甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒的质量评价

浙江大学医学院 （浙江 杭州 310000）

内容提要： 目的：对2种国产甲型、乙型流感病毒核酸联合检测试剂盒进行质量评估。方法：应用甲/乙型流感病毒核酸检测试剂国家参考品和临床样本，按照各自试剂盒说明书方法进行检测。结果：2种试剂盒特异性、最低检出限及精密度均符合国家参考品要求。2种试剂盒临床样本检测一致性好。结论：2种甲型、乙型流感病毒核酸联合检测试剂盒性能可靠，具有临床应用价值。

流感病毒属正黏病毒科，含甲型、乙型和丙型3个属。甲型流感病毒在多种动物中传播，导致其变异性强，易引起大规模甚至世界范围内的流行。乙型流感病毒在自然情况下只感染人，一般散发或小流行。丙型流感病毒常感染儿童，多呈散发。流感病毒引起的流行性感冒一般属自限性疾病，但在高危人群中会引起严重后果，新型流感病毒也会引起大规模流行或较高致死率[1,2]。因此，对流感病毒快速、准确的诊断至关重要。由于具有高灵敏度、快速等优点，PCR技术被广泛应用于病原体的诊断，目前市场上，已有基于实时荧光PCR方法来检测流感病毒核酸的试剂盒。中国食品药品检定研究院也于2015年发布了甲/乙型流感病毒核酸检测试剂国家参考品，用于该类产品申报注册证的注册检验[3]。本研究通过检测国家参考品和临床样本，比较了2种甲型、乙型流感病毒核酸联合检测试剂盒（荧光PCR法）的性能，评估了该2种试剂盒的临床应用价值。

1.材料与方法

1.1 一般材料

甲/乙型流感病毒核酸检测试剂国家参考品：由中国食品药品检定研究院制备的甲/乙型流感病毒核酸检测试剂国家参考品。618例咽拭子样本，来自浙江大学医学院附属第一医院（2018.4～2019.4）。

试剂：甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法），来自A和B两个厂家。

1.2 方法

检测方法参照国家参考品说明书，采用试剂盒说明书中推荐的相应核酸提取试剂盒提取核酸，按照各自程序及适用机型（ABI7500）进行PCR扩增分析和阴阳性的判断。临床样本检测参照试剂盒说明书进行。

1.3 统计学分析

采用Kappa检验分析2种试剂盒临床样本检测效果。

2.结果

2.1 国家参考品的检测结果

应用2种试剂盒对6份阳性参考品、6份阴性参考品、2份精密度参考和5份最低检测限参考品进行检测。结果显示，两种试剂盒的阳性符合率和阴性符合率均为100%。A试剂盒和B试剂盒对乙型流感病毒精密度参考品Ct值的变异系数分别为0.51%和0.77%，对甲型流感病毒精密度参考品检测结果的变异系数分别为0.62%和1.43%。2种试剂盒的检出限均符合国家参考品的要求，具体为：S1，2.1×103TCID50/L；S2，2.0×103TCID50/L；S3，2.5×10 TCID50/L；S4，2.1×103TCID50/L和S5，9.8×10 TCID50/L。

2.2 临床样本检测结果

采用2种试剂盒分别对618例咽拭子样本进行检测，结果见表1和表2。从结果可以看出，两种试剂盒的阳性符合率、阴性符合率和总体符合率均在95%以上，Kappa值＞0.95，表明2种试剂盒一致性强。

表1.2种试剂盒对甲型流感病毒核酸检测结果

3.讨论

本研究通过检测甲/乙型流感病毒核酸检测试剂国家参考品和临床样本，评估2种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）的检测效果。结果显示，2种试剂盒在特异性、精密度和最低检出限等方面均能符合国家参考品的要求。在临床样本检测方面，共发现甲型流感病毒有9例不一致样本，乙型流感病毒有3例不一致样本，分析不一致样本Ct值发现，其Ct值均邻近试剂盒的cutoff值，表明样本中核酸浓度较低，推测由于取样随机性导致检测结果不一致。

流感病毒易引起流行，危害公共健康，快速准确的诊断对该病毒的控制至关重要。病毒培养方法对操作要求高且费时，不利于在流行期做出快速诊断。基于抗原的诊断方法快速，但容易出现漏检，Maciej等[4]比较试纸条和PCR对甲乙型流感病毒的检测效果发现，PCR方法的灵敏度和特异度均优于试纸条法。近年来，PCR技术已被广泛应用于病原体的诊断，针对流感病毒的PCR检测体系的研究较多，同时也有取得第三类体外诊断试剂注册证的商业化试剂盒，但多为检测甲型流感病毒的试剂盒[5,6]。李健等[7]研究显示，目前国内外甲型流感病毒核酸检测试剂盒的效果无明显差异，说明国内针对PCR检测流感病毒核酸的试剂盒研制水平与国际持平。Zimmerman等[8]比较单重PCR和多重PCR在检测甲乙型流感病毒方面的效果，发现两种方法无明显差异。而多重PCR较单重PCR而言，只需要进行一次PCR反应，节约了操作时间和试剂成本，在一定程度上减轻了患者的负担。高通量测序和数字PCR技术也被用于流感病毒的检测，但这两种技术的成本限制了其在临床上的应用[9,10]。

本文研究结果表明，2家甲型和乙型流感病毒核酸联合检测试剂盒无明显差异，一致性好，均可用于临床流行性感冒患者或疑似患者的辅助诊断。