补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠血压及骨桥蛋白表达的影响

迟伟峰，纪艳珍，付 燕，聂颖颖



补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠血压及骨桥蛋白表达的影响

迟伟峰，纪艳珍，付 燕，聂颖颖

目的 探讨补肾活血法对单纯收缩期高血压(ISH)模型大鼠血压及骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法 采用WVK法复制ISH大鼠模型，分为补肾活血汤组、氨氯地平组、中西药联用组、空白对照组、模型对照组，予以相应的药物干预，8周后检测各组大鼠血压、主动脉中膜厚度及OPN表达。结果 补肾活血法能够降低大鼠收缩压、缩小大鼠主动脉中膜厚度，减低OPN蛋白的表达，与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，中西药联用组效果更明显。结论 补肾活血法能够通过降低血压，减低OPN蛋白的表达，从而改善动脉中膜厚度，减少血管重塑。

单纯收缩期高血压；补肾活血法；血管重塑；骨桥蛋白；眩晕

高血压是心血管疾病的危险因素，可以影响血管壁结构和功能，导致器官功能障碍，而引起心血管疾病发生[1-3]。单纯收缩期高血压(ISH) 是以收缩压增高和脉压增大为特点的一种特殊类型的高血压，常见于60岁以上人群，具体指收缩压≥140 mmHg，舒张压<90 mmHg，其发生常与血管重塑有关[4]：如动脉中层弹力纤维减少，钙质沉着增加，血管僵硬度增加、弹性下降，血管顺应性降低等。本研究根据老年人中医辨证肾虚血瘀及多发ISH的特点，探讨补肾活血法对单纯收缩期实验大鼠血管重塑的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选取健康6周～7周龄 Wistar-Kyoto雄性大鼠(WKY)50只，SPF级，体重175 g～200 g，由青岛市药物检验研究所提供，动物合格证号SCXK(鲁)20090007。大鼠饲养于青岛市海慈医疗集团动物房，金属鼠笼，分笼饲养，每笼5只，保持室内环境恒温(19 ℃±3 ℃)，湿度50%～60%，通风良好，标准饲料，自由进食饮水。

1.2 药物与试剂 补肾活血汤(BSHXD)药物组成：生熟地各20 g，山萸肉15 g，茯苓15 g，泽泻30 g，丹皮12 g，菟丝子20 g，益母草15 g，当归15 g，钩藤15 g，仙灵脾6 g，由青岛海慈医疗集团药剂科中药制剂室制备，浓度为生药92 g/L，质量标准按照2010版《中国药典》；苯磺酸氨氯地平片，每片5 mg，大连辉瑞制药有限公司(国药准字号：H10950224)；华法林钠片，每片2.5 mg，山东齐鲁制药有限公司生产(国药准字号：H37021314)；维生素K1注射液，每支10 mg/mL，山东鲁抗辰欣药业有限公司生产(国药准字号：H37021988)。大鼠骨桥蛋白(osteopontin，OPN)Western-blot试剂盒(030906)，上海长岛生物技术有限公司提供。

1.3 模型制备 应用华法林和维生素K(WVK)诱导动脉中层钙化法[2]。华法林钠片研成粉末，蒸馏水配成悬浊液，按照华法林钠片15 mg/(kg·d)灌胃，每天1次；予以维生素K1注射液，按10 mg/(kg·d)背部皮下注射，每天1次。维生素K1比华法林提前1周用药，每2周测量并记录血压1次，6周后判定造模结果。收缩压升高并持续大于18.67 kPa(140 mmHg)为造模成功。

1.4 方法

1.4.1 分组及给药 实验大鼠随机分为5组。随机选取其中的10只做空白对照组，其余40只进行高血压造模。按随机数字表法分为补肾活血汤组、氨氯地平组、补肾活血汤与氨氯地平联用组(中西药联用组)、模型对照组，每组10只。

