酒精性肝硬化腹水患者机体免疫相关细胞因子表达与病情进展、SBP发生的相关性探究

蒋刚健，陈庆丰，武文豪，黄德峰

(1.漯河市中心医院 检验科，河南 漯河 462000；2.漯河市中心医院 消化内科，河南 漯河 462000)

肝硬化是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用形成的弥漫性肝损害。我国关于肝硬化的流行病学显示[1]，大多数肝硬化患者由前期肝部炎症致病。晚期的肝硬化患者常伴有上消化道出血、肝性脑病、继发感染、脾功能亢进、腹水、癌变等并发症[2-3]。晚期肝硬化肝细胞病理组织学上有广泛的肝细胞坏死、残存肝细胞结节性再生、结缔组织增生与纤维隔形成，其肝脏逐渐变形、质硬而逐渐形成肝硬化。本研究旨在通过测定肝硬化腹水患者的免疫相关细胞因子表达，寻求其表达水平与患者病情进展及SBP 发生是否存在相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析选取漯河市中心医院2019年8月至2020年4月就诊的60 名酒精性肝硬化患者临床资料，其 中 男34例， 女26例，年 龄36 ～71 岁， 平 均年龄(48.35±9.26) 岁。按照肝功能分级，Child-Pugh 评分分为A 组(5 ～6 分)，B 组(7 ～9 分)，C 组(10 ～15分)，每组20例，另选取20例健康人群作为对照组。本研究通过医院伦理委员会批准。

纳入标准：①经影像学、病理学活检确诊为肝硬化腹水患者；②临床资料统计完整者；③对该课题知情同意，自愿参加，依从性良好，并签署知情同意书者。

排除标准：①妊娠期、哺乳期妇女；②合并有除肝脏外其余重要脏器功能障碍或损害者；③全身反应严重者；④预计生存时间＜2 个月者；⑤入院时并发细菌或病毒性感染者。

1.2 方法

免疫相关细胞因子表达水平测定：禁食12 h 后于次日早8 点取静脉血4 mL 于流式试管中，使用流式细胞仪( 美国贝克曼库尔特公司DxFLEX 型) 检测其白细胞分化抗原3+(CD3+)、白细胞分化抗原4+(CD4+)、白细胞分化抗原8+(CD8+) 水平，计算辅助/ 抑制T 淋巴细胞(CD4+/CD8+) 比值。

Th1 型、Th2 型细胞因子的测定：采用流式微球阵列技术(CBA) 法测定患者血清内Th1 型细胞因子( 肿瘤坏死因子-α，TNF-α)、Th2 型细胞因子白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)、白介素-13(IL-13) 水平，试剂盒选用美国eBioscience 公司的CBA 试剂盒，严格按照说明书进行测定操作。

以腹水培养进行患者SBP 诊断。

1.3 观察指标

①四组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+表达水平的比较；②四组Th1 型、Th2 型细胞因子表达水平；③免疫相关细胞因子与病情进展的相关性；④免疫水平与SBP 发生相关性

1.4 统计学分析

所有统计学资料都采用SPSS 18.0 统计学软件进行数据分析，计量资料以±s表示，病情进展的多分组单因素比较采用Kruskal-Wallis H 秩和检验。组间及多组比较采用Fisher 精确检验，采用Logistic 回归分析相关性。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 四组免疫相关细胞因子表达水平比较

C 组CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+水平低于A 组、B 组及对照组；B 组CD3+、CD4+、CD8+水平低于A 组、对照组, 差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 四组免疫相关细胞因子比较(N=20，± s )

表1 四组免疫相关细胞因子比较(N=20，± s )

注：与对照组比较，①P ＜0.05；与 A 组比较，②P ＜0.05；与 B 组比较，③P ＜0.05。

CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+组别 对照组 72.84±5.68 44.21±4.87 30.24±3.16 1.38±0.41 A 组 71.27±5.56 43.13±4.92 29.86±3.28 1.35±0.39 B 组 65.25±6.03①② 36.36±5.09①② 26.13±3.04①② 1.24±0.34 C 组 49.33±5.74①②③23.47±5.14①②③21.52±2.97①②③1.09±0.26①②F 51.648 92.352 31.819 3.588 P ＜0.001 ＜0.001 ＜0.001 0.017

