伊红染液在小组织标本组织处理预染色中的改良应用

杨 屹，周林艳

随着人们健康意识不断增强和医疗需求的不断增长，尤其是不宜手术的肿瘤晚期患者明确诊断与靶向治疗的需求，内窥镜和穿刺等微创技术得到广泛应用，使得小标本如胃肠镜、鼻咽镜、细针穿刺活检标本不断增多。因此小标本的收集、取材、包埋、切片等制片环节对诊断与进一步基因检测至关重要。未经预染色的小组织标本，由于在制片过程中未经染色预处理，色彩不明显，与包埋的石蜡难以区分，给病理技术员的工作带来不便，影响了工作效率的提高，甚至因为组织块太多太小而导致遗漏的可能。因此良好的预染色可以提高技术员的工作效率和制片质量。作者在日常工作中不断实践摸索，在原预染方法上进行改良，发现在脱水最后一缸95%乙醇中添加伊红的方法对比其他预染色方法有更好的效果，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集常州市金坛区病理中心活检小标本：穿刺活检等小标本共160例。全自动组织脱水机徕卡Asp300s；组织包埋仪：派斯杰BM450A型；10%中性福尔马林；二甲苯；75%乙醇；95%乙醇；无水乙醇；醇溶性伊红。

1.2 方法收集的穿刺标本均固定5 h以上。160例标本随机分成4组，每组40例。实验组：在最后一缸95%乙醇中添加4%伊红，三组对照组：(1)对照组1在脱水机第1缸10%中性福尔马林中添加4%伊红；(2)对照组2取材时滴染(时间1 min)；(3)空白对照组未采取任何预染手段(表1)。脱水程序均按常规标本脱水、透明、浸蜡程序相同处理。制片包括包埋、切片均按技术操作规范完成[1]。并由同一名经验丰富的技术员完成四组标本的所有制片过程。

表1 四组组织处理方式

1.3 结果判定经过脱水、透明、浸蜡处理后，组织呈现深红色判定为()，组织呈现淡粉红色判定为(+)，组织无着色判定为(-)(图1)。

图1 预染色结果：A.组织呈深红色()；B.组织呈淡粉红色(+)；C.组织无着色(-)

1.4 统计学分析所有数据应用SPSS 21.0软件进行统计学分析，四种方法的各项指标是否具有统计学差异采用多个样本比较的秩和检验、χ2检验及单因素方差分析。

2 结果

2.1 组织眼观效果差异通过脱水、透明、浸蜡处理后的小标本，结果显示使用三种不同预染方法的标本均不同程度着色，且实验组的染色效果明显好于其他两种预染方法(P<0.01，表2)。

表2 四种方法的效果肉眼观对比

2.2 镜下染色效果4组标本在同一位技术员、同批次制片并HE染色后在镜下观察，结果显示4种方法的染色效果差异均无显著性(图2)。

ABCD

2.3 甲级片比例的差异实验组、对照组1、对照组2、空白对照组的甲级片比例分别为97.5%、97.5%、92.5%、92.5%，结果显示四组差异无显著性(P=0.434)。

2.4 工作效率的比较分析四组实验在工作效率中的差异，结果显示四者包埋、切片所用时间差异具有显著性(表3)。经过预染色处理的三组标本在制片效率上明显高于空白对照组标本(P<0.01)；且在最后一缸95%乙醇中添加伊红的标本(实验组)在制片中工作效率高于使用其他两种预染方法的标本(P<0.01)。

表3 4种方法工作效率的比较

3 讨论

内窥镜及穿刺小组织标本体积小，标本来源珍贵，且在制片过程如包埋、切片中不明显，难以辨认。技术员稍有不慎就可能将组织包埋在不同的平面，甚至会丢失组织，并且在切片过程中增加了技术员操作上的难度，也增大了诊断医师漏诊的几率。

目前国内病理科常采用的小标本预染色方法有：(1)取材时使用伊红滴染组织[2-5]；(2)在脱水机中使用伊红-福尔马林固定液预染小标本[6]。作者经过多次实践摸索，采用在脱水机中的最后一缸95%乙醇中添加伊红的方式对小标本进行预染色，与上述两种方法在预染色效果、工作效率与最终制片质量方面进行了对比，结果显示在最后一缸95%乙醇中添加伊红的预染效果好于其他两种预染方法，且明显提高了制片工作的效率。四组标本制成的HE切片镜下观察均显示结构清晰，层次分明，甲级片比例差异无显著性。因此作者认为在最后一缸95%乙醇中添加伊红的方法可行且能显著提高工作效率。

关于在最后一缸脱水95%乙醇中添加伊红较其他两种预染色方法效果更好的原因，可能是组织在经乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡浸蜡后，伊红被洗脱，造成预染色效果不佳。此外，作者没有在脱水程序中最后两缸无水乙醇里添加伊红，而选择在它们前一缸的95%乙醇中添加伊红，是考虑到伊红溶液中含有部分的水会影响组织的脱水效果，且经过多次实验，发现在95%乙醇中添加200 mL伊红使浓度达到4%即可获得良好的预染色效果，伊红浓度过低其预染色效果不佳，浓度过高预染色效果提升不明显且浪费试剂。

综上所述，小标本的预染色是十分必要的，且在95%乙醇中添加适量伊红可以使小标本在制片过程中显示鲜艳的颜色，有利于技术员进行包埋与切片，提高了制片效率，减少不必要的差错。该方法简便快捷，节约试剂，效果稳定且良好，值得推广应用。