根据人和动物间按体表面积折算的等效剂量分别灌胃给药。补肾活血汤组给予补肾活血汤1.83 g/(kg·d)；氨氯地平组给予氨氯地平25 mg/(kg·d)；中西药联用组给予补肾活血汤1.83 g/(kg·d)和氨氯地平25 mg/(kg·d)；空白对照组及模型对照组给予蒸馏水10 mL/(kg·d)，每日1次，给药8周。

1.4.2 指标检测

1.4.2.1 血压测量 实验开始后，将造模成功后的大鼠灌胃，每两周测收缩压1次，共8周。采用大鼠血压检测仪测量大鼠收缩压1次，具体操作为：将大鼠放入固定盒中，先加热保温10 min，待大鼠情绪平稳后，通过尾动脉测量血压，记录血压数值，监测血压变化。

1.4.2.2 胸主动脉中膜厚度测量 大鼠取血后迅速解剖、分离，切取胸主动脉，用生理盐水充分冲洗，吸水纸吸干水分，用甲醛溶液固定，乙醇梯度脱水，浸蜡包埋，备用。HE染色，光镜下观察胸主动脉病理变化，采用KS400医学图文分析系统测量胸主动脉中膜厚度。

1.4.2.3 Western-blot法检测OPN 动物处死，将主动脉(从主动脉弓到肾动脉)取出，用无菌PBS冲洗，去除外膜组织，放入-80 ℃低温冰箱保存备用。严格按操作步骤进行。

2 结 果

2.1 各组大鼠收缩压比较 药物干预8周后，氨氯地平组及中西药联用组收缩压与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)，而补肾活血汤组收缩压下降程度与模型对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，但降压程度不及中西药联用组及氨氯地平组。详见表1。

2.2 各组大鼠胸主动脉中膜厚度比较 镜下空白对照组胸主动脉管壁内膜、中膜无明显增厚，管腔无明显扩大；模型对照组管壁内膜、中膜均有增厚，以中膜为主，较空白对照组明显增厚，管腔狭窄变形；各治疗组胸主动脉管壁较模型对照组均有不同程度的改变。用医学图文分析系统测量胸主动脉中膜厚度，与空白对照组比较，模型对照组胸主动脉中膜厚度明显增厚，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型对照组比较，补肾活血汤组、氨氯地平组及中西药联用组中膜厚度均变薄，差异有统计学意义(P<0.05)，但补肾活血汤组、氨氯地平组、中西药联用组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。详见表1。

2.3 Western-blot法检测OPN 各组各时相点均有OPN的阳性扩增条带。空白对照组OPN阳性表达最强，模型对照组表达最弱；而补肾活血组与氨氯地平组表达相似，较中西药联用组降低；中西药联用组与空白对照组OPN表达均较少。补肾活血汤组、氨氯地平组OPN表达与模型对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)，而补肾活血汤组、氨氯地平组比较差异无统计学意义(P>0.05)；中西药联用组OPN表达与模型对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

组别nOPN收缩压(kPa)胸主动脉中膜厚度(μm)空白对照组100.78±0.1210.35±0.8187.01±7.21模型对照组80.24±0.092)18.41±1.382)109.55±8.522)补肾活血汤组9 0.56±0.191)3)13.58±1.651)96.38±6.323)氨氯地平组10 0.60±0.151)3)12.44±1.212)95.33±5.893)中西药联用组90.68±0.113)11.11±0.893) 92.36±5.952)3) 与空白对照组比较,1)P<0.05,2)P<0.01;与模型对照组比较,3)P<0.05。

3 讨 论

ISH根据其临床表现在中医诊断为眩晕。《灵枢·海论》中指出：“髓海不足，则脑转耳鸣，胫酸眩冒，目无所见，懈怠安卧”。故《内经》以肾虚及髓海不足立论，《伤寒论》中真武汤开辟了从肾虚角度论治眩晕之先河。清末唐容川总结了血瘀所致眩晕的治疗大法，重点介绍了以重剂活血化瘀之品治疗眩晕的经验。这些论述都为后世从“肾虚血瘀”角度治疗眩晕病提供了重要的理论依据。单纯收缩期高血压多见于老年病人，老年病人年过半百，天癸衰竭，肾为先天之本，为五脏之根本，肾虚日久则心气不足，心气虚则不能行血，气血运行不畅而致血瘀，肾虚和血瘀相互影响，肾虚为本，血瘀为标，由虚致瘀，而血瘀的存在又加重了肾虚。因此肾虚血瘀是老年人单纯收缩期高血压病的根本病机。

