小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗免疫效果

文│冯艳风 韩先桂（江苏省盱眙县动物疫病预防控制中心）

刘丽（江苏省盱眙县动物卫生监督所）

陈刚（江苏省盱眙县天泉湖镇畜牧兽医服务站）

小反刍兽疫（Peste des Petits Ruminants，PPR）是由小反刍兽疫病毒（PPRV）引起的疫病，主要发生在绵羊、山羊等小反刍动物上，该疾病的发生常伴随有肺炎、高烧、口炎等症状，具有毒性和传染性，又被称为小反刍兽瘟疫。根据数据显示，该病在雨季和干燥寒冷季节发病率高，死亡率高达100%，世界动物卫生组织（OIE）将其列为A类动物疫病，我国亦将其列为一类动物疫病。小反刍兽疫疫苗免疫效果的好坏直接关系到羊场小反刍兽疫感染率，也关系到羊场乃至我国养羊业的经济效益。

羊痘病是养羊业中较为常见的疾病，该病流行范围广，每年各地区时有发生，以春、秋两季流行最为多见。羊痘病毒是导致羊群出现羊痘病的病因，羊痘病毒会导致绵羊感染出现绵羊痘，山羊感染出现山羊痘，是一种感染性很强的急性传染病，可通过接触进行病毒的传播。羊群感染该疾病时，皮肤、黏膜处会出现大量的丘疹、结痂、水疱，严重威胁羊群的生长发育。

本试验随机选取羊场进行了免疫试验，为其探究小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）的安全性和免疫效果提供参考。

一、材料

1.试验羊。试验羊（湖羊）60只，35日龄，临床健康，由江苏宝利畜禽业发展有限公司提供，未接种过小反刍兽疫和山羊痘疫苗，免疫当天采集血清样品进行母源抗体检测，抗体阳性率均为0。

2.疫苗。小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9＋AV41株）为国药集团扬州威克生物工程有限公司生产，批号为：C0919014；小反刍兽疫活疫苗（clone9株）为天康生物股份有限公司生产，批号为：2019010-1；山羊痘活疫苗为哈药集团生物疫苗有限公司生产，批号为：2019008。试验所用的疫苗均在有效期内。

3.检测试剂。小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒（批号：020171904）、羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒（批号：20190905119）均由中国农业科学院兰州兽医研究所研制。

二、方法

1.试验分组。将60只试验羊随机分成3组：一免组20只，进行小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）免疫，免疫剂量1头份/只；二免组20只，进行小反刍兽疫活疫苗（Clone9株）免疫，免疫剂量1头份/只；三免组20只，进行山羊痘活疫苗免疫，免疫剂量1头份/只。

2.免疫副反应观察。疫苗免疫后对试验羊群健康状况进行巡查，同时记录精神状况、免疫反应等。

3.采样方案。分别于免疫（0天）和免疫后28天进行采样，各试验组每次随机采集血清样品15份。

4.检测方法。小反刍兽疫免疫抗体检测采用小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测试剂盒，山羊痘免疫抗体检测采用羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒，所有试剂盒的使用均严格按照说明书进行操作。

5.检测结果判定。

（1）小反刍兽疫阻断ELISA抗体检测结果判定：实验正常情况下，阴性对照平均吸光值≥1.0，阳性对照平均吸光值≤阴性对照平均吸光值×50%；PI（阻断率）=（1-样本值/阴性对照平均吸光值）×100%，PI≥50%为阳性，PI＜50%为阴性。

（2）羊痘间接ELISA抗体检测结果判定：阴性血清孔平均光吸收值（本实验的光吸收值是在450纳米波长时的光吸收值，以下用“OD值”表示），OD值＜0.2，阳性血清孔平均OD值＞0.6时检测结果成立；被检血清OD值≥0.25时抗体为阳性；被检血清OD值≤0.2时，抗体为阴性；0.25＞OD值＞0.20，判定阳性可疑，重复检测一次，若OD值≥0.23判定为阳性，OD值≤0.23则判为阴性。

（3）判定疫苗合格标准：接种疫苗后，应免羊群平均免疫抗体阳性率≥70%判定为合格。

三、结果

1.免疫副反应观察。各试验组羊在疫苗免疫注射后，均未出现精神状况不佳，食欲下降等免疫副反应现象。

2.小反刍兽疫免疫抗体检测结果。3个试验组免疫当天小反刍兽疫抗体水平为0；免疫后28天羊小反刍兽疫抗体水平一免组、二免组都较高，一免组免疫抗体阳性率100%；二免组免疫抗体阳性率100%；三免组抗体阳性率为0。具体结果见表1。

3.羊痘免疫抗体检测结果。3个试验组免疫当天羊痘抗体水平为0；免疫后28天羊痘抗体水平一免组、三免组都较高，一免组免疫抗体阳性率93.33%；三免组免疫抗体阳性率100%；二免组抗体阳性率为0。具体结果见表2。

表1 免疫前后小反刍兽疫抗体检测结果

表2 免疫前后羊痘抗体检测结果

四、讨论与结论

三组试验在实验期间乃至实验结束到报告日，试验羊只未出现食欲下降、精神不佳、过敏和死亡等异常情况，小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）和小反刍兽疫活疫苗（clone9）与山羊痘活疫苗都表现出较好的是安全性。

小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）免疫后28天小反刍兽疫抗体阳性率100%，小反刍兽疫活疫苗（Clone9株）免疫后28天小反刍兽疫抗体阳性率100%，两个试验组数值基本一致，免疫效果良好；小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）免疫后28天羊痘抗体阳性率93%，山羊痘活疫苗免疫后28天抗体阳性率100%，两种疫苗免疫效果良好，山羊痘活疫苗免疫比小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）免疫抗体阳性率稍高。

本试验通过对小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9＋AV41株）与小反刍兽疫活疫苗（Clone9株）和山羊痘活疫苗三种疫苗免疫28天免疫效果分析表明小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9＋AV41株）免疫效果良好，小反刍兽疫、羊痘免疫抗体合格率均超过国家规定的70%以上标准。

小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9+AV41株）是由中国兽医药品监察所、国药集团扬州威克生物工程有限公司和天康生物股份有限公司等单位联合研制，于2018年4月取得新兽药注册证书。该产品可同时预防羊的“小反刍兽疫”和“羊痘”两种疫病，做到了一针防两病，极大地降低了养羊场户人力、财力，同时也减轻了基层动物防疫人员劳动量。目前，该疫苗已在内蒙古、山西、河南、青海等全国多个省区使用，本试验证明了小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗（clone9＋AV41株）有较好的安全性和较强的免疫效果，在实际使用中具有安全、有效、经济等方面的优势。