TRPV1在小儿支气管哮喘中的表达以及与B7-H3和miR-29c相关性分析

张志英，靳秀红，张小宁，张向峰，罗青林，张松林

(郑州大学附属儿童医院·河南省儿童医院·郑州儿童医院 呼吸科，河南 郑州450000)

小儿支气管哮喘是临床常见慢性呼吸道疾病，儿童肺功能尚未完全发育成熟，是导致支气管哮喘发病加重的主要原因，且易造成反复发作[1]。病情加重可并发呼吸衰竭，对患儿生命安全造成威胁[2]。据流行病学调查显示，随全球气温变暖、空气环境恶化，小儿支气管哮喘发病率呈逐年上升趋势。相关研究显示，支气管哮喘的发生与变态反应有关，且支气管哮喘没有特定时间限制，可在不同年龄段发病，但多数始发于4岁前[3-4]。相关资料显示，哮喘严重程度不同，其病理结果、治疗及预后均存有一定差异[5]。本研究对支气管哮喘患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c水平进行检测，报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2019年4月—2020年4月在郑州大学附属儿童医院收治的支气管哮喘患儿172例作为研究对象，男94例，女78例，患儿年龄4-11岁，平均年龄7.5±2.1周岁。另选取同时段接受常规检查的健康儿童172例为健康志愿者，男90例，女82例，儿童年龄5-10岁，平均年龄7.5±2.9周岁。所有研究儿童性别、年龄、病历资料比较，无统计学差异，具有可比性。纳入标准：所有患儿均符合中华医学会对支气管哮喘的诊断标准[6]；伴有急性喘气、呼吸困难、咳嗽等症状出现。排除标准：①病历资料不全儿童；②合并先天性心脏病，肺、肝肾等重要脏器功能不全者；③合并其他哮喘症状样疾病或慢性肺疾病者；④合并血液系统、内分泌系统疾病者；⑤合并过敏性疾病者。本文研究内容均已告知患儿家属知情同意，并获得医院伦理委员会批准。

1.2 方法

1.2.1肺功能检测 使用肺活量检测仪对患者FVC(用力肺活量)、FEVI(第一秒用力呼吸容积)、PEF(最大呼吸流量)进行检测。

1.2.2指标检测 抽取所有研究儿童空腹静脉血液5 ml，在室温下离心5 min，离心半径为5 cm、转速为3 000 r/min，分离上清至无RNA酶的EP管中，于4℃环境下再次离心10 min，离心半径为5 cm、转速为1 200 r/min，分离上层血清并收集上清至无RNA酶的EP管中，-70℃保存，待用。(1)酶联免疫吸附法检测IgE、IFN-γ、EOS、TRPV1、H7-B3水平。按试剂盒说明书操作。(2)使用RT-PCR检测miR-29c表达：首先提取TTK细胞总RNA，对提取总RNA的纯度、含量进行检测，随后逆转录，获得cDNA后使用Primer5.0软件设计引物，内参为U6。设置反转录反应条件：25℃ 10 min,40℃ 60 min,85℃ 5 min；设置扩增条件:94℃ 20 s、72℃ 30 s、60℃ 30 s,35个循环，采用2-△△Ct方法计算出需要检测的miR-29c表达量。

1.3 统计学处理

采用SPSS21.0软件分析。计量资料比较进行重复测量数据方差分析，多组间比较进行F检验，组间两两比较采用独立t检验，P值<0.05为具有统计学意义的标准。相关性采用Pearson相关性分析。

2 结果

2.1 健康儿童与支气管哮喘儿童肺功能比较

如表1所示，与健康志愿者相比，支气管哮喘儿童FVC、FEVI、PEF水平明显较低，具有统计学差异(P<0.05)。

表1 健康儿童与支气管哮喘儿童肺功能比较

2.2 健康儿童与支气管哮喘儿童TRPV1、B7-H3、miR-29c表达比较

如表2所示，与健康志愿者相比，支气管哮喘患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c水平较高，具有统计学差异(P<0.05)。

表2 健康儿童与支气管哮喘儿童TRPV1、B7-H3、miR-29c表达比较

2.3 两组儿童哮喘相关细胞因子水平比较

如表3所示，与健康志愿者相比，支气管哮喘儿童血清IgE、EOS水平较高，INF-γ水平较低，具有统计学差异(P<0.05)。

表3 两组儿童哮喘相关细胞因子水平比较

2.4 不同病情严重程度支气管哮喘患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c表达比较

如表4所示，与急性期患儿相比，缓解期患儿TRPV1、B7-H3、miR-29c表达均较低，具有统计学差异(P<0.05)。

表4 不同病情严重程度支气管哮喘TRPV1、B7-H3、miR-29c表达比较

2.5 TRPV1、B7-H3、miR-29c与小儿支气管哮喘的相关性分析结果

如图1所示，TRPV1、B7-H3呈正相关(r=0.254，P=0.001)；TRPV1、miR-29c呈正相关(r=0.286，P=0.001)；B7-H3、miR-29c呈正相关(r=0.214，P=0.004)。

图1 TRPV1、B7-H3、miR-29c表达相关性图

3 讨论

支气管哮喘作为常见儿科呼吸道疾病，由多种细胞及细胞因子参与[7]。哮喘已经成为全世界范围内重要的公共卫生问题[8-9]。相关研究显示，哮喘形成遗传因素为主要致病原因，环境因素为重要外因，因此，对支气管哮喘进行正确诊断及评估具有重要意义[10-11]。

哮喘由多种细胞和细胞因子共同参与[12]。香草醛亚型1受体又称辣椒素受体，具有离子通道的特性，属于瞬时感受电位离子通道超家族并广泛存在于哺乳动物呼吸系统[13]。相关研究表明，TRPV1在支气管哮喘儿童外周血中呈异常高表达。同时，TRPV1在支气管狭窄、气管黏膜水肿、咳嗽反射等方面发挥重要作用[14]。TRPV通道激活后可促进细胞钙离子内流，TRPV1在小儿支气管哮喘发病调控过程中发挥重要作用[15-16]。

支气管哮喘的发生、发展与炎症和免疫反应具有密切联系[17]。B7-H3作为共刺激分子B7家族成员，具有双向调节T细胞作用。在急性期、缓解期患儿B7-H3水平呈异常高表达，且急性期高于缓解期；同时研究显示，与健康儿童相比，支气管哮喘患儿肺功能较低，且急性期低于缓解期，并与肺功能指标呈负相关[18-19]。本文研究结果显示，通过B7-H3水平检测对支气管哮喘患儿病情评估具有一定参考价值。

研究资料表明，miRNA通过对下游靶基因调控参与机体生长发育、疾病发生等多种生理病理过程[20]。miR-29是与感染疾病具有密切联系的miRNA家族，miR-29c在肺细胞感染患者外周血中呈异常升高，提示miR-29c水平变化与小儿支气管哮喘的发生及其严重程度具有相关联系[20-21]。