氨基末端激酶参与胃癌顺铂耐药机制的研究

张 雯

（苏州市吴江区第一人民医院消化内科，江苏苏州 215200）

本研究旨在探讨氨基末端激酶参与胃癌顺铂化疗耐药机制的具体情况，结果如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年3月至2018年1月本院收治的122 例胃镜患者作为研究对象，所有患者均未接受放化疗治疗，均有完整资料。其中，男性70例，女性52例，年龄34～81岁，平均年龄（52.3±3.4）岁。同期选取35例手术切除的正常胃组织标本作为对照组。标本均用10%的甲醛液固定，应用石蜡包埋。

1.2 方法

（1）采用四氮唑炎还原法（MTT）检测药物的敏感性。将 SGC7901、SGC7901-DDP、SGC7901加 SP600125、SGC7901-DDP加SP600125所属细胞分别制成单细胞悬液，将其接种到96孔培养板上，设置DDP、ADM两种药物5 个梯度浓度，分别为：0.125、0.25、0.5、1.0、2.0μg/L，各个浓度均设3个复孔，应用MTT法来计算4种类型的DDP、ADM半数抑制浓度。

（2） 制作组织芯片。选用所需病例存档蜡块，用病理学专家依据苏木精—伊红染色切片观察切片形态学情况，确定出最具有代表性的病变部位，同时还需要避开出血坏死部位及纤维化区域，做好标记，之后借助组织微阵列仪来制作组织芯片蜡块[2]。借助组织微阵列仪在蜡块中打孔，在选用的癌组织、正常胃组织蜡块标记部位进行穿刺，将所有的标本都植于空白蜡块中，行连续切片，贴敷在1%额多聚赖氨酸上。

（3）免疫组化检验及判定结果。应用免疫组化染色方法进行检测，结果用阳性细胞占据百分比来表示。具体是在低倍的光镜下随机选择10个视野，各个视野中计数100个细胞，获得细胞均值，其中P-糖蛋白（P-gp）以胞质/胞膜出现棕黄色颗粒为阳性染色；p-氨基末端激酶（p-JNK）以胞质/胞核出现棕黄色的颗粒为阳性染色。阳性细胞的数量若≥10%为阳性表达，阳性细胞＜10%为阴性表达。

1.3 统计学分析

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（±s）表示，行t检验；计数资料用（%）表示，行χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细胞药物敏感性变化情况比较

MTT耐药情况显示，应用SP600125后耐药株对DDP、ADM敏感性增加，显示p-JNK抑制导致化疗药物对敏感株及耐药株生长抑制均有增强作用，见表1。

表1 MTT检测细胞药物敏感性情况比较（±s）

表1 MTT检测细胞药物敏感性情况比较（±s）

类别 DDP ADM SGC7901 0.33±0.03 0.31±0.02 SGC7901加SP600125 0.12±0.02 0.21±0.07 t 41.36 7.89 P 0.00 0.01 SGC7901-DDP 8.82±0.12 1.52±0.13 SGC7901-DDP加SP600125 1.62±0.18 0.62±0.21 t 7.86 23.36 P 0.01 0.00

2.2 P-gp与p-JNK蛋白表达在胃癌与正常胃组织中的表达与相关性

P-gp在胃癌组织中阳性表达率为53.28%（65/122），正常的胃组织中阳性表达率为22.86%（8/35），两者比较差异有统计学意义（χ2=10.118，P＜0.05）。p-JNK在胃癌组织中阳性表达率为45.08%（55/122），正常胃组织中的阳性表达率为11.43%（4/35），两者比较差异有统计学意义（χ2=13.131，P ＜ 0.05）。

P-gp和p-JNK蛋白共同阳性患者53例，P-gp和p-JNK蛋白共同阴性患者48例，P-gp阳性p-JNK蛋白阴性患者37例，P-gp阴性p-JNK阳性患者29例，相关系数r=0.221（P=0.003）。

3 讨论与结论

氨基末端激酶属细胞中重要信号传导成员，信号通路可以被应激因素与细胞因子激活，双特异性激酶JNK为JNK上游激活酶，可以活化JNK转录因子，使得c-fos结合至靶基因启动子区，调控靶基因转录[3-6]。当前，对于JNK在耐药机制中的作用尚且存在争议，耐药白血病细胞菌株中JNK持续激活的过度表达同耐药性呈现正相关的关系，有效抑制JNK的活性，降低多药耐性相关蛋白的表达，以增强细胞对药物敏感性[7]。

胃癌治疗上，一般应用顺铂化疗，主要是铂类药物能够增强JNK持续活化与下游因子表达，减少药物所致凋亡，这样可以增加小细胞肺癌药物敏感性[8]。与此同时，持续激活的JNK还可以导致下游c-Jun过度磷酸化，形成转录激活因子，JNK参与耐药双重性可能由于由细胞类型及条件依赖性特点所致[9-10]。本研究结果显示，P-gp在胃癌组织中阳性表达率为53.28%（65/122），显著高于正常的胃组织中阳性表达率22.86%，P-gp在胃癌组织中阳性表达率为53.28%（65/122），显著高于正常的胃组织中阳性表达率22.86%（8/35），且P-gp和p-JNK在胃癌组织中表达呈正相关。

综上，JNK通路参与了DDP所致胃癌耐药，高表达预示化疗的效果不佳，抑制通路可成为逆转耐药的新靶点。