梅州香樟挥发油成分及其脂质体凝胶的制备

叶小玲,赵 莹,张声源,黄诗玲,聂 华

(嘉应学院 医学院，广东 梅州 514031)

香樟(Cinnamomumcamphora(L.)Presl)是一种四季常青的樟科植物。其广泛分布于广东、湖南等亚热带地区。由于其枝叶中富含右旋龙脑，使它成为提取右旋龙脑的重要原材料。右旋龙脑又名天然冰片[1]，即可外用又可内服，外用可清热止痛，抑菌止痒，内服有开窍醒脑之功效，如今很多方剂中都含有冰片的成分。作为高级香料，天然冰片香气飘逸，清香扑鼻，令人心旷神怡，素有植物麝香之美称[2]。就目前而言，可查文献中鲜有报道关于香樟挥发油的皮肤外用制剂[3-4]。就此本实验用水蒸气蒸馏法提取梅州产香樟叶子中挥发油成分，通过气质联用仪(GC-MS)分析梅州香樟挥发油中所含成分，并将其制成脂质体凝胶供皮肤用制剂，为梅州香樟的药用开发提供科学参考。

1 仪器与试药

RE-5298旋转蒸发仪(上海亚容生化仪器厂)；SHZ-D(Ⅲ) 循环水真空泵(上海东玺制冷仪器设备有限公司)；舜宇恒平FA2104S电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；明澈-D24UV纯水系统；安捷伦6820-气相色谱仪(长沙科美分析仪器有限公司)；粒经分析仪(美国产)； 5973N气相色谱-质谱联用仪(美国Aglient公司)。

新鲜香樟树叶(梅州产)；右旋龙脑对照品(购自中国药品生物制品鉴定所)；卵磷脂(HSPC)(上海艾韦特医药科技有限公司)；胆固醇(CHS)(上海艾韦特医药科技有限公司)；羧甲基纤维素钠(北京贝丽莱日用化工厂)蒸馏水。

2 方法

2.1 水蒸气蒸馏法制备梅州香樟挥发油[5]

采集新鲜梅州香樟树叶粉碎，采用水蒸气蒸馏法提取挥发油。称取180g新鲜梅州香樟树叶，水蒸气蒸馏3.5h，收集馏出物后，加入过量无水硫酸钠并充分振荡，静置20min。使用循环水式真空泵抽滤装置对混合物进行抽滤，得不含水分透明液体置于蒸发皿中，待溶剂挥发即得晶体。称量，计算挥发油的得率。

2.2 气相色谱-质谱联用技术分析香樟挥发油成分

取2.1项下香樟挥发油溶解于适量正己烷，采用GC-MS分析其主要成分，各组分相关浓度通过峰面积归一化法计算求出各化合物的峰面积相对含量。

2.3 香樟挥发油脂质体凝胶的制备[7]

2.3.1 香樟挥发油脂质体的制备[8-9]

精密称取氢化大豆磷脂40mg，胆固醇6.6mg，梅州香樟挥发油5.35mg至250mL茄形烧瓶中，加入13mL的氯仿，将烧瓶置于50℃的超声仪中溶解3min后置于常温40℃真空120r·min-1的旋转蒸发仪中旋转蒸发1h使之均匀成膜。成膜后加入5mL的PBS缓冲溶液，继续水化30min，再将烧瓶置于50℃的超声仪中分散5min，静置冷却后定容至5mL，0.45μm微孔滤膜过滤，即得香樟提挥发油脂质体。

2.3.2 香樟挥发油脂质体包封率的测定[10]

2.3.2.1 气相色谱条件

色谱柱：ZB-WAX毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，柱流量：2.0 mL·min-1；检测器：氢火焰离子化检测器(FID)；载气：N2，流量为45 mL·min-1；燃气：H2，流量为40 mL·min-1；助燃气：空气，流量为450 mL·min-1；进样口温度：200 ℃；检测器温度：280 ℃；进样量：1 μL；分流进样。分流比为10∶1；程序升温：初始温度为120 ℃，保持10 min，以20 ℃·min-1升至200 ℃，保持4 min。在上述条件下，右旋龙脑峰与内标峰及其他杂质峰达到基线分离，分离度均>1.5，理论塔板数按右旋龙脑计算应不低于2000。

