山丹丹试管苗室内移栽的研究

何亚蓉，毛 超，姜文磊，齐向英

(延安大学 生命科学学院，陕西 延安 716000)

山丹丹学名山丹(Liliumpumilum.DC)，为百合科，百合属多年生草本植物[1]。在延安地区分布的山丹丹一般株高30～40 cm。花于春末夏初开放，花下垂，花瓣向外反卷，色鲜红，通常无斑点，具有极高的观赏价值[2]。

通过组织培养快繁技术得到的山丹丹组培苗往往不能直接移栽到大田，室外炼苗或者大棚炼苗受季节影响比较大，本研究旨在通过对山丹丹组培苗炼苗过程中基质的不同配比的研究，培育出移栽成活率高、籽球大、籽球叶片数多的山丹丹组培苗，为山丹丹组培苗室外移栽打下坚实的基础。

1 材料与方法

1.1 试验材料

实验所用材料为延安大学生命科学学院组培与育种研究室培养的陕北野生山丹丹试管苗。经过按齐向英等[3]筛选1/2MS+IBA 0.5 mg/L培养基培养35 d后准备移栽。

1.1.1 基质材料

草炭：草炭即泥炭，是沼泽发育过程中的产物。草炭土形成于第四纪，是沼泽植物的残体，在多水的无氧条件下，无法完全分解堆积而成。含有大量水分和未被彻底分解的植物残体、腐殖质以及一部分矿物质。

蛭石：作为一种植物生长剂和土壤调节剂，具有很强的保水性能。用于温室大棚内，具有疏松土壤、透气性好、吸水力强和温度变化小等特点，有利于作物的生长，还可减少肥料的投入[4]。

珍珠岩：土壤改造，调节土壤板结，防止农作物倒伏，控制肥效和肥度，以及作为杀虫剂和除草剂的稀释剂和载体。

1.1.2 试验仪器

立式压力蒸汽灭菌器(LDZX-75KBS，上海申安医疗器械厂)。净化工作台(SW-CJ-1F，苏净集团苏州安泰空气技术有限公司)。电热恒温鼓风干燥箱(DHG-9053A，上海齐欣科学仪器有限公司)。生化培养箱(LRH-150，上海齐欣科学仪器有限公司)。智能人工气候箱(PRX-150B，宁波海曙赛福实验仪器厂)。超声波清洗机(SB-5200DT，宁波新芝生物科技有限公司)。

1.2 基质配比

根据草炭、珍珠岩、蛭石体积比的不同试验共设计9个配方，见表1。

表1 不同基质配比

1.3 试验方法

1.3.1 培养条件

培养基以1/2MS为基础培养基，激素含量为IBA 0.5 mg/L并附加白砂糖20 g/L，琼脂5.5 g/L，pH均为6.5～6.8。所有培养基均是在1.1 kg/cm2，121℃饱和立式压力蒸汽灭菌器下灭菌30 min。

接种后先在暗环境中培养7 d，然后再转移到光照强度为1500～2000 Lx，光照时间为12 h/d，温度为(24±2)℃的培养室内培养。生根培养阶段均置于光照为12 h/d，光照强度1500～2000 Lx，培养温度控制在(24±2)℃，相对湿度60%～75%的条件下光照培养室培养。

1.3.2 生根移栽时间判断

在1.3.1的条件下连续培养，待到所有接种试管苗中有85%以上的单个籽球根的长度达到3 cm，生根数量达到3条以上时，准备开始移栽。

1.3.3 移栽

移栽前需在室温下打开瓶口，炼苗2～3 d，以使小苗逐渐适应外界环境[5]。将经过炼苗处理的山丹丹试管苗小心地从瓶中倒出，用清水洗净根部残留的培养基，以簇生小鳞茎为单位深度3 cm栽植于营养钵中[6，7]，栽种时将种球扶正，根部用基质压实，上覆基质，深度为掩埋至种球上部，栽后浇水，并喷洒70%百菌清可湿性粉剂800倍稀释+72%农用链霉素3000倍稀释混合液，防治猝倒病及立枯病[8]。

