HPLC法测定不同时期鲜枣中环磷酸腺苷含量变化的研究

2020-07-22 07:39苗潋涓侯艳霞宿炳林郝瑞芳卢桂宾
山西林业科技 2020年1期
关键词:鲜枣腺苷磷酸

苗潋涓,侯艳霞,宿炳林,郝瑞芳,常 宁,卢桂宾

(山西林业职业技术学院园艺系,山西 太原 030009)

环磷酸腺苷(cAMP)是在人体内广泛存在的一种具有生理活性的重要物质,是生命传递的“第二信使”,参与调节细胞的生理活动和新陈代谢。据报道,在目前所有测得的动植物样品中,cAMP含量在枣中是最高的。cAMP检测大多采用蛋白免疫结合法、高效液相色谱法、紫外分光光度法、薄层色谱法等。本试验以鲜枣为研究对象,通过纤维素酶水解浸提,提取鲜枣样品中的活性成分cAMP,采用高效液相色谱法,测定不同品种鲜枣中cAMP的含量,同时检测不同成熟期鲜枣样品中cAMP含量的变化,为后期开发枣功能产品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 材料

鲜枣(包括木枣、壶瓶枣、板枣3种),采自山西省农科院果树所国家枣种质资源圃。

1.1.2 试剂与仪器

试剂与仪器见第2页表1.

表1 试剂与仪器

1.2 方法

1.2.1 标准溶液配制

精确称取环磷酸腺苷标准品0.100 0 g,用纯水溶解并定容至100 mL,得到1.0 mg/mL的标准贮备液,保存于4 ℃,可稳定1个月。分别吸取cAMP贮备液0.1 mL,0.2 mL,0.5 mL,1.0 mL,1.5 mL,2.0 mL加到100 mL容量瓶内,配制成1.0 μg/mL,2.0 μg/mL,5.0 μg/mL,10 μg/mL,15 μg/mL,20 μg/mL浓度系列标准液,过0.45 μm有机系滤膜,备用待测。

1.2.2 样品预处理

将3种鲜枣切条干燥,粉碎机磨成粉末并过筛,枣粉备用。准确称取1.000 0 g枣粉,热水溶解后65 ℃温水浴1 h,取出后冷却到室温,柠檬酸调节pH为5.0.加入纤维素酶(1∶100)在45 ℃水浴45 min,然后超声20 min,取出后用50 mL离心管定容。4 ℃离心10 min,转速4 000 r/min,样液过0.45 μm有机系滤膜,装入进样瓶,备用待测。

2 结果与分析

2.1 标准曲线的制作

分别把装有1.0 μg/mL,2.0 μg/mL,5.0 μg/mL,10 μg/mL,15 μg/mL,20 μg/mL浓度系列标准液的样品瓶放入自动进样器,设置进样量为10 μL.峰面积为横坐标(X),浓度为纵坐标(Y),作标准曲线,结果见图1.

图1 环磷酸腺苷标准曲线

由图1可以看出,环磷酸腺苷在10.0 μg/mL~50.0 μg/mL浓度范围内,浓度和检测峰面积呈良好线性关系,线性方程为y=0.000 317 88x+0.254 771 30,相关系数为0.999 148 04.

2.2 分离度

研究发现,在本试验色谱条件下分析环磷酸腺苷保留时间是5.86 min,和cAMP标准品色谱图对比,确定测定样品含环磷酸腺苷。

环磷酸腺苷标准品、样品HPLC谱图见图2,图3.

图2 环磷酸腺苷标准品HPLC谱图

图3 环磷酸腺苷样品HPLC谱图

2.3 不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量

不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量见第15页图4.

由图4可以看出,不同品种不同生长时期鲜枣中cAMP含量差异较大。其中,木枣各时期cAMP含量均高于板枣和壶瓶枣。木枣在白熟期含量最高,可达到580.9 μg/g;板枣和壶瓶枣中cAMP含量相对较低,分别为135.83 μg/g和129.92 μg/g.

图4 不同品种不同生长时期环磷酸腺苷含量

3 结论

1) 从3个品种鲜枣中cAMP含量分析结果来看,不同品种不同生长期cAMP含量不同。其中,木枣含量最高,达到580.9 μg/g,尤其是白熟期含量较其它生长期更高。随着枣果的成熟,其cAMP含量呈下降趋势。

2) 木枣白熟期cAMP含量最高,是板枣和壶瓶枣含量的4倍左右;木枣白熟期cAMP含量是半红期的4倍左右,是全红期的9倍左右。

3) 本研究为不同地域枣果cAMP含量研究提供了理论依据,下一步可对不同地域环境不同时期枣果中cAMP含量进行深度研究。

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