一例疑似鸡传染性支气管炎诊断

孙燕（山东省潍坊市动物疫病预防与控制中心 261000）

一例疑似鸡传染性支气管炎诊断

孙燕（山东省潍坊市动物疫病预防与控制中心 261000）

潍坊市某养禽场送检了一批临床疑似传染性支气管炎的病鸡样品，临床表现为拉稀、消瘦、采食量下降，剖检发现肾脏肿大，花斑肾等症状。采集气管、肺脏进行实验室检测，通过荧光PCR方法对其进行检测，确诊为鸡传染性支气管炎。

鸡；传染性支气管炎；荧光RT-PCR；诊断

鸡传染性支气管炎（Infectious Bronchitis，IB）是一种急性、高度接触传染性疫病，主要引起鸡呼吸道、消化道以及生殖道疫病，是长期困扰养禽业的主要疫病之一，临床表现为气管啰音、咳嗽和打喷嚏，未免疫或免疫抗体低下的鸡容易引起呼吸道或肾脏的感染而引起死亡，尤其是近几年来，不断有养鸡场出现类似病例。

笔者接到一起临床疑似鸡传染性支气管炎的病例，养殖场近20000只鸡，25d左右出现轻微呼吸道症状，28d拉粪料和稀粪，30d左右开始出现病死鸡，每天死亡50只左右，剖检，有典型的花斑肾症状。

1 材料和方法

1.1 样品

采集病死鸡的气管、肾脏样品5份。

1.2 试剂

病毒RNA提取试剂盒，天根生化科技（北京）有限公司提供；鸡传染性支气管炎病毒荧光RT-PCR检测试剂盒，北京生科尚仪科技有限公司提供；新城疫病毒荧光RT-PCR检测试剂盒、禽流感病毒荧光RT-PCR检测试剂盒，凯杰生物工程（深圳）有限公司提供。

1.3 设备

高速冷冻离心机SIGMA3K-15，Roche Lightcycler 480荧光定量PCR仪。

1.4 方法

1.4.1 样品处理

取病死鸡的气管、肾脏样品，研磨，用pH7.2PBS液配制成体积比1∶5的混悬液，冻融3次，8000rpm离心5min，取上清备用。

1.4.2 核酸提取

取1.5ml离心管，加入离心好的上清140μl，加入裂解液560μl，震荡混匀，室温孵育10min，加入560μl无水乙醇，盖上离心管盖，震荡混匀；吸取630μl液体转移至吸附柱中，盖上盖子，8000rpm离心1min，弃去废液，将吸附柱放回到收集管中，将离心管中剩余液体按此步骤离心，弃去废液；加入吸附柱中500μl溶液GD，8000rpm离心1min，弃去废液，将吸附柱放回收集管；加入500μl溶液RW，8000rpm离心1min，弃去废液，重复此步骤1次；将吸附柱放回到收集管，12000rpm离心3min，使吸附膜完全干燥，弃去废液，将吸附柱转移至一个新的1.5mlEP管中，向膜中央加入60μl RNase-Free ddH2O，盖上盖子，室温5min，8000rpm离心1min，弃去吸附柱，得到病毒RNA，备用。

1.4.3 荧光RT-PCR

取0.1ml PCR八连管，每一个管中加入15μl RT-PCR反应液，0.25μl RT-PCR酶，0.25μl Taq酶，然后加入10μl病毒RNA，同时作阴性、阳性对照。将加好反应液的PCR管放入荧光定量PCR仪中，进行反应：42℃30min，92℃3min，5个循环： 92℃10sec，45℃30sec，72℃1min，40个循环：92℃10sec，60℃30sec。最后一步收集荧光，荧光信号收集设定为Fam荧光素。

2 结果

通过荧光RT-PCR检测，送检的5份样品，禽流感、新城疫病毒均没有Cp值，判定为阴性，鸡传染性支气管炎病毒，Cp值在17.91～25.90之间参见附表，判定为阳性。

附表 试验结果

3 结论与讨论

通过流行病学调查分析、剖检、实验室检测，确诊引起该养禽场发病的主要病因为鸡传染性支气管炎。

结合临床经验以及养殖场的现状，提出了防治措施：（1）加强养殖场的生物安全管理，防止疫病传入；（2）加强鸡群免疫，采用鸡传染性支气管炎病毒疫苗进行免疫，增强鸡群特异性免疫力；（3）加强监测，加强免疫抗体及病原检测，根据检测结果及时补免。

孙燕（1973年-），山东省昌乐县人，主要从事动物疫病监测工作。