新型冠状病毒肺炎患者血清SARS-CoV-2抗体的检测分析

朱旭阳，叶寒青，陈文亥，赵 行，翁吉仁，张艳敏（温州医科大学附属乐清医院检验科，浙江乐清 325600）

新型冠状病毒（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2，SARS-CoV-2）属于套式病毒目、冠状病毒科、β 冠状病毒属[1-2]。引起的新型冠状病毒肺炎（corona virus disease 2019，COVID-19 ）是一种急性呼吸道传染病[3]，轻、中症患者早期临床表现缺乏特异性，以上呼吸道症状（发热、干咳、乏力）为主[4]，重型、危重型患者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征等[5]。该病传染性强，治疗难度大，对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁[6]。为加强对该病的早诊早治，控制疫情，《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第七版）》明确将抗体检测结果纳入确诊病例的诊断标准，以及疑似病例的排除标准[5]。由于COVID-19 是一种全新的传染病，SARS-CoV-2 抗体的动力学特点尚未明确，难以对抗体的检测结果做出正确解读，为此本研究收集了发病第1～55 天的28 例COVID-19 患者的33 份血清，拟对SARS-CoV-2 IgM，IgG 抗体的变化规律做初步分析，为临床标本采样时机的选择、诊断及疗效评估提供更多依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2020年1月21日到2月9日温州医科大学附属乐清医院收治的28 例SARSCoV-2 核酸检测阳性的确诊COVID-19 患者为病例组，其中男性15 例，女性13 例，年龄21～82 岁。排除COVID-19 的30 例其他疾病患者为对照组，其中男性12 例，女性18 例，年龄27～84 岁。患者相关资料均从电子病历获得。所有研究对象均空腹采集静脉血5ml，置于含分离胶的红头真空采血管内，静置待血液凝固后，3000×g 离心5min，取血清-20℃保存，统一于检测前室温融解。把病例组28 例确诊患者的33 份血清分成四小组：发病第1～6 天采集的13 份血清为病例组1，发病第7～10天采集的5 份血清为病例组2，发病第18～55 天采集的13 份血清为病例组3，2 例患者没有临床症状，因为有流行病学史，自行到医院排查，CT 结果显示肺部感染，咽拭子核酸阳性，他们的血清作为病例组4。

1.2 仪器与试剂 iFlash 3000-B 化学发光测定仪（深圳亚辉龙生物科技股份有限公司），SARSCoV-2 IgM，IgG 抗体检测试剂盒（深圳亚辉龙生物科技股份有限公司）。

1.3 方法 采用SARS-CoV-2 抗原（重组蛋白）包被的磁微粒，全自动化学发光免疫分析技术，按试剂说明书进行检测。阳性判断标准参考试剂说明书，样本浓度＜ 10.00 AU/ml 时，视为阴性；样本浓度≥10.00 AU/ml 时，视为阳性。病例组2 的SARSCoV-2 IgM 浓度处于临界状态，病例组3 的两例SARS-CoV-2 IgM 浓度处于临界状态，这7 份血清进行两次检测（重复性良好），取均值分析。

2 结果

2.1 SARS-CoV-2 IgM，IgG 抗体诊断特异度 对照组30 例患者中，SARS-CoV-2 IgM，IgG 抗体诊断特异度分别为100.0%（30/30）和96.7%（29/30）。其中IgG 抗体1 例假阳性系脑梗死、高血压患者，结果为14.99AU/ml，属弱阳性反应。

2.2 COVID-19 患者不同病程IgM，IgG 抗体诊断敏感度 见表1。SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体诊断敏感度，病例组1 分别为0.0%（0/13）和0.0%（0/13），病例组2 分别为40.0%（2/5）和80.0%（4/5），病例组3 分别为92.3%（12/13）和100.0%（13/13），病例组4 分别为50.0%（1/2）和100.0%（2/2）。

表1 33 份COVID-19 患者血清在不同病程SARS-CoV-2 抗体的诊断敏感度[n（%）]

2.3 SARS-CoV-2 抗体出现和消失的时间 SARSCoV-2 IgM，病例组1 均阴性；病例组2 的2 例患者分别在第7 天和第8 天出现25.21 AU/ml 和18.62 AU/ml 阳性，1 例患者第10 天仍阴性；病例组3 的2 例患者分别在第49 天和第55 天出现9.80 AU/ml（阴性）和10.79 AU/ml（弱阳性）。SARS-CoV-2 IgG，病例组1 均阴性，病例组2 的1 例患者第8天阴性，其余患者均阳性，病例组3 和病例组4 均阳性。

