食品卫生检验中沙门菌属LAMP检测方法的应用研究

郭晓焕



食品卫生检验中沙门菌属LAMP检测方法的应用研究

郭晓焕

【摘要】目的 探究食品卫生检验中沙门菌属LAMP检测方法的应用价值。方法 随机选取84件食品样本，采用分离培养鉴定和LAMP检测方法进行检测，对比两种检测方法的结果。结果 针对检测阳性率，LAMP检测高于分离培养法，差异具有统计学意义（P＜0．05）。结论 应用LAMP检测方法对食品卫生中沙门菌属进行检测，效果显著。

【关键词】食品卫生；沙门菌属；LAMP检测方法；应用价值

分离培养法是国内食品沙门菌检测的常用方法，其操作流程繁琐，且需耗费大量的时间。同时，针对免疫学方法，其敏感度不高，针对聚合酶连反应法，其需特殊仪器和设备，导致检测受到限制［1］。环介导等温扩增技术，即LAMP，其属于新型等温核酸扩增方法，操作方式简单、敏感度高等是其主要优点［2］。因此，为研究LAMP在食品卫生沙门菌检验中的应用价值，本研究以84件食品样本为对象，采用2种不同的检测方法，取得了一定成效，现将相关报道如下。

1一般资料与方法

1.1一般资料

选取2015年3～12月收集的食品样本84件，其中，包括20件生鲜肉、15件熟肉制品、18件生水产品、17件非发酵豆制品、4件冷冻生肉、4件生食类蔬菜和6件鲜榨果汁。以肠炎沙门菌为参考菌株。

1.2方法

1.2.1食品样本前增菌 以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为依据，分别选取25 g食品标本，将其添加至225 ml BPW无菌质袋内，利用拍击式均质器，进行1～2 min的拍打，基于37℃下，8～18 h为培养时间。针对冷冻产品，应以低于45℃为基础条件，解冻时间不得超过15 min。

1.2.2 LAMP检测方法 分别取食品标本前增菌液1 ml，基于10 000 r/min指标下，进行2 min的离心，除去上清液后，借助核酸通用提取试剂盒，提取核酸。与此同时，取1 μl上清液，用于制作待检模板DNA。以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为指导，设计引物，并检测食品标本增菌液DNA，且以标准的反应体系为指标。以65℃为条件，进行60 min的水浴，基于80℃灭活酶前提下，促使反应体系得以终止。待结束反应后，通过肉眼检测，若表现出混浊现象，则为阳性，若不存在混浊现象，则为阴性。

1.2.3分离培养鉴定 基于《食品微生物学检验沙门氏菌检验》指导下，在轻轻晃动经培养过的食品标本前增菌液后，以1 ml为标准，将其放置于10 ml TTB增菌液中，以42℃为标准，18～24 h为培养时间。同时，取1 ml放置于10 ml SC增菌液中，以37℃为标准，18～24 h为培养时间。分别取1环食品标准增菌液，并放置于BS平板和XLD平板上，以37℃为标准，18～24 h为培养时间。选取可疑菌落3个，分别接种于TSI、赖氨酸脱羧酶试验培养基以及营养琼脂平板上，以37℃为标准，18～24 h为培养时间。经由生化反应，与沙门菌特征初步吻合，基于营养琼脂平板获取可疑菌落，利用生理盐水，制作浊度适当菌悬液，借助全自动微生物鉴定系统，实施分析。若条件需要，可开展血清学分型。

1.3统计学分析

利用SPSS 20.0软件对本次研究所有数据进行分析，χ2检验用于检验计数资料的比较，差异具有统计学意义用P＜0.05表示。

2结果

对比食品标本检验结果，LAMP检测阳性率为10.7％，高于分离培养法的4.8％，差异具有统计学意义（P＜0.05），如表1所示。

表1　不同检测方法下的食品标本检测结果

3讨论

LAMP检测法，即环介导等温扩增法，属于新型核酸扩增方法，其将4种特异引物设置于靶基因的6个区域内，基于链置换DNA聚合酶的作用下，以65℃为恒温条件，达到扩增目的［3］。针对该种检测方法，操作方便、特异性强均属于该其基本特点，在扩增产物的前提下，降低样品检测难度，在检测食品微生物中应用价值较高［4］。针对检测结果，可通过肉眼，观察是否存在白色混浊沉淀物，以达到判定扩增情况的目的［5］。

