大豆异黄酮对大鼠的体液免疫调节作用

郭 静，周 凯，蔡冬青

（1.青海省心脑血管病专科医院门诊办公室，青海 西宁 810000；2.宁波立华制药有限公司镇海分公司，浙江 宁波 315174）

大豆中含有天然的活性物质—大豆异黄酮，其含量约为0.2%～0.4%，是大豆生成过程中的次级代谢产物，在自然界以游离型和糖苷型两种形式存在，具有类雌激素样作用。大豆异黄酮能治疗和预防妇女更年期综合征，对于改善更年期妇女出现的潮热、盗汗、失眠、抑郁等有显著效果[1-2]。此外，大豆异黄酮还具有较高的营养价值和药用价值，在免疫、抑制肿瘤等方面有重要作用[3]。本文研究大豆异黄酮在体液免疫调节方面的作用，为其进一步开发应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SD雌性大鼠80只，160～180 g，由南京中医药大学实验中心提供。实验前饲养一周。

1.2 仪器

全自动生化分析仪，离心机，电子天平，酶标仪，细胞培养箱等。

1.3 受试物

大豆异黄酮软胶囊（0.25 g/粒，推荐量每日2粒，大豆异黄酮含量22 mg/粒）。

1.4 给药方式

根据人体推荐量，按5倍、10倍和30倍设计，将实验大鼠随机分为两个实验组，每个实验组分为对照组、低剂量组（25 mg/kg）、中剂量组（50 mg/kg）、高剂量组（100 mg/kg），以玉米油为溶剂配制相应浓度的受试物药液，对照组灌胃玉米油，灌胃体积均为10 ml/kg。连续灌胃15 d。

1.5 实验方法

1.5.1 血清溶血素测定（血凝法）

实验结束后，大鼠摘眼球取血，置于离心管内，放置1 h，剥离，离心10 min，将生理盐水稀释血清，倍比稀释，每份稀释12孔。将不同浓度的血清置于血凝板中，100 μL/孔，再加入0.5% SRBC（绵羊红细胞）悬液100 μL，混匀，37℃湿盒内放置3 h。记录每孔凝结程度，计算抗体积数。

1.5.2 抗体生成细胞检测（Jerne改良玻片法）

实验结果后处死大鼠，取脾脏，搅碎过200目筛，Hank’s液洗3次，用RPMI1640完全培养成5×106个/mL细胞悬液备用。在含有0.5 mL表层培养基的小试管中加入50 μL10%SRBC和20 μL已经配好的脾细胞悬液。混匀后，挂膜玻片上，凝固后培养1.5 h，在玻片架凹槽内加入SA缓冲液稀释的补体，继续培养1.5 h后，计算溶血抗体生成细胞数。

1.6 统计学处理

各实验组与对照组之间均数比较使用方差分析，方差不齐采用秩和检验，P＜0.05有统计学意义。

2 结 果

2.1 大豆异黄酮对大鼠体重的影响

给予大豆异黄酮15 d后，各组之间体重无明显差异（P＞0.05），说明大豆异黄酮对大鼠体重无明显影响。结果见表1。

表1 各组大鼠体重变化（±s）

表1 各组大鼠体重变化（±s）

组别（n=10） 实验前（g） 实验后（g）对照组 169.23±12.54 268.32±20.21低剂量组 171.25±11.06 269.31±19.68中剂量组 169.81±10.33 271.48±22.16高剂量组 170.72±11.43 272.15±18.57

2.2 大豆异黄酮对大鼠血清溶血素及抗体生成细胞的影响

给予大豆异黄酮15 d后，中剂量组和高剂量组抗体积数明显高于对照组，有显著性差异（P＜0.05）；三个剂量组的抗体生成数明显高于对照组，有显著性差异（P＜0.05），说明大豆异黄酮对大鼠体液免疫调节有提高作用。结果见表2。

表2 大鼠血清溶血素测定和抗体生成细胞实验结果（±s）

表2 大鼠血清溶血素测定和抗体生成细胞实验结果（±s）

注：与对照组相比，*P＜0.05

组别（n=10） 抗体积数 抗体生成细胞数/106（脾细胞）对照组 189.36±22.82 267.31±25.65低剂量组 211.43±21.04 319.76±21.98*中剂量组 229.21±18.89* 326.76±30.57*高剂量组 235.56±21.78* 338.49±22.31*

3 讨 论

外来抗原刺激B细胞活化，B细胞在辅助性T细胞（Th细胞）的辅助下进一步活化和分化产生抗体，是免疫系统参与体液免疫应答的关键环节[4]。小鼠经绵羊红细胞免（SRBC）疫后，可刺激T细胞的活化增殖，产生SRBC特异性的细胞免疫应答。活化后的T细胞在细胞因子作用下，分化为效应细胞，产生协同刺激信号，继而激活B细胞进一步分化，从而产生抗体。经SRBC免疫后的小鼠可以产生溶血素，即抗SRBC抗体，这种抗体与补体一起作用可引起小鼠溶血反应，释放血红蛋白，故小鼠血液离心、稀释测定上清液可间接判断出血清中抗体含量[5]。

本文研究结果显示，中剂量组和高剂量组抗体积数明显高于对照组，三个剂量组的抗体生成数明显高于对照组，均有显著性差异（P＜0.05），说明大豆异黄酮可通过刺激B细胞分化增殖来提高抗体水平，从而增强大鼠体液免疫功能。