江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病原学监测分析

刘晓庆，肖芳，刘师文，李健雄，施勇，熊英

(江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病原学监测分析

刘晓庆，肖芳，刘师文，李健雄，施勇，熊英

(江西省疾病预防控制中心，江西南昌330029)

目的通过对江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病原学监测，为证实江西省消灭脊髓灰质炎提供准确的、可靠的科学依据。方法采用L20B、RD细胞继续脊髓灰质炎病毒分离，脊髓灰质炎毒株通过ITD方法进行型内鉴定，若为复合型毒株再经过血清中和实验分单型后，送至国家脊髓灰质炎实验室进行序列测定。结果2013年至2015年共接收1058份AFP病例粪便标本，其中有28份分离出脊髓灰质炎病毒，83份分离出非脊髓灰质炎肠道病毒，分离率分别为2. 65%，7.84%；接收AFP病例接触者粪便标本57份，分离出脊灰病毒2份和非脊灰肠道病毒7份，平均分离率分别为3.51%，12.28%；在2013年分离出一例疫苗衍生株病例，未发现脊灰野病毒。结论江西省脊髓灰质炎病毒学监测处于较高的水平，江西省2013年至2015年急性弛缓性麻痹病例病中未发现脊灰野病毒，但检出VDPV，提示我们要警惕疫苗株的变异，应继续加强监测。

急性弛缓性麻痹（AFP）；脊灰疫苗衍生株（VDPV）；非脊灰肠道病毒；病原学监测

脊髓灰质炎（脊灰）是一种由脊髓灰质炎病毒引起的严重危害儿童健康的传染病，侵犯对象为5岁以下儿童[1]。中国脊髓灰质炎（脊灰）监测网络建立以来，在新疆维吾尔自治区、云南省、青海省有一些脊灰野病毒爆发的报告[2-5]随着全球消灭脊灰策略的实施及脊灰口服减病毒活疫苗（OPV）的使用，脊灰野病毒毒株的传播及流行已得到有效的控制。虽然我国已证实无脊灰状态[6]，但是我国周边国家仍有脊灰流行，新疆于2011年发生WPV输入并引起局部传播[7-9]，提示WPV输入我国并引起传播的风险始终存在。所以通过加强口服脊灰减毒活疫苗接种和开展急性弛缓性麻痹（AFP）病例的监测等一系列策略和措施，是目前我国维持无脊灰状态的战略方针。

1 材料与方法

1.1 粪便标本来源AFP病例粪便标本由报告AFP病例的市、县医院采集，在规定的时间内冷藏运送至省脊灰实验室。

1.2 传代细胞与标准血清L20B、RD细胞来源于世界卫生组织（WHO），由中国疾病预防控制中心脊髓灰质炎实验室分发，省疾病预防控制中心脊髓灰质炎实验室建立细胞库，所用细胞代数均在WHO要求范围内；标准血清由WHO提供。

1.3病毒分离与鉴定所有粪便标本按WHO《脊髓灰质炎病毒实验室操作手册》处理后接种于WHO推荐的RD和L20B细胞，按照《脊灰病毒实检验手册》[10]的操作规程进行。细胞和脊灰病毒标准诊断血清由世界卫生组织（WHO）提供。所有分离到的脊灰病毒株送国家脊灰实验室进行型内鉴别和测序。

1.4 分析方法采用EXCEL 2007等软件进行数据分析。

2 结果

2.1 2013年-2015年AFP病例病毒学监测指针完成情况2013年-2015年本省AFP病例监测各项指标均达到了WHO的要求，所有的脊髓灰质炎阳性标本都按国家要求在7d内送到，并且定型结果与国家的检测结果100%相符，其详细各项指标见表1。

2.2 AFP病例及接触者粪便标本病毒分离及鉴定情况2013年-2015年共接收1058份AFP病例粪便标本，27份标本分离出脊髓灰质炎病毒，83份标本分离出NPEV，2013年至2015年共接收接触者粪便标本57份，共分离脊髓灰质炎病毒2株，NPEV7株（表2，3）。经过ITD分型鉴定后，若为复合毒株则再经过血清中和实验分单型后，得到单一的脊髓灰质炎病毒毒株分别为PVI型6株，PVII型19株，PVIII型20株，其构成比分别为13.33%，42.22%，44.44%，见表4，所有脊髓灰质炎病毒毒株送至国家脊灰实验室进行序列测定。

2.3 2013年-2015年分离的脊髓灰质炎阳性标本核苷酸变异情况经国家脊髓灰质炎实验室进行VP1区核苷酸序列分析，与昆明株和Sabin株比较，其核苷酸变化情况如表5。

表1 2013年-2015年AFP病例病毒学监测指针完成情况[n（%）]

