三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗抗体检测实验探讨

梁琼文

(岑溪市农业农村局动物疫病预防控制中心，广西 岑溪 543200)

0 引言

根据《国家动物疫病强制免疫计划》的通知要求，明确将高致病性禽流感纳入强制免疫计划，并要求对高致病性禽流感免疫密度达到100%，免疫抗体合格率达到70%以上。

目前针对免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗，其免疫效力水准一直有待评价。现就实际检测情况，具体分析如下。

1 材料以及方法

1)实验用活体。23日龄没有特定病原的生产用鸡。

2)实验用疫苗。三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-12株，H7N9 H7-Re3株)，试2019008以及试20201118共2个批次。

3)检验用标准抗原。三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)H7亚型-Re3株标准抗原，批号为20201118。

4)实验方法。按照三黄鸡免疫重组禽流感病毒体H7亚型-Re3株三价灭活疫苗制造及检验试行规程中成品检验的血清学效力检验方法：两批防护性抗原制剂分别免疫10只没有特定病原的生产用鸡，每只胸部肌肉注射防护性抗原制剂0.3 mL；另设空白对照组的生产用鸡5只，不免疫防护性抗原制剂。免后14 d、21 d、28 d，分别采血分离血清，血清分别用三黄鸡免疫重组禽流感病毒H7亚型-Re3株标准抗原，按微量法禽流感血凝抑制(HI)实验计算测定HI起保护作用的抗体效价。实验分组设置详见表1。

表1 试验分组设置

2 结果以及讨论

1)各实验鸡免后14 d、21 d、28 d，分别测定H7亚型-Re3株的HI起保护作用的抗体效价，计算各组的HI起保护作用的抗体效价均值(GMT)。具体如表2所示。

表2 试验各组抗体效价 单位：log2

2)三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗血清学效力检验合格的判定标准：每批三价灭活疫苗按照剂量免疫，0.3 mL/只，免后21 d，免疫鸡血清的H7亚型-Re3株的HI起保护作用的抗体效价均值(GMT)均应不低于6(log2)；空白对照组的生产用鸡的HI起保护作用的抗体效价应不高于2(log2)。

从本次检验的结果看，空白对照组的生产用鸡的HI起保护作用的抗体效价在各个采血点均<2(log2)，检验的空白对照成立；实验组的生产用鸡的H7亚型-Re3株的HI起保护作用的抗体效价均值在免后14 d均大于7(log2)，在免后21 d均大于9(log2)。由此可知，防护性抗原制剂可诱导鸡体产生良好的免疫应答，免后14 d已产生较好的免疫力，免后21 d的HI起保护作用的抗体效价比合格标准高3个滴度以上，防护性抗原制剂的免疫效果良好。

3)免后28 d的H7亚型-Re3株的HI起保护作用的抗体效价均值均大于10(log2)，对比免后21 d，起保护作用的抗体水平呈继续升高的趋势，这与禽用油乳剂灭活三价灭活疫苗起保护作用的抗体上升规律一致。

3 结语

本次实验计算结果显示：三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗(H5N1 Re-12株，H7N9 H7-Re3株)的毒种免疫原性良好，按现有生产工艺制备的防护性抗原制剂，免疫力产生快，免疫起保护作用的抗体蛋白质水准高。当然，三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗实验制作工艺有一个持续改善以及优化的阶段，相信随着其实验制作工艺的进一步优化，防护性抗原制剂的质量水准可进一步增强。

根据有关单位的研究结果，我国目前H5亚型禽流感流行以H5N6亚型为主，伴随少量的H5N1亚型；从H5亚型基因进化树来看，以2.3.4.4d分支为主，伴随少量2.3.2.1d分支。据报道的攻毒实验计算结果表明，对2.3.4.4d分支的H5N6亚型禽流感流行毒株，原来的H5N1Re-8株防护性抗原制剂仅能提供20%的保护，H5N1Re-12株防护性抗原制剂则能够完全保护。三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗，对我国高致病性禽流感流行毒株的针对性强，免疫保护效果好。

我国对高致病性禽流感采取免疫以及扑杀相结合的防控策略，其中全面免疫是关键技术措施。三黄鸡免疫重组禽流感病毒(H5+H7)三价灭活疫苗的推出使用，为防控高致病性禽流感提供了强有力的保障。