补肾活血祛风方对阿霉素肾病大鼠尿蛋白、血脂、凝血影响的研究

余海龙，詹华奎，张嬿，毕榕

（1.西南医科大学中西医结合学院 附属中医医院，四川 泸州 646000；2.成都中医药大学附属医院，四川 成都 610072）

0 引言

糖皮质激素作为原发性肾小球疾病的重要药物，但应用中却存在激素抵抗或不敏感现象，同时也存在副作用，如增加脂代谢紊乱,血液高凝状态等。本研究以临床效验方“补肾活血祛风方”对阿霉素大鼠进行干预，探讨本方对肾小球疾病治疗的综合作用，探索本方增强激素效果、减轻副作用的机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物

SPF 级雄性SD 大鼠（Sprague Dawley）170 只，重（200±20）g，由成都达硕生物公司提供（合格证号：NO51203500001792）。

1.2 药物及制备

补肾活血祛风方所含中药饮片有熟地黄、山茱萸、生黄芪、丹参、炒僵蚕、蝉蜕、地龙、全蝎，够自四川省中药材饮片公司，制成每毫升含1.35g 生药的药液。盐酸多柔比星（海正辉瑞制药有限公司，批号：16002011）。醋酸泼尼松片（浙江仙琚制药有限公司，批号：33021207）。

1.3 造模

大鼠适应性饲喂后，代谢笼收集每只大鼠24h 尿液，测定24 小时尿蛋白量，小于10mg 的标记后选用。造模：盐酸多柔比星（阿霉素）分两次尾静脉注射，按重量初次用量为4mg/kg，第8 天再次注射，用量3.5mg/kg，空白组使用生理盐水同法注射，末次注射后的第3 周末收集24 小时尿液，测定24 小时尿蛋白，大于100mg 为合格，同时随机选取4 只大鼠采血测定血白蛋白和血脂，出现低白蛋白，高血脂提示造模成功。

1.4 分组及干预

设空白组，待造模成功后，随机数字法增分模型组、泼尼松组、中药组、中药+泼尼松组，每组23 只（根据预实验结果，每组预备3 只），确保分组无差异。空白组正常喂养，模型组蒸馏水，泼尼松组醋酸泼尼松片溶液，中药组补肾活血祛风汤剂，中药+泼尼松组上午给予泼尼松，下午给予中药。汤剂用量根据大鼠体重按13.47g/kg/d 给药，泼尼松根据体重按6mg/kg/d 给药。各干预组每天灌胃给药1 次。

1.5 检测指标及方法

（1）一般情况：记录体重、习性活动、饮水摄食、二便等。

（2）尿蛋白：第4 周末每组随机选定10 只大鼠，代谢笼收集24 小时尿液，德国西门子公司生化分析仪（ADVIA2400）及试剂检测24 小时蛋白尿。8 周末重复测定。

（3）血液指标：8 周末，每组随机抽取10 只大鼠，水合氯醛400mg/kg 用量腹腔注射麻醉，腹主动脉采血，用上海特康科技公司全自动生化分析仪（TC6010L）及试剂，测定血白蛋白（ALb）、胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）；凝血分析仪及配套试剂测定大鼠凝血酶原时间 (PT), 凝血酶时间 (TT), 部分凝血活酶时间 (APTT)。同时摘取肾脏，HE 染色观察病理改变。

1.6 数据统计

采用SPSS 21.0 对所得数据进行分析，计量资料用表示。满足参数检验条件的组间比较选用T 检验，多组间用OnewayANOVA 单因素方差分析；不符合条件者用非参检验，组间比较用Mann-Whitney，两两比较选Nemenyi。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

空白组大鼠体重增长快，皮毛色泽、精神活动、摄食排便等无特殊。模型组皮毛逐渐枯槁，活动萎靡，尾部不同程度水肿或溃烂，摄食减少，体重增速减慢，部分门齿断裂、松脱。各治疗组上述症状相对轻，泼尼松组出现兴奋，狂躁，部分可见腹部或肢体水肿。除空白组，其余各组均有大鼠死亡，模型组死亡2 只，泼尼松组死亡3 只，中药组死亡2 只，中药加泼尼松组死亡3 只。