2.4 3 例COVID-19 患 者 的SARS-CoV-2 IgM,IgG动态变化 见表2。病例组3 的3 例患者的IgM,IgG 结果提示SARS-CoV-2 IgM 浓度在一个月左右达峰值，随后逐渐下降。

表2 3 例COVID-19 患者SARS-CoV-2 IgM，IgG 的动态变化

3 讨论

SARS-CoV-2 核酸阳性是COVID-19 确诊病例的诊断标准。但是实际应用中核酸检测难以保证结果的及时和准确[7-8]，主要受病程、采样、保存、RNA 提取、试剂盒质量、结果判读等因素的影响[9]。为进一步做好COVID-19 诊断和医疗救治工作，国家卫生健康委员会把抗体检测作为COVID-19 诊治的补充检测手段。SARS-CoV-2 抗体检测是一种新的检测方法，需要验证试剂的可靠性和明确SARSCoV-2 抗体产生的时间规律，使SARS-CoV-2 抗体检测结果更科学和准确地应用于临床。

研究表明，SARS-CoV-2 IgM,IgG 抗体检测具有较高的诊断特异度和诊断敏感度，能够满足临床诊断的要求。根据研究中SARS-CoV-2 抗体出现和消失的时间，提示多数患者SARS-CoV-2 IgM 在发病第7 天出现阳性，一个月左右达峰值，随后逐渐下降，持续50 天左右。其中一例患者发病第10 天阴性。故建议发病10 天内SARS-CoV-2 IgM 阴性的患者不能排除SARS-CoV-2 感染，需要动态监测。鉴于SARS-CoV-2 是一种新的毒株[10-11]，传染性强，目前没有疫苗和特效药，人体内没有针对SARS-CoV-2的特异性抗体，而且随着病程的延长，大部分患者的病毒载量逐渐下降，当降低到核酸检测的最低检测限，就难以检出，而抗体的诊断敏感度随着病程的延长逐渐增加，所以抗体检测是核酸检测重要的补充实验，尤其对发病超过一周或多次核酸检测阴性的疑似患者。本组研究样本量偏少，未能收集到每个病例组内更多的样本，因此对SARS-CoV-2 抗体变化规律仅做初步分析，结论有一定的局限性。

本研究发现SARS-CoV-2 IgG 血清转阳时间早于IgM 的患者比例更高，与一般传染病的IgG 类抗体出现较晚不一致。分析其原因可能与以下因素有关：①SARS-CoV-2 抗体动力学变化的特殊性所导致，需要大样本的临床数据和可靠试剂来验证；②大量研究提示，不同种冠状病毒N蛋白或S蛋白存在免疫交叉反应[12-16]。SARS-CoV-2 抗体检测可受其他种类冠状病毒的影响，可能具有一定的假阳性率，还需在临床检测中进一步证实。尤其是上感流行季节，大量的hCoV-229E，hCoV-OC43，hCoVNL63 和hCoV-HU1 病毒感染引起的上感患者可影响SARS-CoV-2 抗体的检测结果；③应急开发的试剂缺乏样本多样性验证和临床验证，检测结果的准确性还需大样本临床数据的验证。

研究中我们还发现一例重症患者转上级医院治疗后，咽拭子SARS-CoV-2 核酸2 次阴性，大便SARS-CoV-2 核酸5 次阴性，影像学检查明显改善，体温正常超过3 天，予以出院。出院后随访期间，咽拭子SARS-CoV-2 核酸复查阳性，有别于文献[17]研究中20 例重症患者中没有出现复阳现象。值得注意的是该患者核酸复阳期间，SARS-CoV-2 IgM阳性，SARS-CoV-2 IgG 110.91 AU/ml，阳性。意味着COVID-19 患者IgG 处于高值时，不能排除传染性。复阳患者是否具有传染性还需确定脱落的是否是活病毒，产生的IgG 抗体是否具有保护性还需病毒中和试验进一步验证。该例患者再次入院后，病情稳定，与文献[17]研究大部分复阳患者在再次入院后没有出现明显的恶化一致[17]。

综上所述，本研究建议发病10 天内SARSCoV-2 IgM 阴性的患者需要动态多次监测，不排除SARS-CoV-2 感染；SARS-CoV-2 IgM,IgG 联合检测适用于发病超过一周或多次核酸检测阴性的疑似患者，可以减少潜在传染源的漏检。