凯氏定氮-气相色谱法测定蓝莓利口酒中微量甲醇的含量

◎ 熊建军，杨 坤，张建炀，邹大维

（贵州省黔东南苗族侗族自治州食品药品检验检测中心，贵州 凯里 556000）

随着人们生活水平的不断提高，果酒为越来越多的人所喜爱，成为人们提高生活品味的消费品。蓝莓利口酒用新鲜的浓缩蓝莓汁，加入茅台优质的酱香基酒等后，经特殊工艺制成，营养丰富，呈天然宝石红色，澄清透明，酒香浓郁，甘甜醇厚，具有野生浆果的独特风格。蓝莓利口酒成分复杂，除含有水、乙醇、蛋白质、糖、无机盐、有机酸、果胶和微量元素外，还存在一定量的有毒有害甲醇。因此，甲醇是饮料酒中重要的卫生质量控制指标之一。

甲醇对人体的危害在于甲醇在人体中随新陈代谢氧化成毒性更强的甲酸和甲醛，主要危害人体的神经系统。轻度中毒表现为胸闷、恶心等，中度中毒表现为神志模糊、失明等，重度中毒表现为双目失明、昏迷甚至因呼吸衰竭而死亡[1-5]。国家标准GB 5009.266-2016中规定用蒸馏瓶方法蒸馏发酵酒和配制酒操作复杂，蒸馏速度慢，重复性差等，不适用于大批量酒样分析[6]。本文研究采用凯氏定氮仪蒸馏蓝莓利口酒，用白酒专用柱CP-WAX57CB柱分离，经气相色谱仪分析摸索出快速检测蓝莓利口酒中甲醇含量的条件，为果酒、配制酒大批量分析甲醇提供检测参考。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

样品：悠蜜蓝莓利口酒（酒精度12%vol），贵州茅台（集团）生态农业产业发展有限公司生产。

仪器设备：GC-2010plus型气相色谱仪，（配FID氢火焰离子检测器，自动进样器，氢气发生器）日本岛津公司；CP-Wax57CB毛细管分析柱（50 m×0.25 mm×0.2 μm），美国安捷伦公司；Milli-Q型纯水系统，美国Millipore公司；KDN-103F型自动定氮仪，上海纤检仪器有限公司。

试剂：甲醇（色谱纯，99.7%），中国计量科学研究院；叔戊醇（色谱纯，99.5%），Dr.Ehrenstorfer GmbH；无水乙醇（色谱纯99.7%），天津市科密欧化学试剂有限公司；去离子水，电阻率＞18.0 MΩ·cm。

1.2 色谱条件

色谱柱：CP-Wax57CB（50 m×0.25 mm×0.2 μm）；载气N2；柱流速：1.20 mL/min；进样口温度220 ℃，柱温35 ℃，程序升温：35 ℃，保持4 min；5 ℃/min升至80 ℃；25 ℃/min升至200 ℃，保持3 min，检测器温度260 ℃。控制模式：线速；分离比：50∶1；进样量：1.0 μL。

1.3 甲醇标准溶液的配制

1.3.1 甲醇标准储备液的配制

准确吸取0.5 g（精确至0.000 1 g）甲醇至100 mL容量瓶中，用40%的乙醇溶液定容至刻度，混匀，在0～4 ℃低温冰箱密封保存。

1.3.2 甲醇系列标准工作液的配制

分别吸取0.5、1.0、2.0、4.0 mL和5.0 mL甲醇标准储备液，于5个25 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至刻度，依次配制成甲醇含量为100、200、400、800 mg/L和1 000 mg/L系列标准溶液，混匀。

1.4 内标物标准溶液的配制

准确称取2.0 g（精确至0.000 1 g）叔戊醇至100 mL容量瓶中，用乙醇溶液定容至100 mL，混匀，0～4 ℃低温冰箱密封保存。

1.5 样品的测定

准确吸取100.0 mL试样于250 mL消化管中，用少量去离子水清洗容量瓶后倒入消化管中蒸馏5 min，接口用冷水浴的100 mL容量瓶接收，当接近刻度时，取下容量瓶，待溶液冷却至室温后，用去离子水定容至刻度，混匀。吸取10.0 mL蒸馏后的溶液于试管中，准确加入100 μL叔戊醇内标物标准溶液，混匀，上机分析，结果见图1。

图1 蓝莓利口酒色谱分析图

2 结果与讨论

2.1 方法的线性方程和检出限

准确吸取甲醇标准使用液各10.0 mL于试管中，准确加入100 μL叔戊醇内标物标准溶液，摇匀，分别进样1.0 μL，测得标准样品色谱图，结果见图2。以甲醇与叔戊醇峰面积比为纵坐标，甲醇浓度为横坐标绘制标准曲线（见图3），用Orign7.5软件对标准系列进行线性回归得甲醇（100.0～1 000.0 mg/L）的回归方程为Y=3.42×10-3X-4.152×10-2，R=0.999 37，结果表示该方法的线性非常好。以3倍信噪比对应的含量定义方法检出限，以10倍信噪比相对应的含量定义为定量限，该方法的检出限为1.2 mg/L，定量限为4.0 mg/L。

图3 内标标准曲线法分析甲醇的标准曲线图

2.2 方法的精密度和加标回收实验

在样品中加入已知浓度的标准物质，通过和样品完全相同的前处理方法上机测试，测得的值减去原样品的值后与理论加标的比值的百分数为加标回收率。回收率=（加标后测量值-样品中的含量值）/理论加标量×100%。

本实验通过添加3个不同浓度水平的标准品，每个水平重复测试6次，测得甲醇的回收率范围和相对标准偏差。实验结果表明，该方法的加标回收率为88.72%～96.99%，相对标准偏差（RSD，n=6）为0.65%～3.24%，具体数据见表1。这表明所建立的分析方法的准确度均满足检测要求。

表1 加标回收实验结果表

2.3 样品检测

本次研究一共对62批次蓝莓利口酒进行分析检测，结果发现其按100%酒精度择算甲醇含量在0.4～0.5 g/L，均小于国家标准GB 2757-2012规定的限量值2.0 g/L。

3 结论

本实验通过优化蓝莓利口酒蒸馏处理环节，减少能源消耗，降低实验过程中操作的复杂性，大大节约了样品处理过程时间，为大批量发酵酒和配制酒检测提供了技术方案。该方法准确可靠，完全适用于蓝莓利口酒中微量甲醇的测定。