一起霍乱疫情应急处置的实验室检测分析

胡伦文

湖北省松滋市疾病预防控制中心，湖北松滋 434200

一起霍乱疫情应急处置的实验室检测分析

胡伦文

湖北省松滋市疾病预防控制中心，湖北松滋 434200

目的进一步发挥和完善实验室检测在疫情处置中的重要作用，提高检测技术水平。方法包括样品采集器材、采样方法、样品种类和数量以及实验室检测器材和检测方法，检测方法按霍乱防治手册（第6版）和WS289-2008。结果全部所检样品中，8份患者第1次采集粪便和1份患者服药后采集的肛拭样品、2名未发病者的肛拭、6份外环境样品(主要是病家厕所化粪池消毒前标本)为O139群霍乱弧菌阳性，其余均为阴性。结论检测工作在疫情处置中起到至关重要作用，应加大疫情应急演练的力度和频次，进一步提高基层实验室的应急处置能力和检测技术水平。

霍乱疫情；实验室检测；应急处理

霍乱属于甲类传染病，是由霍乱弧菌引起的一种急性腹泻性传染病。病发高峰一般在夏季，传播途径主要是通过水、水产品或海产品、生活接触和苍蝇传播，人感染后能在数小时内造成腹泻脱水甚至死亡。目前发现的能引起人类致病的主要是血清型为O1和O139群霍乱弧菌。湖北省松滋市境内于2016年10月发生了一起由O139群霍乱弧菌引起的霍乱疫情。由于卫生部门反应迅速、措施有效、处置得当，在最短的时间内有效控制了疫情的蔓延，未造成疫病流行。

1 疫情发生及流行病学调查经过

2016年10月5日上午8:30，松滋市疾病预防控制中心接到该市第一人民医院电话报告，该院收治了1例疑似霍乱患者。市疾病预防控制中心立即组织流调和检验专业人员按照二级生物安全防护要求迅速赶赴现场。经流行病学调查，患者黎某，女，53岁，家住松滋市新江口镇某小区，于10月1日到过家住松滋市陈店镇某村的妹妹家参加了其侄子的结婚宴,晚上回家后出现腹泻呕吐，第2天到市人民医院就诊。入院时临床表现以腹泻稀水样便并伴呕吐为主，腹泻物无粘液、浓血，呕吐呈现喷射状，无腹痛，无畏寒的发热，呈重度脱水，神志清楚但呈烦燥不安状。经临床诊断和该院实验室检测为O139群霍乱弧菌血凝阳性。市人民医院公共卫生科遂迅速报告市疾病预防控制中心，并按甲类传染病进行隔离治疗。市疾控中心实验室迅速派人到医院实验室收集该患者复核标本并到病房采集患者粪便标本，经专人专车送回实验室。经对患者的两份培养标本(碱胨水增菌液和庆大霉素平板)进行复核,结果为O139群霍乱弧菌血凝阳性。市疾控中心迅速向荆州市疾控中心报告,并派专人专车将标本送至荆州市疾控中心，经省市专家复核结果为O139群霍乱弧菌阳性。于时湖北省和荆州市两级专家组连夜赶赴松滋指导疫情处置工作。松滋市立即成立疫情处置指挥部,迅速启动疫情应急预案。经流行病学调查,这是一起由于婚宴集中进餐引发感染事件。经查明，2 d内参加婚宴就餐的人数为222人，主要集中分布于松滋市的陈店镇、新江口镇、老城镇、涴市镇、八宝镇、沙道观镇等6个乡镇，另外对宜昌的20名就餐者和荆州市沙市区的6名就餐者分别向当地疾控部门发出协查通知。

表1 首发病例病原学检测结果

2 实验室采样及检测

2.1 采样及检测材料

2.1.1 采样器材 含10 mL碱性蛋白胨水试管、含浓缩10倍碱性蛋白胨水50 mL的广口瓶、500 mL空无菌广口瓶、15 mL无菌采样管、肛拭采样器、棉签、一次性纸杯和塑料漏斗、封口膜、UN2814标本运送箱等。

