河南省三种地方牛种超数排卵结果与分析

施巧婷，张子敬，滑留帅，冯亚杰，李志钢，祁兴磊，王玉海，许 斌，徐照学，王二耀*

(1.河南省农业科学院畜牧兽医研究所,郑州 45002；2.平顶山市畜牧技术推广站，河南平顶山 467000；3.河南省泌阳县夏南牛研究推广中心,河南 泌阳 463700；4.南阳黄牛科技中心，河南南阳 473005；5.伊吾县畜牧改良站，新疆 哈密 839300)

地方牛品种具有体躯高大结实、结构匀称、耐粗饲、适应性强、抗病性强、性情温顺、遗传性能较稳定等优点。是我国宝贵的种质资源。但受引进品种影响，地方品种普遍存在品种退化、数量锐减等问题。牛胚胎移植技术可充分利用现有种质资源，生产更多优良种公、母畜，它是加速牛群改良和纯种繁育进程，迅速提高中国牛群整体水平的重要而有效的手段。

通过超数排卵技术可以获得更多可用卵子和胚胎。影响牛超数排卵效果因素较多，牛的品种、年龄、饲养管理、药品种类剂量、环境条件、重复超排、超排及采胚技术熟练程度等都能影响超排效果[1-5]。本次试验旨在分析河南肉牛繁育关键技术实施现状，建立起一套适合于地方肉牛产业化生产的超数排卵方案，探讨切实有效的扩繁技术，以提高牛的超数排卵效率，使胚胎移植技术更好的为畜牧业生产服务。

1 材料与方法

1.1 试验设计

1.1.1 体牛的选择 选择夏南牛、南阳牛、郏县红牛母牛作为供体，所有供体牛体格健壮，无遗传及传染性疾病、寄虫病、生殖系统疾病等，供体繁殖机能正常，生产性能良好，遗传稳定，系谱清楚，胎次在3胎以下。

1.1.2 试验物品及器材 垂体促卵泡素(FSH)(加拿大进口)，400 mg/瓶(20 mL 稀释)；氯前列烯醇(PG)上海市计划生育科学研究所出品,每支 0.2 mg；2%盐酸普鲁卡因；MEM.Gibco公司生产，每份 9.73 g；保存液(Holding)，美国ICP公司出品，每袋50 mL；冷冻液，美国ICP公司生产每袋20 mL；程序冷冻仪(型号ET-1N)，日本富士平公司出品；体式显微镜，由德国卡尔蔡司公司(Carl Zeiss，型号：Stemi 305)生产，冲胚管、扩张棒、集卵杯、抽粘液棒购于北京绿欣康农牧科技有限公司。

1.2 试验方法

1.2.1 供体牛超排方法 采用两次PG+FSH法，具体操作方法如下：发情周期任意一天肌肉注射PG 2 mL记为第1天，第12天第二次肌肉注射PG 2 mL，第23天连续 4d递减注射FSH，并在注射 FSH 的第 3 天下午注射 PG 2 mL。用药剂量根据牛的体重是否经产等因素确定。供体牛发情后进行人工授精。

1.2.2 牛胚胎采集方法 供体牛发情后人工授精的第 7天采用二路冲胚管法进行非手术冲胚。首先将供体牛保定，用2%普鲁卡因4 mL进行荐尾间隙硬膜外腔麻醉，剂量为 4～6 mL，用子宫颈粘液去除棒吸除粘液。将带钢芯的冲胚管插入阴门，达到子宫颈口。用直肠把握法将冲胚管导入子宫颈和子宫角。当冲胚管前端到达子宫角前端，给冲胚管气囊充气约 8～15 mL，抽出冲胚管内芯；用100 mL 注射器吸取冲胚液从输入管注入子宫角，然后回收冲胚液，每侧子宫反复 4～5 次，每个子宫角用 500 mL 冲胚液，将回收液收集集卵杯在室温下(18 ℃～22 ℃)静置5～10 min，镜检。

1.2.3 胚胎级别鉴定 根据胚胎的轮廓、细胞发育的均匀性、细胞的色泽等将胚胎分为 4 级。A 级：优良胚胎，形态典型、卵细胞和分裂球的轮廓清晰、细胞质致密、色泽和分布均匀一致；B级：普通胚胎，与典型的胚胎相比，稍有变形，但卵细胞和分裂球的轮廓清晰、细胞质较致密、分布均匀、水泡样和变性细胞占10%～30%；C 级：不良胚胎，形态变化明显，卵细胞和分裂球的轮廓稍不清晰或部分不清晰、细胞质不均匀、色泽发暗、水泡样和变性细胞占 30%～50%；D 级：变性、退化胚胎。其中A、B级胚胎为可用胚。

