岩生翠柏枝叶化学成分的研究

宁德生， 邹芷琪， 符毓夏， 李连春， 刘 演， 黄俞淞， 潘争红

（广西植物研究所，广西植物功能物质研究与利用重点实验室，广西 桂林541006）

岩生翠柏Calocedrus rupestris 为柏科翠柏属植物，为中国新记录种，零星分布于广西北部和西北部的石灰岩地区，由于人类活动对石灰地区的破坏，该植物在广西已列为濒危植物［1］，据研究报道，翠柏属植物主要含有萜类、 木脂素等成分［2-4］，具有抗菌、抗炎、抗氧化、 细胞毒等活性［4-7］。然而对该植物的化学成分研究，目前鲜有报导。为此，本课题组对岩生翠柏枝叶开展化学成分研究，从中分离得到11 个化合物，且均为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Shimadzu LC／MS-IT-TOF 质谱仪和LC-6AD 制备液相 （日本岛津公司）； 布鲁克AVANCE Ⅲ500 MHz核磁共振波谱仪（瑞士布鲁克公司）；柱层析分离填料硅胶（100 ～200 目，青岛海洋化工厂）；MCI gel（日本三菱化学公司）；岛津PCRODS（50 mm×250 mm，15 μm，日本岛津公司）。乙腈［色谱纯，赛默飞世尔科技（中国） 有限公司］；乙醇、石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇（分析纯，西陇化工股份有限公司）。

岩生翠柏枝叶采集于广西环江县，经广西植物研究所刘演研究员鉴定为翠柏属植物岩生翠柏Calocedrus rupestris 的枝叶。

2 提取与分离

岩生翠柏枝叶10 kg，阴干后粉碎，加入95%乙醇50 L，在室温下浸提24 h，过滤，滤渣再重复上述操作2 次，合并3 次提取液，减压回收溶剂得到浸膏950 g。取900 g 浸膏用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取3 次，每次萃取溶剂为2 L，回收溶剂后，分别得到石油醚部位168 g、乙酸乙酯部位284 g。

取石油醚部位160 g，注入硅胶层析柱，以石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0 ～1 ∶1） 梯度洗脱，根据TLC 检测结果进行合并，得6 个组分A-F，E 组分采用MCI 柱层析纯化，甲醇70%～100%梯度洗脱，分别得4 个部位E1-4。 部位E1 （0 ～ 40 min，50%～70%乙 腈， 乙 腈-水）、 E3 （0 ～40 min，70%～75%乙腈，乙腈-水） 分别经HPLC 制备得化合物4（5.4 mg）、5（9.5 mg）、6（12.3 mg）、1（12.3 mg）、2（6.7 mg）、3（8.8 mg）。

取乙酸乙酯部位260 g，注入硅胶层析柱，以氯仿-甲醇（100 ∶1 ～1 ∶1） 梯度洗脱，根据TLC检测结果进行合并，得6 个组分Fr.1-6，Fr.6 经硅胶柱层析（氯仿-甲醇9 ∶1） 与HPLC（0～40 min，45%～65%乙腈，乙腈-水） 纯化得化合物7（6.3 mg）、8（5.8 mg）、9（8.4 mg）、10（2.7 mg）、11（2.9 mg）。

3 结构鉴定

化合物1： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：331.2［M-H］-，分子式C20H28O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：7.18（1H，s，H-14），4.88（1H，brs，H-17a），4.79（2H，s，H-15a and 15b），4.60（1H，br s，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：38.9（C-1），19.7（C-2），38.4（C-3），44.0（C-4），56.0（C-5），25.8（C-6），37.7（C-7），147.2（C-8），55.4（C-9），40.3（C-10），21.6（C-11），28.8（C-12），144.4（C-13），134.2（C-14），70.2（C-15），174.6（C-16），106.6（C-17），28.8（C-18），183.6（C-19），12.6（C-20）。以上数据与文献［7］ 一致，故鉴定为pinusolidic acid。

化合物2： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：343.2［M＋Na］＋，分子式C20H32O3。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.36（1H，t，J ＝7.0 Hz，H-14），4.85（1H，brs，H-17a），4.52（1H，brs，H-17b），4.14（2H，d，J ＝5.5 Hz，H-15），1.66（3H，s，H-16），1.22（3H，s，H-20），0.59（3H，s，H-18）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），20.0（C-2），38.1（C-3），44.2（C-4），56.3（C-5），26.2（C-6），38.5（C-7），148.1（C-8），55.6（C-9），40.5（C-10），22.0（C-11），38.8（C-12），140.4（C-13），122.9（C-14），59.3（C-15），16.4（C-16），106.5（C-17），29.1（C-18），182.8（C-19），12.9（C-20）。以上数据与文献［8］ 一致，故鉴定为isocupressic acid。

