大叶女贞愈伤组织诱导及继代培养的研究

徐伟君，王 娟，冯 利，代霞霞

(西安文理学院，陕西 西安 710065)

大叶女贞(Ligustrumcompactum)属木犀科女贞属，为落叶或常绿、半常绿的灌木、小乔木或乔木[1～3]。根系发达,适应性强，可抗氯气、二氧化硫和氟化氢等有毒气体[4]，具有很高的综合利用价值，是目前园林造景和城市绿化的主要树种之一。本文通过对大叶女贞幼嫩茎段进行愈伤组织诱导条件的探索，以期为大叶女贞再生体系的研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 外植体材料

以大叶女贞的幼嫩茎段和幼嫩叶片为外植体。

1.2 培养基1.3 方法

1.3.1 消毒方法 分别用75%酒精浸泡15s + 1.0%次氯酸钠浸泡20min、75%酒精浸泡30 s+0.1%升汞溶液浸泡6 min + 1.0%次氯酸钠浸泡10 min这两种不同的组合对外植体进行消毒处理，消毒后用无菌水冲洗4遍。将幼嫩茎段切成1 cm左右，叶片切成0.5*0.5 cm大小接种于愈伤组织诱导培养基上。1周后统计污染情况。

表1 培养基成分

以上7种培养基的pH均调至6.0～6.5之间,蔗糖含量为25 g/L, 琼脂7 g/L。以C为对照。

1.3.2 愈伤组织诱导 利用本试验筛选的较适宜的方法消毒后，将嫩茎切成 1 cm长，叶片切成 0.5*0.5 cm大小，分别接种于愈伤组织诱导培养基上。

2 结果与分析2.1 不同消毒方式的污染情况

1周后统计污染率，如表2所示， 75%酒精浸泡30s+0.1%升汞溶液浸泡6min+1.0%次氯酸钠浸泡10min灭菌效果更好，污染率仅有4%。

表2 不同消毒方式的消毒效果

2.2 不同外植体的愈伤组织诱导情况

使用两种不同的外植体在最适植物生长调节剂组合的培养基MS+0.2mg/L 6-BA+0.1mg/L 2,4-D上进行愈伤组织诱导的萌动情况及分析如下：

接种后培养15d ,幼嫩叶片稍有些卷曲或隆起,幼嫩茎段两端开始膨大。培养25 d左右, 在幼嫩茎段切口处产生肉眼可见的愈伤组织,愈伤组织均呈白色或浅绿色。

表3 不同外植体的愈伤组织萌动情况

使用幼嫩茎段作为外植体时，愈伤组织萌动所需时间较少，最短只需13d就形成愈伤组织，30d时的出愈率为86.0%；而幼嫩叶片却需要更长的时间才能形成愈伤组织，且褐化严重。

2.3 不同的植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响

由表4可知，不同生长调节剂组合对愈伤组织的诱导存在差别: 在A1的培养基上愈伤组织生长缓慢且出愈率较低。在A2的培养基上相对出愈率较高, 并且愈伤组织颜色呈绿色, 较疏松，后期生长慢。在A3的培养基上愈伤组织玻璃化严重。在B1的培养基上愈伤组织生长缓慢且玻璃化严重。在B2上的愈伤组织生长较好，为白色或淡绿色,且较为致密。

表4 不同植物生长调节剂组合的培养基对愈伤组织诱导的影响

2.4 不同植物生长调节剂组合对愈伤组织继代培养的影响

将诱导形成的胚性愈伤组织分别接种于A2和B2培养基上，继代培养15后的结果。在A2培养基上形成了大量的松散愈伤，而B2培养基继代形成的愈伤组织更加致密，胚性愈伤组织所占比例更大。

3 结论

虽然植物细胞具有全能性[5]，但是不同部位的再生的难易程度不同。选用条件方便、效果好的部位可以降低组织培养的难度，尤其茎尖的生长势和分化率都优于茎段[6]。但是林木的茎尖培养比较困难[7]，而幼嫩的茎段更容易培养[8]。本文以幼嫩的茎段和子叶为试材，结果发现愈伤组织诱导的最适外植体为幼嫩的茎段，而幼嫩叶片在培养过程中容易卷曲；在本试验中，MS+0.2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D为最适诱导培养基。此外，由于大叶女贞的嫩茎带有叶片，在剪去叶片生后留下的叶腋处容易残留污染源，只有用多种消毒方式结合才能有效地降低污染率，本文中较适宜的消毒处理是30s 75%酒精+6 min 0.1%升汞+10 min 1.0%次氯酸钠的组合。