2015～2019年湖北省临床实验室抗甲型肝炎病毒抗体IgM能力验证（EQA）结果回顾分析

俞 斌(湖北省临床检验中心，武汉 430064)

甲肝病毒（HAV）是甲型肝炎的传染源，于1973年由Feinstone 等应用免疫电镜方法在急性肝炎患者的粪便中发现。根据疾病预防控制局数据显示，2019年1 ～7月中国甲型肝炎发病人数为12 734 例，死亡人数为3 例,中国甲肝疫情呈现上升态势[1]。甲型肝炎的实验室诊断主要依赖血清中特异性抗体的检测，抗原检测、病毒分离及分子诊断技术常作为常规诊断方法。通常用酶联免疫吸附试验（ELISA）和化学发光技术对抗甲型肝炎病毒抗体IgM（HAV-IgM）进行检测，HAV-IgM 在急性感染时出现较早，上升快，高峰效价高，持续时间短，是急性HAV 感染或复发的可靠指标，并且有助于区分现症感染和既往感染[2]。为了解湖北省二级以上临床实验室HAV-IgM 检测能力，进一步加强HAV-IgM 检测实验室质量管理，提高HAV-IgM 检测水平，对全省2015 ～2019年二级以上临床实验室开展HAV-IgM 项目血清学能力验证活动进行回顾总结，现将结果分析如下：

1.材料和方法

1.1 参控实验室2015 ～2019年分别有260，266，265，274 和263 家二级以上临床实验室单位参加HAV-IgM 项目能力验证活动，参加实验室类型包括综合医院、中医院、妇幼保健院、民营医院、专科医院及仪器试剂生产公司（不在此次统计范围），每年度合格率及不同类型实验室检测统计情况见表1，表2。

1.2 参控样本 HAV-IgM 的能力验证物品购自康彻斯坦公司，批号201511～201515， 201611～201615，201711～201715，201811～201815，201911 ～201915，规格为1.0ml/支，储存于-15℃，冷链运输分发，分发前均由通过了CNAS 认可的均稳检测分包方实验室进行了均稳检测，达到质量要求。

1.3 评价方法 每个参评单位每年发放1 套5 个批号高中低不同浓度能力验证物品，附有能力验证活动指导书和结果回报表各1 份。在建议的测定日期，用本实验室采用平时提供检测服务时使用的检测系统做HAV-IgM 血清学试验，能力验证物品检测须与常规标本的处理方法一致。检测完成后，在规定时间内将检测结果、检测方法和所用试剂名称等信息填写在回报表中，通过网络上报至湖北省临床检验中心汇总分析，中心统计完毕后将评价结果反馈至各参评单位。

1.4 评价标准采用美国PT 评分法进行评价 ①针对某项目：本次某项目测定得分= (某项目测定结果可接受样本数／某项目样本总数)×100%；②针对本计划：本次计划测定得分= (所有项目测定结果可接受样本总数／所有项目样本总数)×100%。PT ≥80%为合格，PT ＜80%为不合格。

2 结果

2.1 2015 ～2019年检测合格率 见表1。合格率均在95%以上。

表1 2015～2019年HAV-IgM 检测EQA 合格率统计表

2.2 不同类型实验室HAV-IgM 项目检测结果 见表2。中医院检测平均合格率相对较低，为93.5%（其中二级中医院占84.6%）。

表2 2015～2019年不同类型实验室HAV-IgM 检测合格率统计表

2.3 不同浓度HAV-IgM 项目能力验证物品检测合格率 近5年，中心采用不同浓度的HAV-IgM 能力验证物品评价实验室的检测能力，从低到高分别为4，15，20，50，80，150 NCU/ml，对应的平均检测合格率分别为94.7%，96.3%，97.3%，97.8%，97.7%和97.4%。可以看出，中高值浓度能力验证物品测定结果的准确度高，而低浓度能力验证物品则较易出现测定误差。

2.4 方法学比较 实验室采用不同检测方法的合格率结果，见表3。选用不同的方法，其结果存在差异。HAV-IgM 的实验室检测方法有ELISA,放射免疫法（RIA）、化学发光法（CLIA）、化学发光微粒子免疫法（CMIA）、微粒子酶免疫分析法（MEIA）、斑点金免疫结合试验（DIGFA）、间接免疫荧光技术等。表3 对采用使用单位数≥3 家的ELISA,免疫渗滤层析试验、CLIA,磁微粒化学发光法四种方法进行了统计比较，可以看到，采用免疫渗滤层析法检测的合格率较低，近5年的平均合格率为74.6%。

表3 2015 ～2019年不同方法检测HAV-IgM 合格率统计表（n ≥3）

3 讨论

通过以上对近五年来全省二级以上临床实验室开展HAV-IgM 项目血清学EQA 进行回顾总结发现不同类型实验室、不同检测方法的检测结果存在差异。我们建议：一是基层中医院应充分利用能力验证评价结果，从能力验证评价报告中得出有关自身能力的结论，当得到不合格的能力验证评价成绩时，应对相关人员进行适当的培训，对导致能力验证评价失败的原因进行分析并采取纠正或预防措施；实验室应监控结果趋势，这些结果可能为问题正在形成信号[3]；二是要选择适当的检测方法。采用ELISA 法简单方便、经济实惠，不需要特殊设备，适用于大批量人群抗原抗体筛查，但在测定中影响因素很多，样本处理时稀释倍数较高会影响检测结果的准确性。免疫渗滤试验优点是操作快捷，结果直观可靠，但只能做定性检测，且容易造成弱阳性标本的漏读和误读，性价比和准确度方面都逊于ELISA 法。实验室在采用该方法时，须注意其检测程序的质量控制，除了检测装置的内对照外，每检测日或分析批，应使用弱阳性和阴性质控物进行质控。阴、阳性质控品的检测结果分别为阴性和阳性即表明在控，相反则为失控【4】。化学发光法被誉为目前免疫检测的金标准【5-6】。磁微粒化学发光法是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法，该技术充分利用了磁性分离的快速易自动化、化学发光技术的高灵敏度以及免疫分析的特异性。实验室可根据自身情况加以选择使用。三是要不断加强自身实验室建设，制定规范的操作规程，树立全程质量控制观念，要把质量控制理念贯穿到检测的分析前、分析中、分析后的整个过程。

能力验证是利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力。实验室应充分利用这个工具，将不合格的成绩从方法问题、设备问题、技术问题、材料问题等方面查找失控原因【7】，及时改进分析能力和实验方法；能力验证提供者也应该不断从评估方面进行改进，共同提高实验室的检测水平和综合能力，更好地为临床服务。