表2 2013年-2015年AFP病例粪便标本病毒分离与鉴定情况

表3 2013～2015年AFP病例接触者粪便标本病毒分离与鉴定情况

表4 2013年-2015年份里脊髓灰质炎各型别毒株数

表5 阳性毒株核苷酸变异情况分析

3 讨论

快速、灵敏的AFP病例监测系统是消灭脊髓灰质炎、维持无脊灰状态的重要策略之一，是及时发现输入性脊髓灰质炎野病毒的重要途径，对继续维持无脊灰目标具有重要意义[11]。江西省脊髓灰质炎实验室自1992年建立AFP病例监测系统以来，系统一直正常运行，已连续7次通过了WHO对脊髓灰质炎实验室的现场认证，2013年-2015年江西省AFP病例监测系统继续保持较高的敏感性、及时性和完整性，各项监测指标均能达到WHO的要求，并实现了从1992年至今连续23年无脊灰野病毒病例发生的目标。

通过对AFP病例、密切接触者的病原学监测，2013年-2015年江西省AFP每年的送检病例数均为170例左右，数量非常相近，PV阳性毒株3种型别均有发现，分别为Ⅰ型6株、Ⅱ型19株、Ⅲ型20株。从数据上看，Ⅱ型和Ⅲ型的毒株数明显大于Ⅰ型，但这并不能说明Ⅱ型和Ⅲ型是我省近三年的优势株，分析其原因，在2013年我省发现了一例（Ⅱ+Ⅲ）型VDPV病例，对该病例重复采集粪便标本样15份，分离得Ⅱ+Ⅲ型复合毒株14份以及Ⅱ型毒株1份，故在一定程度上提高Ⅱ型和Ⅲ型毒株的数量，如果撇开这个因素，Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ型三个型别的毒株数相差不大，这与往年我省的报道Ⅲ型是我省的优势株不太一致[12-14]。其原因值得进一步探讨。

江西省2013年-2015年PV平均分离率为2.65%，肠道病毒平均分离率为7.84%，与全国水平大致相近，但是分年份来看，2013年PV分离率为3.94%，肠道病毒分离率为8.45%；2014年PV分离率为1.62%，肠道病毒分离率为12.94%；2015年PV分离率为2.41%，肠道病毒分离率为1.51%，可见2014年虽然肠道病毒分离率较高，但PV分离率却相对较低，但是，2015年肠道病毒分离率明显偏低，这可能与生活水平的提高、健康知识的加强、卫生条件的改善有一定的关系；除此之外，这也可能与细胞经过多年冻存其敏感性下降有一定的关系，还有RD细胞对不同的肠道病毒的敏感性不同，也许RD细胞对近年来我省流行的肠道病毒不敏感，这也会影响肠道病毒的分离率，有待于进一步探讨其原因。

与原始Sabin疫苗株病毒相比，若VP1区全基因序列的差异介于1%～15%，这就是VDPV[15]。2013年-2015年江西省虽然没有发现脊灰野病毒，但是在2013年的一病例中连续采样并分离得到了高变异脊灰毒株，本研究可以看出，Ⅱ和Ⅲ型毒株发生了高变异，不过，虽然该病例毒株产生了高变异，但是在其接触者以及环境标本中并未分离得到脊灰毒株，说明我省脊灰相关工作人员对其监测以及隔离保护工作做得相当到位，保证了患儿所居住的村庄以及周边环境并没有形成传播。

随着全球完成消灭脊灰目标实现日期的推近，维持无脊灰工作的难度越来越大，实验室监测对及时发现输入性野病毒和疫苗相关株起着至关重要的作用，细胞敏感性是脊灰实验室质量保证体系中的重要组成部分[16]。江西省自建立AFP网络病例监测系统以来，一直保持敏感、高效、准确的运行，为全球消灭脊髓灰质炎、维持无脊灰状态提供了有力的实验室保障。

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An analysis of AFP cases on vaccine associated polioviruses strains in Jiangxi province in 2013～2015

LIU Xiaoqing，XIAO Fang，LIU Shiwen，LI Jianxiong，SHI Yong，XIONG Ying.Jiangxi Provincial Center for Disease Control and Prevention，Nanchang，330029.

Objective To provide accurate，reliable science evidences for Polio free status in Jiangxi，and to analyze the lab monitoring results of the acute flaccid paralysis(AFP)case from 2013 to 2015.Methods Polio viruses were isolated by L20B cell and RD cell.The isolated Polio strains were typed by ITD test for intratypic identification and then sent to national Polio laboratory for sequencing.Result We received 1058 AFP stool specimens from 2013 to 2015.The isolates of Polio viruses and NPEV were 27(2.65%)and 83(7.84%)，respectively.Among the 57 received AFP cases contacts stool specimens，2 were identified as poliovirus and 7 were identified as NPEVs，with a separation rate of 3.51%and 12.28%on average.No wild polio virus was found but VDPVs were found from cases in 2013.Conclusion Polio virological surveillance in Jiangxi province stay at a high level.No wild polio virus was found in the AFP cases from 2013 to 2015 in Jiangxi province.But the finding of VDPVs warned us we should continue to strengthen surveillance.

Acute flaccid paralysis(AFP)；VDPV；NPEV；Virological surveillance

R512.4，R373.1+3

A

1674-1129(2017)02-0171-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2017.02.010

2016-09-28；

2016-12-28)

江西省卫计委课题，编号：20166018

刘晓庆，1986年生，女，硕士，职称以及研究方向：检验技师，脊灰病病毒的研究。E-mail:liuxiaoqing035@163.com