化合物3： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：303.3［M-H］-，分子式C20H32O2。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.37（1H，t，J ＝5.5 Hz，H-14），4.89（1H，s，H-17a），4.56（1H，s，H-17b），4.13（2H，d，J ＝7.0 Hz，H-15），1.63（3H，s，H-16），1.02（3H，s，H-18），0.56（3H，s，H-20）；13CNMR（125 MHz，CDCl3）δ：38.4（C-1），19.2（C-2），38.4（C-3），48.6（C-4），54.8（C-5），21.9（C-6），34.3（C-7），147.3（C-8），56.0（C-9），40.0（C-10），24.0（C-11），38.3（C-12），139.7（C-13），123.3（C-14），59.1（C-15），16.3（C-16），107.3（C-17），24.3（C-18），206.0（C-19），13.5（C-20）。以上数据与文献［9］ 一致，故鉴定为isoagatholal。

化合物4： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：347.1［M-H］-，分子式C20H28O5。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：5.99（1H，s，H-16），5.84（1H，s，H-14），4.88（1H，s，H-17a），4.50（1H，s，H-17b），1.23（1H，s，H-18），0.61 （1H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），19.9（C-2），37.9（C-3），44.2（C-4），56.2（C-5），26.1（C-6），38.6（C-7），147.3（C-8），55.7（C-9），40.6（C-10），21.1（C-11），26.9（C-12），171.0（C-13），116.9（C-14），171.0（C-15），99.6（C-16），106.8（C-17），29.1（C-18），183.4（C-19），12.8（C-20）。以上数据与文献［10］ 一致，故鉴定为16-hydroxy-8（17），13-labdadien-15，16-olid-19-oic acid。

化合物5： 白色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：347.2［M-H］-，分子式C20H28O5。1H-NMR（500 MHz，CDCl3） δ： 6.85 （1H， brs， H-14），6.11（1H，brs，H-15），4.88（1H，brs H-17a），4.56（1H，brs，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3） δ：39.2（C-1），19.9（C-2），37.9（C-3），44.2（C-4），56.2（C-5），26.1（C-6），38.6（C-7），147.4（C-8），55.7（C-9），40.5（C-10），21.8（C-11），24.5（C-12），138.4（C-13），143.5（C-14），97.0（C-15），172.1（C-16），106.8（C-17），29.0（C-18），183.5（C-19），12.8（C-20）。以上数据与文献 ［10］ 一 致， 故 鉴 定 为15-hydroxypinusolidic acid。

化合物6：黄色油。由HR-ESI-MS m／z：333.2［M＋H］＋，分子式C20H28O4。1H-NMR（500 MHz，CDCl3）δ：7.12（1H，d，J ＝1.5 Hz，H-14），4.89（1H，br s H-17a），4.77（2H，d，J ＝2.0 Hz，H-15），4.59（1H，brs，H-17b），1.24（3H，s，H-18），0.60（3H，s，H-20）；13C-NMR（125 MHz，CDCl3）δ：39.2（C-1），19.9（C-2），38.0（C-3），44.3（C-4），56.3（C-5），26.1（C-6），38.7（C-7），147.5（C-8），55.8（C-9），40.6（C-10），21.9（C-11），24.7（C-12），134.9（C-13），144.1（C-14），70.3（C-15），174.5（C-16），106.9（C-17），29.1（C-18），183.9（C-19），12.9（C-20）。以上数据与文献［11］ 一致，故鉴定为8（17），13-ent-labdadien-15→16-lactone-19-oic acid。

化合物7； 黄色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.5［M-H］-，分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：13.16（2H，s，5，5″-OH），10.34（2H，s，4，4‴-OH），7.47（4H，d，J ＝8.5 Hz，H-2′，6′，2‴，6‴），6.78（2H，s，H-6，6″），6.73（4H，d，J ＝8.0 Hz，H-3′，5′，3‴，5‴），6.43（2H，s，H-3，3″）；13C-NMR（125 MHz，DMSO）δ：163.5（C-2，2″），102.6 （C-3 3″），182.1 （C-4，4″），161.1（C-5，5″），98.9（C-6，6″），162.7（C-7，7″），98.9（C-8，8″），154.8（C-9，9″），103.6（C-10，10″），121.3（C-1′，1‴），127.9（C-2′，6′，2‴，6‴），115.8（C-3′，5′，3‴，5‴），161.1（C-4，4‴）。以上数据与文献［12］ 一致，故鉴定为cupressuflavone。

化合物8： 黄色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.5［M-H］-，分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：13.10（1H，brs，5″-OH），12.93（1H，brs，5-OH），8.00（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-2′），7.96（1H，dd，J ＝2.0，8.5 Hz，H-6′），7.55（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2‴，6‴），7.11（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5′），6.78（1H，s，H-3），6.73（1H，s，H-3″），6.70（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-3‴，5‴），6.44（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-8），6.36（1H，s，H-6″），6.18（1H，d，J ＝2.0 Hz，H-6）；13C-NMR（125 MHz，DMSO） δ： 164.3 （C-2）， 102.8 （C-3），182.0（C-4），161.2（C-5），99.1（C-6），163.9（C-7），94.3（C-8），157.6（C-9），103.9（C-10），127.9（C-1′），116.3（C-2′），120.9（C-3′），160.3（C-4′），121.7（C-5′），131.6（C-6′），164.2（C-2″），102.7（C-3″），182.3（C-4″），160.8（C-5″），99.2（C-6″），161.6（C-7″），103.6（C-8″），154.8（C-9″），103.9（C-10″），120.7（C-1‴），128.4（C-2‴，6‴），116.0（C-3‴，5‴），161.2（C-4‴）。以上数据与文献［13］ 一致，故鉴定为amentoflavone。

