见表2。

表1　TopⅡα表达与乳腺癌临床病理指标

表2　TOPⅡα表达与不同分子分型乳腺癌(n，%)

3讨论

乳腺癌的发生是一个多基因、多步骤参与的复杂过程，无论在分子生物学特征、组织形态、免疫表型、基因特点，还是对治疗的反应上都存在着极大的差异，而这种异质性的存在提示其在分子水平上可能具有不同的分子亚型。TopⅡα基因产物为同型二聚体蛋白质，其与DNA能形成稳定的共价复合物；同时TopⅡα也可通过染色体上两个解离位点作用于DNA，即DNase 超敏感区和斯加弗得相关区(scaf-fold association region, SAR)，是客观反映细胞恶性程度的指标之一[1]。TopⅡα可作为增殖指数，表达与S-G2/M期，其高表达使肿瘤细胞复制加快，提高肿瘤的恶性程度[2]。有研究表明，TopⅡα在乳腺癌临床后期病人如伴有TopⅡα高表达，其预后较低表达者差[3]。本研究结果显示，TopⅡα表达水平与乳腺癌患者的年龄、家族史、月经状况及肿瘤大小和是否有淋巴结转移无关(P>0.05)，与乳腺癌病理分级有关(P<0.05)，且随组织学分级越高，TopⅡα表达水平越高，说明TopⅡα的表达与乳腺癌的恶性程度有关，TopⅡα能够较为客观地反映乳腺癌的增殖活性，对预后有一定的预测作用。

TopⅡα阳性率在有HER2扩增的Luminal B-like和HER2表达型中占71.55%(47/66)，明显高于其他3种类型，与Konecny等[7]的检出率(62.6%)相近。有文献报道，在HER2基因扩增的原发性乳腺癌中，TopⅡα基因出现扩增的概率为24.3%～ 55%， TopⅡα和HER2之间存在一定的相关性[8]。因HER2与TopⅡα都位于17q12-22，故两者在基因表达和变化上存在某种联系，HER2的过表达，能够引起TopⅡα基因和蛋白质的改变[9-10]。王云翔等[11]认为TopⅡα蛋白表达可以作为HER2过表达型乳腺癌的独立预后因子。三阴性乳腺癌TopⅡα表达率71.4%(20/28)，Tan等[12]采用免疫组化法研究了三阴性乳腺癌的TopⅡα表达情况，发现三阴性中存在较广泛的TopⅡα表达水平(79.4%)，认为TopⅡα可作为判断三阴性乳腺癌患者预后及指导化疗的有效指标[13-15]。本研究结果显示，TopⅡα表达水平达(71.4%)与文献报道一致，也支持上述观点。

综上，在乳腺癌患者癌组织中，病理分级越高，TopⅡα表达越高。TopⅡα在有HER2扩增的Luminal B-like型、HER2表达型乳腺癌中有较高表达，说明opⅡα、HER2共表达提示肿瘤恶性程度更高。TopⅡα表达水平与乳腺癌病理分级及分子分型有关。

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(2016-03-13收稿，2016-05-16修回)

中文编辑： 吴昌学； 英文编辑： 刘华

The Expression and Clinical Significances of TOPⅡα in Different Molecular Type of Breast Cancer

YANG Liangquan1, ZHOU Dongguang1, LOU Huanhuan2, MAO Dahua3

(1.DepartmentofGalactophore,Maternal&ChildCareCenterofQinhuangdao,Qinhuangdao066000,Hebei,China;2.DepartmentofSurgery,QinhuangdaoDevelopmentDistrictHospital,Qinhuangdao066004,Hebei,China;3.theAffiliatedHospitalofGuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

[Abstract]Objective: To analyze expression and clinical significance of TOP II α in breast cancer. Methods： The breast cancer tissues were collected from 141 patients with pathologically diagnosed breast cancer. The expression of Top II α in cancer tissue was detected by immunohistochemistry. The correlation between the expression of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size, lymph node metastasis and pathological grades were analyzed. The expression of Top II α in different molecular type of breast cancer (luminal A type, B type, B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer) were observed. Results： There was no correlation between the expression level of Top II α and age of patients, family history, menstrual status, tumor size and lymph node metastasis(P>0.05). There existed a positive correlation between Top II α expression level and pathological grades of breast cancer (P<0.05). The higher pathological grade, the more Top II α expression. There was a significantly high expression of Top II α in the luminal B-like type, HER2 expression type and triple negative breast cancer while there was a significantly low expression in luminal A type and B type breast cancer. Conclusion： Top II α expression level is related to pathological grades and molecular type of breast cancer.

[Key words]breast cancer; topoisomerase II α; gene expression; immunohistochemistry

*[基金项目]河北省科技厅项目(152777118)

[中图分类号]R737.9

[文献标识码]A

[文章编号]1000-2707(2016)06-0729-03

DOI:10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.06.025

网络出版时间：2016-06-16网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.5012.R.20160616.1743.060.html