中药注射液对自体脂肪颗粒移植存活率的影响

林辉 王琳娜 文清 梁桂枝

[摘要]目的：探索对兔自体脂肪颗粒移植存活率有促进作用的中药注射液。方法：20只兔建立自体脂肪颗粒移植模型，随机分为5组，各组分别肌肉注射生脉、刺五加、黄芪、参麦注射液及生理盐水0.37ml/kg·d，90d后检测移植脂肪的质量，计算移植脂肪存活率。结果：术后90d，4种中药组移植存活率均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），生脉组移植成活率较高（P<0.05）。4种中药组血清VEGF表达水平在移植术后1周、3周和6周均明显高于对照组，生脉组显著高于其它3组，差异有统计学意义（P<0.05）；4种中药组毛细血管密度均较对照组明显增高，生脉组高于其它3组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论：0.37ml/kg·d剂量时，4种中药都可提高自体脂肪颗粒移植存活率，但是生脉的作用最强。

[关键词]中药；生脉注射液；黄芪注射液；参麦注射液；刺五加注射液；自体脂肪移植；存活率

[中图分类号]R622+.9 [文献标志码]A [文章编号]1008-6455（2018）05-0115-03

Effects of Traditional Chinese Medicine Injection on the Survival Rate of

Autologous Fat Grafting

LIN Hui，WANG Lin-na，WEN Qing，LIANG Gui-zhi

（Department of Laser and Plastic Surgery，the First Affiliated Hospital of Guangxi University of Chinese Medicine，Nanning 530022，Guangxi，China）

Abstract： Objective To explore the traditional chinese medicine to promote the survival rate of autologous fat grafting in rabbits. Methods Twenty rabbits were randomly divided into five groups. The groups were given different doses of shengmai， ciwujia， huangqi， shenmai and normal saline by intramuscular injection. Ninety days later， the survival weight of the fat grafts were detected and the survival rates were calculated. Results The survival rates of the four Chinese medicine groups were higher than that of the control group after 90d， the differences were statistically significant（P<0.05）. The survival rate of the grafts in the Shengmai group was higher than that of the other three groups（P<0.05）. The level of serum VEGF in the four Chinese medicine groups were significantly higher than that of the control group at 1 week， 3 weeks and 6 weeks after transplantation， and the Shengmai group was significantly higher than that of the other three groups（P<0.05）. The capillary density of the four Chinese medicine groups were significantly higher than that of the control group， and the Shengmai group was higher than the other three groups（P<0.05）. Conclusion The survival rate of autologous fat grafting was improved by the four kinds of chinese medicine， but the effect of shengmai injection was the strongest at this dose of 0.37ml/kg·d.

Key words： traditional chinese medicine； shengmai injection； huangqi injection； shenmai injection； ciwujia injection； autologous fat grafting； survival rate

自體脂肪组织作为理想的软组织填充物，具有取材容易、无免疫排斥等优点。但注射脂肪存在着吸收率较高的问题，严重影响了自体脂肪移植效果[1-2]。生脉、刺五加、黄芪、参麦均具有活血化淤，改善微循环、保护细胞等功效。为了探讨中药对脂肪移植成活率的影响，本实验研究肌肉注射这4种中药对兔自体脂肪颗粒移植成活率的影响。现报道如下。

1 材料和方法

1.1 材料：生脉注射液（四川川大华西药业股份有限公司），刺五加注射液（黑龙江乌苏里江制药有限公司），黄芪注射液（上海福达制药有限公司），参麦注射液（四川升和药业股份有限公司），VEGF的ELISA试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。新西兰大白兔20只（广西中医药大学动物实验中心提供），体质量2.5～3.0kg。

1.2 自体脂肪移植模型的建立：兔全麻后，固定于手术台上，刮除腹股沟及双耳背部皮毛。常规消毒铺巾，于腹股沟处取出腹股沟脂肪约2.5ml。剪碎，生理盐水冲洗，获得直径1～2mm的脂肪颗粒。将脂肪颗粒吸入1ml注射器内，用16G注脂针分别注入双耳背部皮下共4处，每处0.5ml。

