液相色谱法测定大米中苄嘧磺隆不确定度的评定

◎ 李 璟，申 瑶

（江苏省无锡市产品质量监督检验院，江苏 无锡 214101）

苄嘧磺隆是一种选择性内吸传导型除草剂，对小麦、水稻等作物安全性好。在麦田使用，能有效防除猪殃殃、繁缕、碎米荠、播娘蒿、荠菜、大巢菜、藜和稻槎菜等阔叶杂草。对眼睛、皮肤和黏膜有刺激作用，没有专门的解毒药，需用水冲洗皮肤和黏膜，如摄入需催吐。

本文参照行业标准SN/T 2212-2008《进出口粮谷中苄嘧磺隆残留量检测方法 液相色谱法》[1]测定大米中苄嘧磺隆，并参照JJF1059.1-2012《测量不确定度评定与表示》[2]对其测定进行了不确定度评定。对于检测结果达到标准要求，给出定量的分析，检测的最终结果有效、可靠，作为化验室苄嘧磺隆检测结果准确性评价的一个重要指标。本实验对进一步完善大米中苄嘧磺隆的质量控制体系和实验室管理具重要意义。

1 试验部分

1.1 仪器及试剂

美国Agilent 1200液相色谱仪，配置DAD检测器。苄嘧磺隆标准品：由农业部环境保护科研检测所提供，具有溯源性，其浓度为100 μg/mL，不确定度为 ±0.11 μg/mL。

乙腈（色谱纯）；甲醇（分析纯）；二氯甲烷（分析纯）；正己烷（分析纯）；4%氯化钠水溶液（分析纯）；氟罗里硅土固相萃取柱（6 mL）；C18固相萃取柱（3 mL）。

苄嘧磺隆标准工作液：取适量苄嘧磺隆标准溶液，用乙腈配制成1 μg/mL。

1.2 测量条件

流动相：乙腈+水（40+60）；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min；进样量：10 μL；检测器：DAD检测器；色谱柱：Agilent XDB-C18，4.6 mm×150 mm，5 μm；检测波长：238 nm。

1.3 样品处理

在规定的环境条件下，取10 g（精确到0.01 g）大米置于锥形瓶中，加入二氯甲烷溶液振荡提取，旋转蒸发至干，用4%氯化钠水溶液溶解提取物，再用正己烷溶液萃取，旋转蒸发至干，用水溶解，过C18固相萃取和氟罗里硅土固相萃取柱净化，用甲醇洗脱，氮吹，加1.0 mL流动相溶解提取物过0.45μm膜，上液相色谱测定。

1.4 数学模型

大米中苄嘧磺隆检测是用液相色谱外标法确定，其数学模型为：

其中：X为样品中苄嘧磺隆残留量，单位为mg/kg；C为基准标准溶液中待测物的浓度，单位为μg/mL；V为样品溶液最终定容体积，单位为mL；m为样品溶液所代表的样品质量，单位为g；Ai为样液中待测物的峰面积；AS为基准标液中待测物的峰面积。

1.5 方差和传播系数

为不确定度合成的计算方便，用相对不确定度表示各分量的标准不确定度，合成后再换算成绝对不确定度。

2 确定度主要来源

本测量结果不确定度主要来源于以下分量：①测量结果的重复性urel(X)。②由标准使用液浓度引入的不确定度ucrel(C)。③样品称量引入的不确定度ucrel(m)。④样品定容不确定度ucrel(V)。

3 逐项评定标准不确定度

3.1 A类不确定度评定

测量结果的重复性分量评定。在相同条件下，同一试样重复测量8次，结果见表1。

表1 样品测定结果表

测量结果重复性引入的不确定度为：

代入数据得：

3.2 B类不确定度评定

3.2.1 标准基准使用液产生的不确定度

标准基准使用液产生的不确定度包含了标准品不确定度和配制标准基准使用液产生不确定度。

3.2.1.1 标准物质的不确定度

苄嘧磺隆标准品由农业部环境保护科研检测所提供，具有溯源性，其浓度为100 μg/mL，不确定度为±0.11 μg/mL。因此，标准物质的相对标准不确定度为：

3.2.1.2 标准基准使用液的不确定度

按JJG l96-2006《常用玻璃量器》[3]规定，配制储备液及标准基准使用液中各容器引入的不确定度如表

2， 20 ℃时取均匀分布。

表2 各容器产生的不确定度表

配制储备液及标准基准使用液产生不确定度：

实验室温度变化介于18～22 ℃，由温度的变动引入的标准溶液的浓度的相对标准不确定度完全可以忽略不计。

故标准基准使用液产生的不确定度为：

3.2.2 由样品质量（m）引入的不确定度

用精确至0.01 g天平准确称取大米样品10.00 g，所用天平最大允许误差为±0.05 g，属均匀分布，即：

3.2.3 样品定容体积（V）不确定度

本方法最终样液体积为1.0 mL，依据JJG 196-2006《常用玻璃量器检定规程》[3]规定，标称容量为1 mL、分离量为0.01 mL的移液管的允差为±0.008 mL，正态分布，以99%概率计，样品定容不确定度为：

3.3 合成相对标准不确定度的计算

3.4 扩展不确定度的计算

大米中苄嘧磺隆残留量测定测量结果扩展不确定度计算结果如下，

3.5 含量结果表示

X=0.011 3 mg/kg±0.000 5 mg/kg，则大米中苄嘧磺隆残留测量结果为（0.011 3±0.000 5）mg/kg。

4 结果与讨论

从各不确定度分量值可以看出，液相色谱仪测量结果重复性urel(x)占总不确定度比例最大，其次是标准溶液引入的不确定度和定容体积的不确定度，样品称样量的不确定度所占比例小，几乎可以忽略。由此可以看出，在做大米中苄嘧磺隆分析测定时，对其分析检测结果准确性影响最大的是液相色谱DAD检测器的准确性（包括色谱条件、色谱柱、检测器的灵敏度等）、检验人员对其前处理过程平行性的熟练的控制。该法的扩展相对不确定度能控制在比较低即4.06%，完全满足检测要求。本文为本实验室今后在该类项目检测过程控制提供了参照，同时也指出了保证检测结果准确的关键点，为以后的检测工作提供一定的技术基础。