设计9种移栽基质配方(见表1)，每个配方处理移栽个数为32～55株，置于人工气候培养箱中培养，设置温度为23℃～25℃，箱内湿度为85%，每隔7 d每个营养钵中加蒸馏水10 mL，观察叶片生长情况，60 d后统计成活率，籽球的生长大小以及籽球叶片数。

2 结果与分析

2.1 组培苗的生长情况

2.1.1 组培苗成活率分析

从表2可知，采用处理组合6、7、8三组配方获得的组培苗成活率最高，都达到了100%的成活率，而组合1的成活率最低只有90.2%，通过后续试验中对各因素的分析来确定山丹丹移栽过程中炼苗的最佳基质配比。

表2 栽培数与成活数对比表

2.1.2 不同配方的籽球生长大小情况

对各配方中的籽球生长大小观察与测定，结果见表3。

表3 不同配方的籽球生长大小正交试验

通过直观分析可以看出RA=0.06，RB=0.04，RC=0.08，故因素的主次为RC>RA>RB即蛭石>草炭>珍珠岩，即蛭石的投加量的变化对山丹丹籽球的生长影响较大，其次是草炭，珍珠岩对山丹丹籽球生长影响最小。从9个处理组合的直观分析结果中得出：第6个组合和第7个组合的效果最好，籽球的平均大小都为0.36，但各因子的不同水平对山丹丹籽球生长情况的影响大小是A2>A3>A1，B3>B1>B2，C1>C3>C2，因此最佳组合是A2B3C1，即最佳配方的配比是草炭：珍珠岩：蛭石=2∶3∶1。

2.1.3 不同配方的籽球叶片生长状况

对各配方中的籽球叶片生长情况进行观察与统计，结果见表4。

表4 不同配方的籽球叶片生长个数正交试验

从表4直观分析可以看出RA=0.22，RB=0.16，RC=0.31，故因素的主次为RC>RA>RB即蛭石>草炭>珍珠岩，即蛭石的投加量的变化对山丹丹籽球的生长影响较大，其次是草炭，珍珠岩对山丹丹籽球叶片生长影响最小。从9个处理组合的直观分析结果中得出：第6个组合的效果最好，籽球的平均叶片个数为5.62，但各因子的不同水平对山丹丹籽球叶片的生长情况的影响大小是A2>A3>A1，B3>B2>B1，C1>C2>C3，因此最佳的组合是A2B3C1，即最佳配方的配比是草炭：珍珠岩：蛭石=2∶3∶1。

3 讨论与结论

移栽基质的选择是整个组培苗炼苗过程中非常重要的一步[9]。移栽基质的透气性、保湿性、酸碱度和营养等因子对诱发新根及成活起着非常关键的作用。山丹丹组培苗移栽试验结果表明，常规的珍珠岩、草炭和蛭石的配比，基质的各项指标在合适的范围，植物均可生长，在此次试验中，移栽基质采用了9种组合配方，而草炭：珍珠岩：蛭石=2∶3∶1为最佳，移栽成活率达到100%，组培苗的籽球大小最大可达0.36 cm，籽球叶片数多达5.62个。从籽球叶片数和籽球大小的正交表中可以看出，蛭石是影响山丹丹生长的主要因素，草炭次之，珍珠岩对山丹丹的影响最小。蛭石保水性强，透气性好；珍珠岩保水性差且无营养，易使试管苗缺水、缺营养而死亡，草炭营养丰富作为山丹丹移栽中的基质，具有发根快，缓苗时间短的特点，草炭+珍珠岩+蛭石的组合既保水又透气还有营养，最有利于山丹丹的生根，成活率可达100%。陈丽娜等[10]在研究杂交百合的移栽技术过程中使用的栽培基质也是草炭+蛭石+珍珠岩的混合基质培养效果明显好于单个基质的使用。辛培尧[11]对滇杨组培苗移栽基质筛选的研究以及符少萍等[12]对木薯试管苗移栽基质筛选的研究中都表明：疏松性、透气性好的基质有利于组培苗成活和生长，这与本研究的结论一致。

有研究表明[13]，根系长势较长的组培苗，刚从瓶中移出时长得较健壮，但会因此导致其对基质的适应能力降低，抗逆性变差，从而导致其根系损伤和腐烂。因此，应该选择在植株的根系不太长时进行移栽，这对其适应新的环境较有利，并且较好的生根培养基还可以缩短其生根时间。