ISH的发生主要与动脉僵硬度增加有关。随着年龄的增长，老年人大动脉的结构也发生了变化：如动脉中层弹力纤维减少，胶原含量及钙质沉着增加，血管僵硬度增加、弹性下降，血管顺应性降低等。本实验表明补肾活血法具有良好的减少胸主动脉中膜厚度的作用，从而减少血管重塑。

骨桥蛋白是一种酸性磷酸化糖蛋白，最初认为是一种骨基质，由成骨细胞与破骨细胞分泌，参与骨的吸收与形成。Giachelli等首次揭示了OPN在心血管病中的可能作用，证实其参与动脉粥样硬化(AS)、经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)后再狭窄、高血压等疾病引起的血管重构(VR)过程，OPN可以直接或间接增强血管外膜成纤维细胞的迁移活性，导致血管重构。有研究表明高血压早期过程中，OPN表达有明显的升高[5]。本实验表明补肾活血汤可以降低OPN的水平，从而通过抑制OPN表达起到改善血管重塑的作用。

综上所述，补肾活血法能够通过缩小胸主动脉中膜厚度、减低动脉组织钙含量，降低OPN表达水平而达到减少血管重塑的作用。

[1] Sliwa K，Stewart S，Gersh BJ.Hypertension：a global perspective[J].Circulation，2011，123(24)：2892-2896.

[2] Toth P，Tucsek Z，Sosnowska D，et al.Age-related autoregulatory dysfunction and cerebromicrovascular injury in mice with angiotensin Ⅱ-induced hypertension[J].J Cereb Blood Flow Metab，2013，33(11)：1732-1742.

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[4] 宋业琳，魏陵博，于广宇，等.补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠血管重塑的影响[J].中国中医急症，2013，22(8)：1298-1322.

[5] 王吉静，李玉琳，王月丽，等.高血压多小鼠骨桥蛋白表达的影响[J].中国分子心脏病学杂志，2014，14(1)：830-833.

(本文编辑郭怀印)

The Influence of Kidney-tonifying and Blood-activating Therapy on Blood Pressure and Osteopontin in Rats with Isolated Systolic Hypertension (ISH)

Chi Weifeng，Ji Yanzhen，Fu Yan，Nie Yingying

Qingdao Haici Medical Group,Qingdao 266033,Shandong，China

Nie Yingying

Objective To observe the influence of kidney-tonifying and blood-activating therapy on blood pressure and osteopontin (OPN) in rats with isolated systolic hypertension(ISH).Methods ISH rat model was established by WVK method and divided into Bushen Huoxue decoction (BHD) group，amlodipine group，BHD plus amlodipine combination group(two drugs combination group)，and blank control group，model control group.After 8 weeks，blood pressure，aortic medial thickness and OPN protein expression were detected.Results The systolic blood pressure，aortic medial thickness and OPN protein expression reduced in BHD group and combination group compared with model control group(P<0.05)，which was lower in combination group than that in BHD group.Conclusion Kidney-tonifying and blood-activating therapy can reduce vascular remodeling by lowering blood pressure and down-regulating the protein expression of OPN，thereby improve the aortic medial thickness.

isolated systolic hypertension；kidney-tonifying and blood-activating therapy；vascular remodeling；osteopontin；vertigo

山东省青岛市海慈医疗集团(山东青岛 266033)

聂颖颖，E-mail：momo0820@163.com

R544.1 R285.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.01.009

1672-1349(2017)01-0034-03

2016-06-21)

引用信息：迟伟峰，纪艳珍，付燕，等.补肾活血法对单纯收缩期高血压大鼠血压及骨桥蛋白表达的影响[J].中西医结合心脑血管病杂志，2017，15(1)：34-36.