化合物9： 黄色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：551.4［M-H］-，分子式C31H20O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO） δ：13.10（1H，s，5″-OH），12.96（1H，s，5-OH），10.30 （1H，s，4′-OH），8.05（1H，m，H-2′），8.02（1H，m，H-6′），7.56（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2‴，6‴），7.12（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5′），6.90（1H，s，H-2），6.78（1H，s，H-3″），6.74（1H，s，H-8），6.70（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3‴，5‴），6.37 （1H，s，H-6″），6.34（1H，d，J ＝1.0 Hz， H-6），3.81（3H，s，7-OCH3）；13CNMR（125 MHz，DMSO）δ：164.2（C-2），103.1（C-3），181.9（C-4），161.0（C-5），98.1（C-6），165.2（C-7），92.7（C-8），157.4（C-9），104.7（C-10），120.6（C-1′），131.5（C-2′），120.4（C-3′），160.2（C-4′），116.5（C-5′），127.9（C-6′），163.7（C-2″），102.6（C-3″），182.1（C-4″），160.6（C-5″），98.9（C-6″），162.2（C-7″），104.3（C-8″），154.6 （C-9″），103.5 （C-10″），121.5 （C-1‴），128.2（C-2‴，6‴），115.8（C-3‴，5‴），161.2（C-4‴），56.1（7-OCH3）。以上数据与文献［14］一致，故鉴定为sequoiavone。

化合物10： 黄色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.1 ［M-H］-， 分 子 式 C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：7.91（1H，dd，J ＝1.5，8.5 Hz，H-6‴），7.79（1H，br s，H-2‴），7.32（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2′，6′），6.97（1H，d，J ＝8.5 Hz，H-5‴），6.73（1H，s，H-3″），6.68（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3′，5′），6.47（1H，s，H-8），4.44（1H，s，H-8″），6.24（1H，s，H-6），6.17（1H，s，H-6″）；13C-NMR （125 MHz， DMSO） δ： 162.3 （C-2），115.5（C-3），180.8（C-4），161.7（C-5），98.9（C-6），164.4（C-7），93.7（C-8），157.3（C-9），103.3（C-10），123.0（C-1′），130.5（C-2′，6′），115.2（C-3′，5′），159.5 （C-4′），163.5（C-2″），103.0（C-3″），181.7（C-4″），161.5（C-5″），98.9（C-6″），164.2（C-7″），94.1（C-8″），157.3（C-9″），103.8（C-10″），121.3（C-1‴），131.0（C-2‴），120.9 （C-3‴），159.7 （C-4‴），116.3 （C-5‴），128.2（C-6‴）。以上数据与文献［15］ 一致，故鉴定为taiwaniaflavone。

化合物11： 黄色粉末。 由HR-ESI-MS m／z：537.1［M-H］-），分子式C30H18O10。1H-NMR（500 MHz，DMSO）δ：8.01（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-2′，6′），7.96（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-2‴，6‴），7.03（2H，d，J ＝9.0 Hz，H-3′，5′），6.94（2H，d，J ＝8.5 Hz，H-3‴，5‴），6.86（1H，s，H-3），6.85（1H，s，H-3″），6.72（1H，s，H-8″），6.49（1H，s，H-8），6.20（1H，s，H-6）；13C-NMR（125 MHz，DMSO）δ：163.2（C-2），103.8（C-3），181.8（C-4），161.5（C-5），99.0（C-6），164.3（C-7），94.1（C-8），157.4（C-9），104.0（C-10），124.2（C-1′），128.4（C-2′，6′），115.4（C-3′，5′），160.7（C-4′），164.1（C-2″），102.6（C-3″），182.1（C-4″），153.1（C-5″），124.7（C-6″），153.8（C-7″），94.7（C-8″），157.4（C-9″），104.0（C-10″），121.2（C-1‴），128.6（C-2‴，6‴），116.0（C-3‴，5‴），161.3（C-4‴）。以上数据与文献［16］ 一致，故鉴定为hinokiflavone。

4 讨论

本实验从岩生翠柏枝叶中分离并鉴定了6 个二萜、5 个双黄酮，而且含有量丰富，表明两者是该植物的主要特征性成分。现代药理学研究表明，pinusolidic acid［17］、isocupressic acid［7］、穗花杉双黄酮［18］、 柏双黄酮［19］、 扁柏双黄酮［20］等化合物在抗血小板活化、抗氧化、抗炎、抗肿瘤、抗辐射、神经保护等方面表现出较好的生物活性，因此，岩生翠柏具有较高的研究与利用价值。