2.2 尿蛋白情况

造模后各组24 小时尿蛋白均高于空白组（P＜0.05），造模各组之间差异无统计学意义（P＞0.05），提示造模成功，分组具有可比性。在第4 周末时各干预组及模型组之间差异无统计学意义（P＞0.05），在8 周末中药+泼尼松组、激素组尿蛋白均低于模型组（P＜0.05），中药+ 泼尼松组低于泼尼松组和中药组，激素组低于中药组，但三组间差异无统计学义（P＞0.05）。对不同时间和不同用药组做交互分析，呈现出统计学差异（F=4.228,P=0.001）。

表1 24h 尿蛋白定量比较（mg/24h， ±s）

表1 24h 尿蛋白定量比较（mg/24h， ±s）

注：＊为与空白组相比，P＜0.05；△：与模型组相比，P＜0.05

组别 数量 造模后 4 周末 8 周末空白组 10 6.26±1.65 17.75±3.04 17.35±4.13模型组 10 187.99±45.84＊ 271.28±136.63＊ 502.52±217.51＊泼尼松组 10 211.12±61.60＊ 233.69±90.15＊ 296.44±114.17＊△中药组 10 201.71±60.33＊ 294.82±100.76＊ 359.71±128.58＊中药+泼尼松组 10 210.15±86.54＊ 250.89±134.41＊ 281.12±130.10＊△

2.3 血脂指标

空白组白蛋白高于其他组，与模型组、激素组、中药+激组相比，P＜0.05，与中药组相比，P＞0.05。甘油三酯：中药组低于各干预组，且与激素和激素+中药组比具有统计学意义（P＜0.05）。胆固醇：中药组低于各干预组，且与中药加激素组相比具有统计学意（P＜0.05）。

2.4 凝血指标

空白组白PT 长于其他组，P＜0.05，其余四组间比较无统计学差异。中药+ 泼尼松组APTT 明显长于其余各组，P＜0.05，其余各组间差异无统计学意义。空白组TT 长于其余各组（P＜0.05），泼尼松组TT 明显低于模型组，P＜0.05，其余各组比较无统计学意义。

表2 8 周末TG、TC 比较( ±s)

表2 8 周末TG、TC 比较( ±s)

注：＊为与空白组相比，P＜0.05；▽表示与中药组相比，P＜0.05。

组别 例数 TG（mmol/L） TC（mmol/L）空白组 10 0.29±0.14 1.01±0.29模型组 10 8.18±8.92＊ 5.62±3.68＊泼尼松组 10 13.9±10.04＊▽ 5.84±3.38＊中药组 10 4.40±3.58＊ 5.34±2.79＊中药+泼尼松组 10 13.29±7.50＊▽ 8.30±3.99▽＊

表3 8 周末各组大鼠凝血指标比较( ±s)

表3 8 周末各组大鼠凝血指标比较( ±s)

注：＊为与空白组相比，P＜0.05；▽为与模型组相比，P＜0.05；△为与中药+ 泼尼松组比，P＜0.05

组别 例数 PT（s） APTT（s） TT（s）空白组 10 11.64±0.63 19.52±1.46△ 29.85±4.64模型组 10 9.78±0.75＊ 19.34±1.44△ 28.27±2.54＊泼尼松组 10 10.26±1.06＊ 20.40±1.61△ 25.50±4.01＊▽中药组 10 10.04±1.28＊ 19.28±0.88△ 27.21±7.92＊中药+泼尼松组 10 9.93±0.38＊ 21.80±1.38 26.96±13.04＊

