claudin1和E-cadherin 蛋白在大肠癌组织中的表达及临床意义

贾志伟，邢贺楠，刘晓川，褚云香

1应急总医院消化科，北京 100029

2北京和睦家医院内镜室，北京 100016

研究表明，大肠癌的发病率可达（252～373）/10万[1]。大肠癌严重影响了患者的预后，降低了患者的生存率，对患者的生命健康造成严重威胁[2]。生物学因素能够影响肿瘤细胞的增殖及侵袭能力，导致肿瘤细胞转移或浸润风险增加。密封蛋白（claudin）能够影响细胞间的连接，提高肿瘤细胞的变形能力，并促进肿瘤细胞对基底膜组织的浸润，增加了肿瘤细胞的转移风险[3]。上皮钙黏素（E-cadherin）可通过影响上皮-间充质转化过程，减少细胞间质中的纤维组织成分，促进细胞间质中细胞骨架成分的降解，从而为肿瘤细胞的转移提供基础[4-5]。有研究探讨了E-cadherin蛋白在大肠癌组织中的表达情况，结果发现E-cadherin蛋白高表达是促进大肠癌患者临床预后恶化的重要因素，且E-cadherin蛋白表达与大肠癌患者的临床分期密切相关[6]。但有关claudin 1蛋白表达与大肠癌患者临床特征关系的研究较少。本研究收集80例大肠癌患者的大肠癌组织标本和癌旁组织标本，比较大肠癌组织和癌旁组织中claudin 1和E-cadherin蛋白的表达情况，并分析大肠癌组织中claudin 1和E-cadherin蛋白表达与大肠癌患者临床特征的关系，旨在为大肠癌的临床诊疗提供理论依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月至2017年1月应急总医院收治的80例大肠癌患者。纳入标准：①经病理学检查确诊为大肠癌；②年龄＜70岁；③均为原发性大肠癌，未接受放化疗、免疫治疗。排除标准：①临床资料不完整；②合并其他部位恶性肿瘤；③中低位直肠癌。80例患者中，男44例，女36例；年龄39～67岁，平均（51.5±12.8）岁；TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期30例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例；分化程度：高分化30例，中分化31例，低分化19例；有淋巴结转移28例，无淋巴结转移52例。收集患者的大肠癌组织标本80例及癌旁组织（距离远端大肠癌组织5 cm以上的肠组织）标本80例。

1.2 免疫组织化学染色方法

石蜡切片脱蜡至水，灭活内源性过氧化物酶（3%H2O2，室温避光 10 min），10 mmol/L pH 6.0 枸橼酸钠缓冲液洗涤3次，每次3 min，磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封闭液，37℃孵育15 min。用滤纸吸去血清，不洗，直接滴加一抗，37℃孵育2 h，滴加生物素化的二抗，37℃孵育40 min，PBS冲洗5 min，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，苏木素复染，加拿大树胶（或中性树胶）封片。

1.3 免疫组织化学染色结果判定标准

claudin 1蛋白阳性表达定位于细胞质和细胞膜，E-cadherin蛋白阳性表达定位于细胞膜、细胞质及细胞核。根据染色强度评分：无色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，褐色、黑色为3分。根据阳性细胞比例评分：阳性细胞比例≤10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。染色强度评分和阳性细胞比例评分相乘，＜3分为阴性，≥3分为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 16.0软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差（±s）表示；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 claudin1和E-cadherin蛋白阳性表达率的比较

大肠癌组织中claudin 1蛋白的阳性表达率为65.0%（52/80），明显高于癌旁组织的27.5%（22/80），差异有统计学意义（χ2=22.627，P＜0.01）；大肠癌组织中E-cadherin蛋白的阳性表达率为42.5%（34/80），明显低于癌旁组织的75.0%（60/80），差异有统计学意义（χ2=17.434，P＜0.01）。（图1）