2.1.2 检测器材 碱胨水增菌培养基、庆大霉素琼脂培养基、霍乱O1群和O139群诊断血清、霍乱O1群和O139群快速诊断金标试纸、氧化酶试纸、生物显微镜、暗视野显微镜等。

2.2 采样方法、种类及数量

2.2.1 采样方法 粪便、呕吐物用棉签取少量于10 mL碱胨水管中；水样（含污水）用一次性纸杯和漏斗取约450 mL于10倍浓缩碱胨水采样瓶中；食品或水产品取一定数量于无菌食品袋中密封；肛拭用肛拭采样器插入直肠内3～5 cm轻轻转动取出然后放入含10 mL碱胨水试管中，弃去尾部。

2.2.2 标本种类及数量 收集复核标本2份（患者粪便碱胨水增菌液1份、庆大平板培养物1份）；整个疫情处置过程中实验室共采集和收集本次霍乱疫情相关样品480份。其中患者粪便样品或肛拭样品63份，外环境样品（主要是厕所粪便样品和水样）47份，食品（含水产品）16份，物表样品14份，参加集中就餐人员肛拭样品61份，密切接触者肛拭样品29份，各疫点消毒效果监测样品120份，腹泻病例主动监测130人份。

2.3 检测方法

检测方法按霍乱防治手册（第6版）[1]和WS289-2008[2]。

2.3.1 增菌 标本接种于碱性蛋白胨水培养基中置37℃增菌6～8 h。为了提高检出率，可进行二次增菌。

2.3.2 分离培养 取增菌管中菌膜下表层一接种环培养物于庆大霉素琼脂平板中划线分离，置37℃培养18～24 h。

2.4 菌株鉴定

2.4.1 玻片凝集试验 直接挑取庆大霉素琼脂平板上的呈半透明状、表面光滑湿润、边缘整齐、菌落中央略呈灰黑色的可疑菌落与O1群霍乱弧菌多价诊断血清及O139群霍乱弧菌诊断血清做玻片凝集试验，同时以生理盐水作对照，如玻片上在1 min内出现肉眼可见的凝集块即断为阳性。

2.4.2 氧化酶试验 挑取庆大平板上血清凝集呈阳性的可疑菌落接种于营养琼脂平板中进行纯培养，取纯培养物涂抹于氧化酶试纸条上，在1～2 min内试纸变为紫红色至紫黑色的即判断为氧化酶试验阳性，不变色判定为阴性。

2.4.3 革兰氏染色 为革兰氏阴性短小稍弯曲的杆菌，无芽孢，无荚膜，菌体两端钝圆或稍平。

2.4.4 动力试验 取纯培养物在暗视野显微镜下可观察到霍乱弧菌呈穿梭样运动。

2.4.5 黏丝试验 霍乱弧菌呈黏丝试验阳性。

2.4.6 快速试验 用霍乱O1群和O139群快速诊断金标试纸做快速辅助检测。为检测赢得时间和提供下一步检测方向。

3 结果

3.1 病原学检测结果

因为该市此起霍乱疫情为湖北省2016年首发疫情，必须将首发病例标本送至湖北省疾控中心复核鉴定。鉴定结果如表1。

3.2 病原菌株药敏试验结果

该病原菌株对庆大霉素、阿奇霉素、氯霉素耐药；氨苄西林、头孢他啶中介；氨苄西林、头孢唑啉、头孢噻肟、红霉素、环丙沙星、甲氧苄啶等敏感。

3.3 相关样品检测结果

对本次霍乱疫情相关样品480份经检测，O139霍乱弧菌血清凝集试验阳性的样品共17份，其中患者9份（其中包含1例患者服药后肛拭检测仍为阳性样品1份），健康带菌者2份，外环境样品6份（外环境阳性样品主要是病家厕所和化粪池消毒前的样品）。其余463份样品为O139霍乱弧菌血清凝集阴性。

4 讨论与思考

①检测工作在疫情处置中起到至关重要作用。在该次霍乱疫情应急处置中，检验人员有条不紊、夜以继日地工作，在最短的时间内迅速上报检测结果，湖北省疾控中心和荆州市疾控中心的专家在第一时间内赶到进行复核确认，使得松滋市政府及时启动《突发公共卫生事件应急预案》四级应急响应，为疫情的联防联控、及时控制传染源，切断传播途径起到了非常重要作用。