3 讨论

补肾活血祛风方根据著名中西医结合肾脏病专家叶传蕙教授经验化裁而成，叶老在治疗蛋白尿时强调祛风通络，提出“风邪不去，蛋白不消”的观念。风为百病之长，可兼寒夹热，浅则袭皮毛腠理，深则入脏腑经络，与风、湿、热、瘀胶滞[1]。此时祛风能起到涤荡诸邪之效，但草木之品恐难触及深处之邪，故选用僵蚕、全蝎、蜈蚣、蝉蜕等能搜剔入络的虫类药搜风通络，剔动深固于内的邪气。再者，脾肾久损，易夹肝风内动，而上述药物则又可平息内风，涤痰通络。必要时酌情联合使用糖皮质激素可减少尿蛋白，同时能减轻激素副作用，改善代谢[2-3]。黄淑芬教授在治疗慢性肾脏疾病蛋白尿时，也重视肾络瘀阻、玄府闭塞的病机，并且认为瘀久可生风，创造性的提出了“治血先治风”的理论，运用虫类药开通玄府，祛风通络、活血舒络，对慢性肾脏病尿蛋白有较好缓解[4-5]。

蛋白尿是多类肾小球疾病，尤其是肾病综合征的典型表现，而这一过程又会反过来加重肾脏病变，比如触发炎症因子过度表达和脂代谢紊乱，或对系膜细胞和肾小管产生毒性。本实验中，模型组尿蛋白增加明显，4 周末时各干预组尿蛋白低于模型组，而泼尼松组最低，起效快，但无统计学意义，到8周末时泼尼松组、中药加泼尼松明显低于模型组，且差异有统计学意义，说明在一定治疗周期基础上泼尼松、和中药加泼尼松能对尿蛋白有改善作用，遗憾的是其余各干预组之间比较并未显示出统计学差异，但交互分析显示不同时间和尿蛋白具有交互作用，说明随着观察时间进一步延长，可能差体现更明显。也推测可能与24 小时尿蛋白受尿量影响过大有关系，有研究[6-8]表明尿蛋白/肌酐比值与尿蛋白定量有较好相关性，能反映肾脏病变，对于本模型后续研究有一定借鉴意义。另一方面，肾脏的病理改变是影响肾脏功能的关键因素，虽然中药加泼尼松组尿蛋白在统计学上未呈现差异，但中药加泼尼松组病理改变是相对轻的，这可能是本方的另一优势所在。

高脂血症与系膜细胞增生，炎症因子释放，高凝状态及血栓形成及肾小管间质纤维化，肾小球硬化发展有关[9-10]。本实验除空白组，均出现了明显血脂紊乱，泼尼松组、中药加泼尼松组TG 明显高于中药组，说明激素的应用可能会加重TG紊乱，单用中药不引起阿霉素大鼠TG 升高，这与某些关于僵蚕、蝉蜕、地龙等虫类药物对血脂作用的研究相吻合[11-13]。但本方中二者合用与单用激素相比并未显示出统计学优势，可能是受到激素对脂代谢的过强干扰，同时也不排除与实验后期各组动物因门齿断裂等因素造成进食差异有关，特别是中药加激素组动物进食情况好于激素组。

肾病综合征常常伴有高凝状态，这增加血栓形成及栓塞发生的风险，特别是在大量尿蛋白的情况下更突出，对患者预后有影响，所以改善高凝和防治血栓是肾病综合征患者治疗的重要内容。实验中模型组凝血时间和空白组相比均有缩短的现象，符合疾病特点。各组PT 时间比较无统计学意义，中药加泼尼松组APTT 高于其余各组，激素组TT 低于模型组，说明中药不引起TT 缩短，中药和泼尼松合用可以延长APTT，在一定程度上有利于改善高凝状态。

所以本方在应用时可能不仅仅体现于改善蛋白尿，而是包括了改善脂代谢、高凝状态在内的多项综合效果，而这些又是肾纤维化基础的影响因素[14]，所以这可能对于改善长期预后具有一定意义。当然本实验也存在一些局限性，如观察周期相对短，尿量影响大，中药剂量未分高低组等，尚可在指标优化、胞内药物浓度、改善血脂紊乱等方面深入实验和临床研究，进一步阐明本方的作用。