直肠巨大绒毛状腺瘤患者环氧酶-2、p53的表达及临床意义

郑建涛 陈 辉 周俊峰 张 琳

(福建医科大学附属第一医院胃肠外科，福建 福州 350005)



直肠巨大绒毛状腺瘤患者环氧酶-2、p53的表达及临床意义

郑建涛 陈 辉 周俊峰 张 琳

(福建医科大学附属第一医院胃肠外科，福建 福州 350005)

目的 探讨环氧酶(Cox)-2、p53的表达对直肠绒毛状腺瘤经内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的意义。方法 回顾性分析内镜黏膜下剥离术后经病理证实为直肠绒毛状腺瘤的老年患者90例的临床资料，标本于病理科制作石蜡包块，根据术后随访情况是否复发分组，复发组39例，未复发组51例，另选取直肠癌及正常直肠标本各10例作为对照，通过免疫组织化学方法检测Cox-2、p53在各组织中的表达，探讨其表达水平对于腺瘤复发的意义。结果 各组Cox-2、p53表达存在差异。Cox-2表达水平在瘤体直径大小、是否复发分组中存在差异，p53表达水平在是否复发分组中存在差异(P<0.05)。Cox-2与p53的表达呈高度正相关，且为直肠绒毛状腺瘤复发的独立危险因素。结论 Cox-2与p53蛋白高表达与直肠绒毛状腺瘤的发生发展相关，对其表达水平的监测可能对预测肿瘤的复发具有重要意义。

直肠绒毛状腺瘤；环氧酶(Cox)-2；p53；免疫组织化学

绒毛状腺瘤属于一种消化道常见的癌前病变，好发于直肠及乙状结肠，多发于老年患者，40岁以下患者较少〔1〕。直肠绒毛状腺瘤的癌变率可达到4%～40%，早期肠镜活检极难发现是否出现癌变，直肠指诊常出现遗漏〔2,3〕。有报道称瘤体大于2 cm时癌变率可达50%以上，但是其具体机制尚不清楚，对于其与生长因子、癌基因的关系是目前研究的热点〔4,5〕。前列腺素内过氧化物合成酶环氧酶(Cox)-2可将花生四烯酸代谢为各种产物，参与机体的炎症、发热等多种病理过程〔6〕。抑癌基因p53可维持机体细胞基因组的稳定，当致癌因素出现，p53会出现缺失突变，从而导致细胞的无限增殖〔7〕。Cox-2及p53均在癌前病变过程中扮演重要角色，本研究对Cox-2及p53在直肠绒毛状腺瘤术后复发中的意义进行探讨。

1 材料与方法

1.1 临床材料 回顾性分析我院2011年1月至2014年1月行内镜黏膜下剥离术后经病理证实为直肠绒毛状腺瘤的老年患者(≥60岁)90例的临床资料，其中男性47例，女性43例，平均年龄(71.39±11.05)岁，瘤体直径<2 cm 48例，≥2 cm 42例。根据术后1年内随访是否复发分组，复发组39例，未复发组51例。另选取年龄、性别匹配的病理科直肠癌标本及正常直肠组织标本各10例作为对照。本次研究经医院医学伦理委员批准，标本获取者家属知情同意。标本均经10%甲醛固定、脱水，常规石蜡包埋、切片，烤箱烘干备用。

1.2 仪器试剂 低温冰箱(BCD-272，博西华家电器)，电热恒温培养箱(DH-250，中兴伟业仪器)，微量移液器(10～1 000 μl，Gilson)，微波炉(EM-F2108MS1，Sanyo)，生物显微镜(ECLIPSE80i，Nikon)。兔抗人Cox-2单克隆抗体、羊抗人p53单克隆抗体、SP免疫组化试剂盒、内源性生物素阻断试剂盒(Boehringer Mannheim)，二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒、磷酸盐缓冲液(PBS)、柠檬酸盐抗原修复缓冲液(康为世纪)。

1.3 免疫组织化学方法测定Cox-2、p53在各组织中的表达 所有蜡块4 μm连续切片，60℃烤箱恒温干燥，二甲苯脱蜡10 min，梯度酒精脱水5 min，冲洗后PBS浸泡5 min。微波炉加热柠檬酸盐组织抗原修复液进行修复，pH6.0，750 W 5 min，150 W 15 min，PBS冲洗甩干。50 μl内源性生物素阻断剂室温孵育10 min，PBS冲洗3 min。滴加一抗(兔抗人Cox-2单克隆抗体或羊抗人p53单克隆抗体)，4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗；滴加二抗，室温孵育40 min，PBS冲洗。最后DAB显色，Nikon显微镜下观察显色反应。