②在处置疫情过程中，由于时间紧迫，对于患者早期的稀样便标本在进行增菌培养的同时可直接接种于庆大霉素琼脂培养上培养18～24 h，以节省时间[3]。

③增菌培养并不强求一定是6～8 h，应注意观察增菌液出现明显的细菌生长现象，即可进行分离培养。但原始样品增菌时间超过20 h时，样品中的大肠杆菌等大量繁殖，会给霍乱弧菌分离带来较大影响[4]。

④对于带菌状况调查、恢复期患者检测、水体样品、食品、海水产品、物品涂抹标本等可能目标菌含量较少，为提高检出率，需进行二次增菌[5]。其方法是从第一次增菌的6～8 h培养物中，吸取0.1～0.2 mL表层培养物，接种到新鲜碱性蛋白胨水中，再放置37℃培养6～8 h后，进行选择性培养基的划线分离。

⑤该次疫情的成功处置得益于湖北省近年来在疾控系统经常性开展应急演练。松滋市疾控中心在2008年全省举行的县级《霍乱疫情应急处置》演练中，获得了全省第一名。该次实战正是应急演练的翻版。正因为在多次演练中取得的经验，才使得检验人员在应急采样及检测中能有条不紊、临危不乱、快速准确，不做无用功，少走弯路，为控制疫情蔓延赢得宝贵时间。希望今后象类似的应急演练能够在基层长期开展下去。

⑥该市的这次霍乱疫情为一起集中进餐引发的群体性感染事件,虽然目前疫源检索还没有明确结论,但在此次疫情的发现和处置过程中,卫计部门快速准确的处置,流调组、检测组、消杀组密切配合,仅仅只用了10 d的时间就控制住了疫情,没有让疫情蔓延和扩散,没有发生第二代病例,特别是检验组人员在省市专家组的指导下，通过夜以继日的辛勤工作，在第一时间内发现阳性病例和带菌者，让医疗部门迅速采取治疗和隔离措施，对防止疫情扩散起到了至关重要的作用。这充分说明该省基层疾控中心实验室检测技术水平有了很大的提高。

[1]霍乱防治手册（第6版）[M].北京：人民卫生出版社,2013.

[2]WS289-2008霍乱诊断标准[S]中华人民共和国卫生部,2008.

[3]吴强，王树坤，杨汝松，等.2009年通海县一起食源性O139型霍乱暴发疫情的调查与应急处置[J].预防医学论坛，2010（12）：1097-1099.

[4]涂正波，唐丽君，吴景文，等.一起输入性O139型霍乱的暴发调查[J].现代预防医学，2011，38（14）：2844-2845.

[5]赵江义，付小强，李莎，等.一起群体聚餐引起的O139型霍乱疫情分析[J].疾病监测，2013，28(6)；508-510.

Analysis of Laboratory Test of Emergency Handling of a Cholera Epidemic

HU Lun-wen
Songzi Disease Control and Prevention Center,Songzi,Hubei Province,434200 China

ObjectiveTo further give play to and improve the important effect of laboratory test in the handling of epidemic and improve the test technical level.MethodsThe sample apparatus collection,collection method,sample species and number and laboratory test apparatus and test method were included and the test method was based on the cholera control handbook (sixth edition)and WS289-2008.ResultsOf all tested samples,the first stool collection of 8 cases,anal swab samples after medication collected of 1 case,anal swab of 2 cases without disease and 6 external environment samples were the positive vibrio cholerae O139 and the others were negative.ConclusionThe test work is of important significance to the handling of epidemic,and we should increase the emergency exercises force and frequency of epidemics and further improve the emergency handling ability and test technical level of the primary laboratories.

Cholera epidemic;Laboratory test;Emergency treatment

R115

A

1672-5654（2017）05（c）-0015-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2017.15.015

2017-02-20）

胡伦文（1965-），男，湖北松滋人，本科，副主任技师，研究方向：卫生检验。