1.3 分组：20只兔随机分成5组，分别给予肌肉注射生脉、刺五加、黄芪、参麦注射液和生理盐水0.37ml/kg·d，均持续用药2周。

1.4 标本采集与检测：术后90d进行脂肪移植物标本取材，完整取下脂肪移植物，剪去周围组织及包膜，精密天平准确测量其质量。测得移植物存活率=移植后样本质量/移植前质量×100%。移植物称量后置入4%多聚甲醛固定24h，流水冲洗过夜。乙醇梯度脱水后，将标本置于透明二甲苯中浸泡，浸蜡后，进行包埋，行HE染色及血管内皮细胞Ⅷ因子免疫组化染色。脂肪移植术后1周、3周、6周于耳缘静脉采血，每只采血1ml，以1 500r/min离心5min后，取上层血清，-80℃冰箱保存，酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清VEGF表达水平。

1.5 统计学分析：采用SPSS 20.0统计软件进行数据分析，存活率比较采用卡方检验，VEGF表达和毛细血管密度采用单因素方差分析进行检验，P<0.05认为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 大体观察：实验过程中无动物死亡，耳背皮下可见丘状隆起的脂肪移植物。均未见脂肪液化、坏死、空腔或脓肿形成。脂肪移植体均表现为质地柔软、边界较清晰、活动度良好的组织团块，脂肪移植体均呈暗黄色，外部被一层纤维组织包膜覆盖，界线比较明显。大体观察可见4种中药组脂肪组织移植物体积均大于对照组，刺五加、黄芪和参麦3组差别不大，但生脉组稍大于刺五加、黄芪和参麦组。

2.2 五组移植脂肪存活率及血清VEGF表达情况：术后90d，4种中药组移植存活率均高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）；但生脉组自体脂肪颗粒移植成活率较高，与其它3组比较差异有统计学意义（P<0.05）。4种中药组血清VEGF表达水平在移植术后1周、3周和6周均明显高于对照组（P<0.05），生脉组显著高于其它3组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.3 组织学观察：HE染色结果显示，对照组移植脂肪组织中有较多脂肪细胞融合，存活脂肪细胞大小不规则，分布不均匀，脂肪组织间纤维结缔组织较多，血运不丰富，新生血管不明显。刺五加、黄芪和参麦3组脂肪细胞存活较好，新生脂肪细胞排列比较整齐，新生血管较丰富，但各组间差别不明显。生脉组脂肪细胞存活最好，新生脂肪细胞排列整齐，形态规则，分布均匀，脂肪小叶以及脂肪小叶间纤维组织保持较好，周围新生血管丰富。见图1。

2.4 免疫组织化学染色结果：血管内皮细胞Ⅷ因子免疫组化染色后，血管呈现棕黄色。对照组移植脂肪组织血运不丰富，新生血管不明显。刺五加、黄芪和参麦3组移植脂肪组织周边区和中心区血管均较丰富，但生脉组移植脂肪组织周边区和中心区血管更丰富。见图2。

2.5 毛细血管密度检测结果：对照组移植脂肪组织毛细血管密度为（13.06±6.64）条/HP，刺五加组为（20.16±3.24）条/HP，黄芪组为（20.32±3.34）条/HP，参麦组为（20.61±3.32）条/HP，生脉组为（24.98±9.23）条/HP，4种中药组毛细血管密度均较对照组明显增高（P<0.05），生脉组高于其它3组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

