肉牛胚胎移植技术要点分析

石 磊

（山东省济南市平阴县畜牧兽医局，山东 济南 250400）

胚胎移植是将具有优良遗传性状的早期胚胎从供体母牛体内取出，移植到另一头生理状态相同的母牛的子宫内，使其继续发育形成胎儿直到顺利分娩的过程。胚胎移植涉及的技术环节较多，每一环节的工作都对胚胎移植的成功与否影响极大，需做好各环节的工作。

提供胚胎的母牛为供体牛，接受胚胎的母牛为受体牛。胚胎移植技术充分发挥了优秀母牛的遗传和繁殖潜力，增加了优秀母牛的群体数量，对我国黄牛改良的意义重大。胚胎移植所涉及的技术环节较多，其中包括供、受体牛的选择和饲养管理、超数排卵、人工授精、胚胎采集、受体牛的同期发情和胚胎移植等。胚胎的遗传物质来源于供体母牛和与之配种的公牛，而胚胎发育所需要的营养物质则来自于受体牛，因此，胚胎移植的每一环节的工作都对胚胎移植的成功与否都影响极大。

1 供受体肉牛的选择与饲养管理

供体牛选择品种特征明显，具有较高生产性能的母牛，其遗传性状要求稳定，并且要系谱清楚。而受体牛一般选择当地的黄牛品种，应选择14～15月龄，体重在360kg以上的育成牛或年龄在2.5～5岁的1～2胎的成年母牛。供受体牛都要健康无病，繁殖性能良好，没有流产史，发情周期正常，并且性器官的发育也要求正常。从外形上看母牛的体格要求较大、膘情保持在中等以上、性情温驯，对长期空情，有流产史且性器官畸形的母牛不宜选择作为供、受体母牛使用。

无论是供受体母牛都要进行科学的饲养管理，合理的饲喂，提供适宜的营养物质，营养是影响母牛繁殖能力的主要因素，所提供的饲料要求多样且品质优良，青饲料、粗饲料、精饲料以及各种饲料添加都要搭配合理，以保证肉牛摄入充足的营养物质，同时还要保证母牛摄入充足且清洁的饮水。

2 供体牛的超数排卵处理

胚胎移植需要对供体母牛进行超数排卵处理，以获得多枚胚胎，一般要求供体母牛的排卵数量要在10枚左右，如果排卵数量过多，会易起卵巢囊肿，并且排卵效果不稳定，如果排卵过少则会降低胚胎移植的意义，还会造成胚胎难以采集。超数排卵主要使用的药物有促卵泡素(FSH)、氯前列烯醇(PG)或阴道栓(CIDR)等，超数排卵过程中在发情后的第9～13天，连续4d早晚肌注促卵泡素，中间间隔12h，在注射后的第3天用氯前列烯醇处理。或可以在供体牛发情期到来前的4d即发情周期的第16d注射促性腺激素，然后在出现发情状况的当天注射绒毛膜促性腺激素。

3 受体牛同期发情技术

同期发情技术是胚胎移植的一个重要的环节，可为超数排卵的供体牛在同一时间内准备足够的用于移植的受体牛，通过与受体牛同期化处理可以使供、受体牛的生理状态保持相同。在同期化处理时，发情时间与供体牛最好提前1d，并且受体牛的处理头数一般为供体牛的5倍。常用的同期发情技术为前列腺法，可分为一次前列腺法和二次前列腺法，一次法是对处于发情周期第10d的受体牛一次肌注前列腺素2～4mL，诱导其发情，发情后第7天再进行移植。二次法是对在第一次肌注前列腺素后的11d再次肌注前列腺素2～4mL，在发情后第7天移植。实际表明，注射二次法的效果要优于注射一次法。

4 胚胎的采集与贮存

胚胎的采集在母牛发情配种后的第7天进行，将发情当天视为0d，实施冲胚，在冲胚前需要通过直肠法检查卵巢黄体的个数，以判断可冲出胚胎的个数，在冲胚前需要准备好器械和冲胚液，所有的器械都要严格的消毒，冲胚液则要提前在35～37℃的水浴锅内预热。在操作时采用直肠把握法将冲卵管插入一侧的子宫角的深部，注入冲卵液后将子宫角抬高，使冲卵液回流，并将其回收。一般一侧的子宫角需要反复冲7次左右。冲胚结束后需要直接从冲管向子宫角内灌注抗生素和氯前列烯醇。

采集的的胚胎需要进行检查，并对胚胎进行鉴定和分级。首先要将胚胎回收，一般使用沉淀法，将回收液静置20min后将上清去除，吸到液面还有2～2.5cm深时即可。胚胎的鉴定要在显微镜下观察胚胎分裂与否、形态色调、均匀度、细胞的密度等情况，并将胚胎分分A、B、C、D4级。其中A、B、C级胚胎为可用胚胎，并且A、B级为可冷冻胚胎，C级胚胎只能用于鲜胚移植，D级胚胎为不可用胚胎。

一般采集的鲜胚需要进行冷冻保存，以保持活力，可选择常规冷冻法，将胚胎置于防冻液中平衡一段时间，然后装管后以每分钟降低0.3～0.5℃的速度降低至-7℃，植冻后温度缓慢的降低至-35℃，平衡10min后迅速置于液氮中保存。

5 胚胎的解冻与移植

胚胎移植可分为鲜胚移植和冻胚移植。冻胚在解冻后可直接移植，先从液氮中取出细管，置于空气中10s，然后再将其置于35℃温水中10s，将封口端剪去，装入移植枪。输胚采用直肠把握法，在输胚前要考虑胚胎的发育情况和采体牛的发情时间，一般输胚前需要确定受体牛处于发情周期的6～8d，并还要确定卵巢上有明显的黄体存在，并且输胚还要在有黄体一侧的子宫角深处，操作的方法与人工授精相同。

胚胎移植后要注意观察受、供体牛的健康情况以及发情情况，对供体牛在下次发情时可正常配种，如果受体牛在胚胎移植后仍发情，则说明移植失败，如果未表现出发情，则要观察3～5个情期，并做好妊娠的诊断工作。