2.2 四组免疫平衡Th1/Th2 型细胞因子表达水平比较

C 组TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 指标水平明显低于A 组、B 组、对照组；B 组TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13指标水平明显低于A 组、对照组(P＜0.05)，A 组与对照组比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见表2。

表2 四组免疫平衡Th1/Th2表达水平比较(N=20，x± s ) 单位：pg·mL-1

2.3 免疫相关细胞因子与病情进展的多元Logistic 回归分析

以分组为因变量，免疫相关细胞因子CD3+、CD4+、CD8+水平及免疫平衡Th1/Th2 型细胞因子为自变量，进行多元Logistic 回归分析，结果显示CD3+、CD4+、CD8+是患者病情进展保护因素，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13是影响患者病情进展的独立危险因素。见表3。

表3 免疫相关细胞因子与病情进展的多元Logistic回归分析

2.4 免疫水平与SBP 发生的二元Logistic 回归分析

以分组为因变量，免疫相关细胞因子CD3+、CD4+、CD8+水平及免疫平衡Th1/Th2 型细胞因子为自变量，进行多元Logistic 回归分析，通过结果可知 CD3+、CD4+、CD8+为患者发生SBP 的保护因素，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 是影响患者发生SBP 的独立危险因素。见表4。

表4 免疫水平与SBP发生的二元Logistics回归分析

3 讨 论

由于肝硬化患者早期肝脏本有的代偿功能不会表现出明显症状，中晚期则以肝功能损害和门脉高压为主要表现[4]。腹水作为肝硬化的一种常见并发症，肝硬化本身病情与临床腹水有着直接联系，且腹水是肝硬化病程发展过程中的重要转折点，一旦腹水发生，患者病情便逐渐恶化[5-6]。

本结果认为，就单因素分析结果来看，免疫水平越弱的肝硬化腹水患者病情越严重，现象分析如下：Th1细胞介导细胞免疫所产生的细胞因子与患者肝脏部位的炎症表现出相关性，IL-4、IL-10、IL-13 三种细胞因子共同参与了人体炎性反应全过程，一方面，其可在患者机体局部激活炎症反应；另一方面，在人体血液循环系统内，IL-4、IL-10、IL-13 三种细胞因子的少量释放又可对抗炎反应进行调节，这是一种抗炎、促炎共同发生且处于平衡的状态，当其在血液内释放量上升时，稳态失衡，则会对人体形成损伤。

而免疫相关细胞因子与患者SBP 发生的相关性研究结果显示：免疫相关细胞因子与病情进展的多元Logistic回归分析结果CD3+、CD4+、CD8+水平以及TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 水平与患者病情程度表现出明显相关性(P＜0.05)；免疫相关细胞因子与SBP 发生的二元Logistic 回归分析结果CD3+、CD4+、CD8+水平及TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 水平与患者病情程度表现出明显相关性(P＜0.05)，该项结果提示免疫相关细胞因子表达水平与酒精性肝硬化腹水患者SBP 发生存在明显相关性，患者免疫力越低越容易形成有菌腹水。但值得注意的是，TNF-α、IL-4、IL-10、IL-13 是临床常用的炎症反应指标，在炎症评价中往往较健康人体呈升高现象，而如前文分析结果所述，酒精性肝硬化腹水患者4 项指标与其病情进程存在相关性，若水平较低时，并不可直接诊断为无炎症反应发生，须对肝硬化腹水致病原因进行准确诊断，结合腹水培养结果给出最终结论。

综上所述，酒精性肝硬化腹水患者机体免疫相关细胞因子表达水平与患者病情严重程度、SBP 发生存在明显相关性，免疫相关细胞因子表达水平越低，肝硬化程度越严重，更容易发生SBP，应针对其免疫力水平进行药物干预，避免感染发生。