为了提高移植脂肪存活率，国内外学者进行各种探索：选择不同脂肪供区、降低抽吸与注射时压力等方法，取得了一定的效果，但远期吸收率仍然较高[3-4]。移植早期及时建立血供，移植物及时地再血管化是影响其成活的关键。血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）具有较强的有丝分裂活性，有促进血管内皮细胞增殖和迁移、延长血管内皮细胞寿命等作用。VEGF可促进移植脂肪的血運重建，有效地提高移植脂肪存活率[5-7]。中医学有“气能生血”、“气能行血”、“补气活血”、“活血化瘀”等理论，随着对中药药理机制的深入研究，发现中药不仅有改善微循环，保护细胞，还有促进血管生成的作用[8]。

刺五加注射液为五加科植物刺五加的茎叶经水醇法提取精制而成， 能“补中益气， 强筋骨”。刺五加注射液能扩张血管，促进和改善微循环，降低血小板聚集功能，降低血液粘稠度，减少组织耗氧量，降低组织代谢，增加组织对乏氧的耐受性，提高人体超氧化物歧化酶活性及清除氧自由基的能力[9]。研究证实，刺五加皂苷可改善大鼠学习记忆能力，促进血管新生，可能与刺激VEGF进一步表达有关[10]。

黄芪是最常用的益气中药之一，益气不仅能生血，还能生络。黄芪有明显的促心肌梗死大鼠损伤心肌组织血管新生的作用，其机制可能是提高了CD34和VEGF的表达，引发内皮细胞的迁移和增殖，诱导内皮细胞的增多和新管腔形成[11]。黄芪注射液能促进兔VEGF表达，使新生血管增加，提高移植脂肪存活率[12]，与本实验结果一致。

参麦注射液的主要成分为红参、麦冬，具有益气固脱、补心复脉、养阴生津之功效。主治冠心病、病毒性心肌炎和各类急重症等。参麦能促进VEGF分泌，抑制心肌缺血时脂质过氧化，促进氧自由基清除，加快兔缺血心肌血管内皮新生[13]。参麦能促进大鼠缺血心肌血管内皮再生，对改善再灌注损伤血管内皮功能紊乱有一定的防治作用[14]。

生脉注射液具有理气开窍、生津复脉、扶正祛邪、活血化瘀等作用。生脉注射液可促进血管内皮细胞分泌NO，保护血管内皮功能，并促进血管内皮细胞分泌VEGF，促进血管新生增多，降低炎症反应[15]。生脉注射液能降低血清丙二醛而提高超氧化物歧化酶的活力，提供细胞保护作用[16]。生脉注射液具有耐缺氧、复氧损伤保护、促进血管新生等作用[17-18]。

本实验结果显示，自体脂肪移植术后90d，中药4组的存活率均高于对照组，提示4种中药注射液均能提高自体移植脂肪的存活率。HE切片染色及免疫组织化学染色观察显示，脂肪细胞大小与形态、新生毛细血管数量、移植脂肪组织纤维化程度等方面，中药4组均优于对照组，刺五加、黄芪和参麦3组差别不明显，生脉组稍好于其他3组。提示中药注射液可以增加移植脂肪组织内血供，加速移植物新生血管的形成，从而增加自体脂肪移植存活率和质量。中药4组的血清VEGF表达水平在移植术后第1、3、6周与对照组比较均有明显增高，可能是中药制剂在移植术后的早期发挥了扩张微小动脉和改善微循环的作用，同时上调了血清VEGF的表达。本实验提示中药在细胞保护、抗氧化和改善脂肪内部血供及微循环、诱导血管新生、血运重建方面均发挥了重要的作用。就本实验结果而言，在0.37ml/kg·d剂量时，生脉提高自体脂肪移植的存活率作用略佳。

中药注射液用药方法推荐肌肉注射、静脉注射及静脉输液，本实验采用肌肉注射主要是用药时操作简单，但是这4种中药局部应用是否也有相应作用，以及这4种中药中哪一成分有促进VEGF表达还有待进一步研究，还有中药组合应用是否更有利于提高自体脂肪移植的存活率，尚待深入研究。

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[收稿日期]2018-01-22 [修回日期]2018-03-12

编辑/朱婉蓉