2.3.2.2 标准曲线的建立

精密称取干燥至恒重的右旋龙脑对照品0.1250 g于25 mL容量瓶中，加入无水乙醇定容至刻度，即得对照品母液。精密吸取上述对照品母液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分别置10 mL容量瓶中，各加上述内标液1 mL，再加无水乙醇至刻度，摇匀。取1 μL注入GC仪，最终结果以右旋龙脑浓度为横坐标，以右旋龙脑峰面积为纵坐标，进行线性回归。

2.3.2.3 包封率实验

精密吸取2.3.1项下所制备的脂质体4.0mL在10000r/min的条件下离心30min，记录上层清夜的体积，可测出游离药含量w；取下层沉淀用1.5mL无水乙醇破膜，在5000r/min条件下离心15min，取上层清夜测含量W，并记录体积。包封率计算公式如下：

包封率E=W/(w+W)×100%

2.3.3 香樟挥发油脂质体粒径的测定

将2.3.1项下所制备的脂质体适量置于粒径分析仪，测定脂质体粒径。

2.3.4 香樟挥发油脂质体凝胶的制备

取适量CMC-Na，加入适量的乙醇和水，放置过夜，使其充分溶胀，搅拌均匀，得无色透明的胶状物质。取2.3.1项下脂质体适量加入溶胀好的羧甲基纤维素钠中，再加入2ml的甘油，研磨均匀，即得香樟提取物脂质体凝胶。

3 结果与分析

3.1 梅州香樟挥发油的提取及其化学成分

采用水蒸气蒸馏法对新鲜的梅州香樟树叶进行提取，计算出其提取率平均值为2.01%。

通过GC-MS鉴定出梅州香樟挥发油中主要含有右旋龙脑(78.56%)和樟脑油(21.07%)，还有极少量的桉叶油醇、alpha-松油醇和α-石竹烯。结果显示，梅州香樟树叶挥发油的右旋龙脑含量还是可观的。

目前梅州地区广泛生长的梅片植物，其树叶挥发油中就富含天然右旋龙脑，含量达70.81%，且挥发油提取率为0.58%。但本实验结果表明，与梅片树叶相比，采用同样的水蒸气蒸馏法提取挥发油，梅州香樟输液中挥发油的提取率更高达到2.01%，且挥发油中右旋龙脑的含量更高，达到78.56%。加上香樟这种植物在环境中生长区域广，因此香樟可作为梅州生产右旋龙脑的重要原材料。

3.2 梅州香樟挥发油脂质体凝胶的制备结果

3.2.1 外观

经薄膜分散法制备的梅州香樟挥发油脂质体为乳白色液体，加药后进一步制得含药凝胶为无色透明的半固体凝胶状。

3.2.2 包封率

按2.3.2.2项下方法测定，以右旋龙脑浓度为横坐标，以不同浓度右旋龙脑峰面积为纵坐标，进行线性回归得Y=0.5611X+0.0085(r=0.9996，n=6)。结果表明右旋龙脑浓度在0.2～0.7 mg/mL-1范围内药物浓度与峰面积呈良好线性关系。按2.3.2.3项下方法测定药物浓度，平均包封率为84.6%(n=3)。

3.2.3 粒径

按2.3.3项下方法测得含药脂质体粒度大小均匀，平均粒径为135.1nm。将脂质体冷藏1周后测定，外观、包封率和粒径无变化。

4 结论

本实验取材于梅州地区生长的香樟植物，取其新鲜树叶通过水蒸气蒸馏法提取树叶挥发油，并采用气相色谱-质谱联用仪分析所得挥发油的化学组分及其含量，进一步将梅州香樟挥发油制成脂质体凝胶。实验结果表明，梅州香樟树叶挥发油水蒸气蒸馏法提取率可达到2.01%；气相色谱-质谱联合分析可知，该挥发油主要含有右旋龙脑(78.56%)和樟脑油(21.07%)；进一步制得该挥发油脂质体凝胶包封率为84.6%(n=3)，平均粒径为135.1nm。本实验结果表明梅州香樟可以作为生产天然右旋龙脑原材料来源，而且可进一步加工制成脂质体凝胶制剂应用皮肤科疾病治疗，具有广阔的应用前景。

[1] 李建民,胡世霞,李华擎.中药冰片的商品种类及其历史源流[J].中国现代中药,2013,15(6):531-534.

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