1.4 镜下观察结果判定 Cox-2定位于上皮细胞的胞质、包膜及间质组织，棕黄色为阳性表达。参照相关文献〔6〕，统计Cox-2在每个标本组织中的表达情况，包括上皮细胞、浅部间质(腺体周边间质)及深部间质(组织内部间质)中的表达。上皮细胞表达评分标准：无表达为0分；0%～25%为1分；26%～50%为2分；≥51%为3分。0～1分为低表达，≥2分为高表达。p53定位于上皮细胞核中，棕黄色为阳性表达。无表达为0分；局部上皮表达为1分；2个高倍镜异型增生上皮细胞表达；多于2个高倍镜异型增生上皮细胞表达为3分。0～1分为低表达，≥2分为高表达。

1.5 统计学方法 采用SPSS20.0统计学软件进行χ2检验、Spearman等级相关分析及Logistic多元回归分析。

2 结 果

2.1 Cox-2、p53在不同标本组织中的表达 Cox-2在腺瘤组织中高表达率显著高于正常组织(P<0.05)，与癌组织不存在差异(P>0.05)。p53在腺瘤组织中高表达率显著低于癌组织(P<0.05)，与正常组织不存在差异(P>0.05)。见表1。

表1 Cox-2、p53在不同标本组织中的表达(n)

与正常组织比较：1)P<0.05；与癌组织比较：2)P<0.05

2.2 Cox-2表达与直肠腺瘤临床特征的关系 Cox-2表达水平在瘤体直径大小、是否复发分组中存在差异(P<0.01)，在性别、年龄、瘤体数目、瘤体部位不存在差异(P>0.05)。见表2。

2.3 p53表达与直肠腺瘤临床特征的关系 p53表达水平在是否复发分组中存在差异(P<0.05)，在性别、年龄、瘤体数目、瘤体部位、瘤体直径不存在差异(P>0.05)。见表2。

2.4 Cox-2与p53表达相关性 Cox-2与p53在直肠绒毛状腺瘤中的表达呈高度正相关(r=0.241,P=0.022)。

2.5 Logistic多元回归分析 Cox-2、p53的高表达均为直肠绒毛膜腺瘤术后复发的独立危险因素。见表3。

表2 Cox-2、p53高表达与直肠腺瘤临床特征的关系(n,n=90)

表3 Logistic多元回归分析

3 讨 论

结直肠癌主要起源于腺瘤，早期发现腺瘤并进行手术治疗是预防癌变的有效手段〔8〕。直肠绒毛状腺瘤被认为是直肠癌的癌前病变〔9〕。瘤体表面呈丝绒或海绵状，质软易碎，高于正常黏膜表面，呈广基型生长，可单发可多发〔10〕，其治疗主要以手术治疗为主。细胞因子、癌基因提示可能在腺瘤的生长及复发中起一定作用〔11〕。Cox-2被公认为促进结直肠肿瘤的发生、发展，在几乎所有的肿瘤中也可发现p53表达水平的增高，Cox-2、p53一般不表达于正常组织中〔12〕，相关文献也提及肿瘤大小及上皮内瘤变等均可上调Cox-2、p53的表达水平，且与腺瘤的复发也高度相关〔13〕。Cox-2不仅表达于上皮细胞，也可表达于巨噬细胞及成纤维细胞中，该类细胞的积聚可导致正常组织基质的炎性反应，从而导致直肠早期肿瘤的发生，p53的阳性表达也预示着肿瘤细胞的高增殖性，两者相互作用促进了肿瘤的产生，本次研究也证实了Cox-2与p53的表达水平具有高度正相关性〔14，15〕。

直肠绒毛状腺瘤的复发率极高，本次研究中随访的所有患者复发率与国外相关文献报道的20%～50%相一致。Cox-2及p53的高表达与结直肠腺瘤的复发具有高度相关性，Cox-2通过调节血管生长、细胞凋亡及肿瘤细胞的转移促进了细胞癌变的过程，其在正常环境下表达可被严格控制，但由于炎性反应等高危因素刺激却可使其表达迅速升高〔16〕。p53基因的突变使其具有了癌基因活性，使细胞恶性增殖具有抗凋亡的能力，编码的相关蛋白也丧失了移植细胞增殖的作用，导致肿瘤细胞的无限制生长，对肿瘤的产生、发展起到促进作用〔17〕，即使手术治疗后，该两类蛋白的表达仍处于失调水平，也不可避免地导致肿瘤的复发。

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〔2015-01-19修回〕

(编辑 杜 娟)

福建省卫生计生委面向农村和城市社区推广适宜技术项目(No.2015018)

郑建涛(1967-)，男，副主任医师，主要从事胃肠癌研究。

R735.3+7

A

1005-9202(2016)22-5608-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2016.22.051