本次研究，在对食品样本中的沙门菌属检验过程中，分别采用分离培养法和LAMP检测法进行检测。针对分离培养法，其以《食品微生物学检验沙门氏菌检验》为指导，按照一定的步骤进行检测，即前增菌、增菌、分离、筛选可疑菌落、生化等步骤［6］。一般情况下，得到阴性检测结果需4 d左右，而得到沙门菌检测结果需7 d左右。与此同时，该检测方法过程十分繁琐、复杂，需借助全自动微生物鉴定系统，存在血清分型效价不高的问题，而试剂不仅昂贵，且容易出现失效状况［7］。相较于需两次增菌分离培养的分离培养方法，LAMP检测法在提取前增菌液核酸的基础上，方可开展扩增实验，完成扩增过程仅仅需要1 h，促使检验流程得以简化，而得到食品样本沙门菌属检验结果仅需要24 h，大大缩减了检测时间。针对LAMP检测法，检测人员可利用肉眼，对检测结果进行直接判定，促使其更加直观、形象［8］。

本次研究以84件食品样本为对象，分别通过分离培养法和LAMP检测法进行检测。结果显示，LAMP法的检测阳性率为10.7％，分离培养法的检测阳性率为4.8％。可见，LAMP法在检测食品卫生沙门菌属的应用价值更高。

综上所述，在食品卫生检验中，针对沙门菌属，通过LAMP法进行检测，准确率更高。

参考文献

［1］ 周建亮，万艳芳．食品卫生检验中沙门菌属LAMP检测方法的应用效果评价［J］．实验与检验医学，2014（1）：24-25．

［2］ 王胜启，马艳艳，李静，等．沙门菌属stn基因LAMP在食品卫生检验中的应用［J］．中国现代医生，2014，52（12）：114-115，153．

［3］ 王瑶，邵荣标，刘伟．沙门菌及志贺菌生物学特性回复变异现象研究［J］．现代预防医学，2014，41（11）：2070-2071．

［4］ 温来欣，方丽萍．应用LAMP同时快速检测沙门菌和志贺菌的效果评价［J］．职业与健康，2014，30（4）：465-466，469．

［5］ 张韶华，崔仑标，祁贤，等．RT-LAMP法对Ⅱ型诺如病毒的检测［J］.现代预防医学，2014，41（15）：2790-2792，2799．

［6］ 曾婷，谢逸欣，马丽．LAMP和荧光定量PCR检测食品中致病微生物的比较研究［J］．临床军医杂志，2013，41（3）：304-306．

［7］ 何翠华，刘志强，王丹云，等．应用LAMP方法检测动物源性食品中沙门菌［J］．中国食品卫生杂志，2010，22（5）：411-414．

［8］ 叶文，杨柳青，张如胜，等．沙门菌属LAMP检测方法在食品卫生检验中的应用评价［J］．中华疾病控制杂志，2011，15（9）：785-787．

Application of LAMP Method for Detection of Salmonella in Food Hygiene Inspection

GUO Xiaohuan Food Room，Food and Drug Inspection Institute of Zhumadian，Zhumadian He’nan 463000，China

【Abstract】Objective To explore the application value of LAMP method for detection of salmonella in food hygiene inspection.Methods Randomly selected 84 food samples，the isolation and identification and LAMP detection method，two methods of detection results.Results The positive rate of detection，LAMP detection was significantly higher than that of isolated culture method，significant difference was statistically significant（P＜0．05）．Conclusion For salmonella in food hygiene is detected，the application of LAMP detection method is effective．

【Key words】Food hygiene，Salmonella，LAMP method，Application value

【中图分类号】R155

【文献标识码】A

【文章编号】1674-9316（2016）07-0004-02

doi：10．3969/j．issn．1674-9316．2016．07．003

作者单位：驻马店市食品药品检验所食品室，河南 驻马店 463000