1.3 统计方法

依据胚胎鉴定分级法对各组回收的胚胎进行鉴定分级，统计各组总的胚胎数、可用胚数。采用SPSS 17.0统计软件处理试验数据。依据下列公式计算可用胚率和一级胚胎率，可用胚率=可用胚胎数/总胚胎数×100%，采用2个样本百分数差异显著性检验(t法)分别对各组可用胚率作差异性检验。

2 结果

表1 河南三种地方牛超排结果分析

由表1可知夏南牛超排7头获得90枚胚胎，其中69枚可用，可用胚9.86枚/头，南阳牛可用胚7.71枚/头，郏县红牛为6.75枚/头，可用胚中夏南牛最高与郏县红牛和南阳牛有显著性差异(P<0. 05)。可用胚率郏县红牛最高79.41%，夏南牛喂76.67%，显著高于南阳牛(P<0.05)。

3 讨论

影响牛超排效果的因素较多，牛的品种、营养水平、超排处理方法、激素种类及冲胚技术的娴熟度等对超排效果均有影响[1-5]。本试验采用PGF2+FSH处理河南三种地方肉牛，获得比较好的效果。

近年来中国奶牛体内生产和胚胎移植数量正在逐渐减少，引入肉牛品种体内胚胎生产有增加的趋势，每头平均有用胚胎为5.7～7.0枚[5]。牛的品种会影响超排效果，但地方品种牛超数排卵效果差。对奶牛(头均1.2～7.2枚)，可用胚率可达到76.3%[6]。Huseyin Erdem超排西门塔尔牛，146头牛获得618枚可用胚，头均4.23枚[7]。Fernando Naranjo-Chacón在热带地区超排瘤牛×家牛，可用胚达到5.9枚[8]。王木等[9]报道南阳黄牛头均有用胚数为2.89枚；李金辉等[10]报道秦川牛头均有用胚数为4.20枚；乔利敏等枚[11]报道晋南牛头均有用胚胎数为3.90；王新庄等[12]报道郏县红牛头均有用胚数为4.28枚；胡在钜等[13]报道广西南丹黄牛头均有用胚数为4.40枚。朱芳贤对复州牛进行了47头次超数排卵处理，头均回收卵子数7.98枚，其中头均有效胚数4.62枚[14]。但王峰[15]对荷斯坦牛、西门塔尔、海福特、安格斯、利木赞、夏洛莱进行了超数排卵实验，表明相同超排处理方法可用胚，除夏洛莱无显著性差异，夏洛莱头均可用胚较低(4.41±3.56)枚 。我们超排处理了河南地方三种肉牛，三种牛超排后可用胚数均超过7枚，高于以上报道，说明三种河南地方肉牛都具有很好的繁殖性能，可以用胚胎移植方法快速扩繁。

超排方法对超排效果也有显著影响。宁财等采用日本进口FSH处理锦江牛获得胚胎数5.8枚和可用胚3.8枚稍高[16]，与薛仰全等采用CUE+MATE孕酮栓+FSH+PGF2α处理奶牛获得头均可用胚4.86枚相当[17]。FSH剂量可以影响胚胎数量和质量，在实践中掌握牛的胎次及年龄，确定合适的FSH剂量方能达到较好的超排效果[2,4-5]。营养和环境因素对超排母牛也有影响[3]，应尽量规避和降低不良应激因素对牛体的影响。本次3种供体牛饲养管理和所处的环境不同，所用激素和处理方法相同，采胚操作是同一人完成，牛个体对激素应答反应有差异，可能是超排效果有差别的原因。笔者经验认为，经产牛第一针PG处理时清宫可以获得等多的可用胚。

河南的规模化牛场大都具备做牛超数排卵、胚胎移植的条件，基本掌握牛同期发情、超数排卵及胚胎移植等技术及流程，但在技术细节上还需要加强和提高，主要表现在供体牛的选择，清宫及冲胚技术等方面。在实际生产中，一些牛场在选择供体牛时，只选择外表和繁殖器官正常，无明显的繁殖性疾病的母牛，我们认为还应当查看牛只配种档案，挑选体格健康、情期受胎率高、繁殖性能优良的母牛作为超数排卵母牛，才能确保繁育技术的高效和稳定。另外，冲胚技术的熟练程度对胚胎回收率和母牛健康有很大影响，生产实践中也应加强和提高。

4 结论

试验采用两次PG+ FSH的方法对河南省肉牛超数排卵效果良好，获得的总胚胎数、可用胚数及可用胚率，较国内同行超排获得胚胎数多，可用胚率高，试验结果为今后肉牛繁育技术的更广泛开展提供参考。