复方桔梗止咳片含量测定的研究

(三门峡市食品药品检验检测中心，河南 三门峡 472000)

复方桔梗止咳片的处方为桔梗146 g、远志(蜜炙)38 g、款冬花(蜜炙)22.5 g、甘草14 g，功能主治为镇咳、祛痰药。现行质量标准仅对其性状和检查项做了要求，未对处方中的君药桔梗的含量进行质量控制。本文采用高效液相色谱法-蒸发光散射检测器对桔梗中有效成分桔梗皂苷D进行了检测，为复方桔梗止咳片的质量控制提供了有效可行的方法。

1 材料与方法

1.1仪器与试药 Waters2695高效液相色谱仪；C9860A型变频超声仪(上海科贝尔光电技术有限公司)；CPA225D电子分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司)；乙腈(色谱纯，默克)、甲醇(分析纯，洛阳市化学试剂厂)、水为超纯水，桔梗皂苷D对照品(中国药品生物制品检定所提供)，复方桔梗止咳片(三门峡广宇生物制药有限公司，批号：180501、180502、180503)。

1.2方法

1.2.1设置色谱分析条件 取Agilent Extend-C18柱应用，柱长250 mm，内径4.6 mm，直径5μm；实验用流动相：为磷乙腈-水(26:74)；将流速调整至0.9 ml/min，漂移管温度75 ℃，柱温30 ℃，进样量10μL。理论塔板数依据桔梗皂苷D对照品峰予以记，需在3000及以上。

1.2.2检测溶液的制备 (1)对照品溶液的制备。取桔梗皂苷D对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.5 mg/ml的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备。取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理(功率250 W，频率40 kHz)30 min，放冷，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液25 ml，回收溶剂至干，残渣加水20 ml溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取3次，每次20 ml，合并正丁醇提取液，用氨试液50 ml洗涤，弃去氨液，正丁醇液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(3)阴性样品溶液制备。取远志(蜜炙)7.6 g 、款冬花(蜜炙)4.5 g、甘草2.8 g。远志粉碎，款冬花、甘草分别制浸膏，加入苯甲酸钠1 g、淀粉8.4 g、蔗糖4.0 g、明胶1.0 g、硬脂酸镁0.5 g、蜂蜜1.0g，混匀，烘干，粉碎。取样、制备与供试品相同。

2 结果

2.1线性关系分析 精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10μl，分别注入液相色谱仪，测定。以进样量对数(X)为横坐标，峰面积对数(Y)为纵坐标，进行线性回归分析。回归方程为：Y=1.3807X+5.5658(R2=0.9996)(n=5)，线性范围为：0.501～10.012μg

2.2重现性分析 取供试品溶液6份，分别进样测定，结果含量平均值为0.5928 mg/g，RSD为0.88%。

2.3稳定性分析 取供试品溶液，分别在0、1、2、4、8、12 h进样测定，结果RSD为1.02%。

2.4阴性样品实验 取阴性样品溶液进样测定，桔梗皂苷D保留时间处未出现吸收峰，阴性样品未对实验构成干扰。

2.5加样回收率试验 取本品20片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入低浓度、中浓度、高浓度的对照品溶液，照供试品溶液制备方法制样，依法测定，结果平均回收率为99.04%，RSD为0.61%(n=5)。见表1。

表1 加样回收率实验

2.6样品含量测定 各取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，对桔梗皂苷D含量计算，取批号为180501、180502、180503的样品，依法检测，结果见表2。

表2 样品含量测定结果(mg/g)

3 讨论

3.1检测方法的选择 桔梗为复方桔梗止咳片的主药，由于桔梗皂苷D无紫外吸收，故本文采用蒸发光散射检测器对桔梗的含量进行了质量控制[1]。

3.2液相的色谱条件及提取条件的选择 漂移管温度的选择：分别选择漂移管温度为50℃、75℃、85℃进样测定，结果发现漂移管温度为75℃色谱峰的峰形最好。提取条件的选择： 比较了100%、50%甲醇及50%乙醇3种溶剂，结果表明50%甲醇的提取效果最好；比较了加热回流和超声提取，结果两种提取方法的含量测定结果差别不大，所以选择比较简便的超声提取方法。分离条件：分别比较了固相萃取柱和正丁醇液-液萃取的方法[2]，结果固相萃取的方法有成分有一定的损失，所以采用正丁醇液-液萃取的方法。