图1 claudin1和E-cadherin 蛋白在大肠癌组织和癌旁组织中的表达情况（免疫组织化学染色，×400）

2.2 不同临床特征大肠癌患者大肠癌组织中claudin1蛋白的表达情况

TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中claudin 1蛋白的阳性表达率均高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同肿瘤直径的大肠癌患者大肠癌组织中claudin 1蛋白的表达情况比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。（表1）

2.3 不同临床特征大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin 蛋白的表达情况

有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin蛋白的阳性表达率均明显低于无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者，差异均有统计学意义（P＜0.01）。不同TNM分期、分化程度、肿瘤直径的大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin蛋白的表达情况比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。（表2）

表1 不同临床特征大肠癌患者大肠癌组织中claudin 1蛋白表达情况的比较（n=80）

表2 不同临床特征大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin蛋白表达情况的比较（n=80）

3 讨论

饮食习惯因素尤其是长期的高蛋白饮食及家族性肠道上皮恶性病变病史，均能够增加大肠癌的发生率[7]。手术治疗或术后联合放化疗虽然能够改善大肠癌患者的生存预后，提高5年生存率，但其对患者的远期生存情况仍然无明显的改善[8-9]。目前，靶向治疗已成为临床上辅助治疗恶性肿瘤的重要手段，对于相关生物学因子的表达情况进行分析，能够为大肠癌的免疫靶向治疗或生物学治疗提供理论基础。

claudin 1蛋白是重要的细胞间连接蛋白，能够提高肿瘤细胞对邻近正常上皮组织的浸润能力和对基底膜组织的黏附能力，为肿瘤细胞的扩散和转移提供基础。研究表明，claudin 1蛋白能够影响肿瘤细胞的增殖特性，提高肿瘤细胞DNA持续性扩增的风险[10]。E-cadherin蛋白能够维持上皮细胞的极性和形态，抑制上皮细胞突破基底膜，E-cadherin蛋白表达水平降低可导致肿瘤细胞间质成分的分解增加，增强肿瘤细胞的转移能力，还能够促进肿瘤细胞的浸润过程[11-12]。有研究探讨了E-cadherin蛋白在生殖系统、消化系统恶性肿瘤发生过程中的作用，认为E-cadherin蛋白表达水平降低是肿瘤细胞生物学特征的重要影响因素[13]。

本研究结果显示，claudin 1和E-cadherin蛋白在大肠癌组织中均存在明显的异常表达，其中claudin 1蛋白在大肠癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，而E-cadherin蛋白在大肠癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织，差异均有统计学意义（P＜0.01）。提示claudin 1和E-cadherin蛋白均可影响大肠癌的发生发展过程。笔者认为主要原因如下[14]：①claudin 1蛋白能够提高大肠癌细胞中黏附分子的表达水平，提高大肠癌细胞对血管内皮或淋巴结的黏附能力，促进大肠癌细胞的转移；②E-cadherin蛋白表达下降可导致大肠癌细胞上皮排列极性的改变，破坏大肠癌细胞基底膜的完整性，提高大肠癌的浸润性。赵鹏等[15]研究也发现，E-cadherin蛋白阳性表达可影响大肠癌患者的病情进展速度。本研究结果显示，TNM分期为Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中claudin 1蛋白的阳性表达率均高于TNM分期为Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。这主要是由于claudin 1蛋白能够促进大肠癌细胞对邻近正常上皮组织的浸润，导致大肠癌细胞分化成熟障碍，并影响大肠癌细胞淋巴结黏附分子的表达。本研究结果还显示，有淋巴结转移、侵及浆膜的大肠癌患者大肠癌组织中E-cadherin蛋白的阳性表达率均明显低于无淋巴结转移、未侵及浆膜的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。这主要是由于E-cadherin蛋白能够影响细胞基底膜的完整性。

综上所述，E-cadherin蛋白在大肠癌组织中低表达，claudin 1蛋白在大肠癌组织中高表达，并且与大肠癌的发生发展关系密切。