香榧精油的安全性研究

王榆薇，黄河儒，王宽诚，朱邑辰，吴昕橙，陈淑贞，张芳芳

（杭州医学院，浙江 杭州 310013）

香榧（Torreya grandis）是红豆杉科榧树属下的一个种，别名野榧、羊角榧、榧子，为中国原产常绿针叶乔木，主要生长在中国南方的湿润多雨地区，目前主要分布于浙江、福建、江苏、江西、安徽和湖南等地[1-3]。香榧精油提取于香榧子中的假种皮，含有木质素、单宁和紫杉醇等物质，有体外抑菌、抗氧化、杀虫和趋避等活性[4-5]。假种皮是香榧加工的副产物，占实际果实质量的1/2以上[6]。有研究结果表明，在常用的15种植物精油中，有11种含有致敏成分，检出率为73.3%[7]。相对于其他木本精油，香榧精油通常被认为是功效最多、用途最广的精油[8-9]，然而其安全性评价资料尚不完善，因此，有必要对其可能存在的健康风险进行毒理学安全性评价。

1 材料和方法

1.1 材料

（1）香榧精油：纯度99.0%，淡黄色液体，假种皮蒸馏，香榧种皮源于浙江省龙泉市龙南乡兴川村野生香榧[10]。

（2）实验动物：新西兰家兔8只（雌性），体重2.0～2.5 kg，由杭州余杭科联兔业专业合作社提供；豚鼠42只（雄性），体重250～300 g，由无锡恒泰实验动物养殖有限公司提供。

（3）动物饲料由浙江省实验动物中心提供。

（4）饲养环境：家兔每笼1只，豚鼠每笼10只（每笼同性别、同剂量组），食、水自由摄取，温度为20～26 ℃，相对湿度为40.0%～70.0%，人工光照，12 h光照和12 h无光照交替，每小时更新室内空气12次。

1.2 方法

1.2.1 家兔急性皮肤刺激试验

试验前24 h，将家兔脊柱两侧剃毛3.0 cm×3.0 cm，涂抹面积2.5 cm×2.5 cm，以自身对侧皮肤为对照。用4只家兔进行皮肤刺激性/腐蚀性试验，将0.5 mL受检样品均匀涂敷在皮肤上，用两层纱布和一层玻璃纸覆盖，再用无刺激性胶布加以固定，4 h后用温水洗去，观察皮肤的刺激反应。于清除受检样品后的1、24、48、72 h观察皮肤反应，直到恢复为止，观察期不超过14天。观察并记录皮肤刺激反应的红斑、水肿等症状，每天观察1次。根据2015版《化妆品安全技术规范》第六章“4 皮肤刺激性/腐蚀性试验”中的“表1皮肤刺激反应评分”评分，按计算每天每只动物平均积分。

1.2.2 家兔急性眼刺激试验

用4只家兔进行试验，轻轻拉开一侧眼睛下眼睑，将0.1 mL受试物滴入结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1 s，防止受试物丢失，另一侧眼睛不处理，作为自身对照。滴入受试物后24 h内不冲洗眼睛。在滴入受试物后1、24、48、72 h以及第4天和第7天对动物眼睛进行检查，如果72 h未出现刺激反应，即可终止试验。除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其他损害效应均应记录报告。每次检查均按2015版《化妆品安全技术规范》第六章“5 急性眼刺激性/腐蚀性试验”的“表1 眼损害的评分标准”记录眼刺激反应的积分，按“表3 产品眼刺激性反应分级”判定受试物对眼的刺激强度。

1.2.3 豚鼠致敏试验

按2015版《化妆品安全技术规范》第六章“6 皮肤变态反应试验”的局部封闭涂皮法（Buehler Test，BT），将豚鼠随机分为试验组、阴性对照组和阳性对照组，试验组动物20只，阴性对照组动物10只，阳性对照组动物10只。另选用2只豚鼠做预试验。豚鼠背部各去4块毛，将原液、1∶1稀释液、1∶2稀释液分别涂敷于去毛区，另一块作为空白对照，于6 h后去除，根据1 h、24 h观察到的皮肤反应，确定诱导接触剂量和激发接触剂量。

（1）诱导接触：试验前24 h将动物背部右侧去毛4～6 cm2，然后将0.2 mL受试物涂在试验动物去毛区皮肤上，用两层纱布、一层玻璃纸覆盖，再以无刺激性胶布封闭固定6 h。第7天和第14天以同样的方法重复一次。阳性对照组用0.2 mL质量浓度为10 mg/mL的2,4-二硝基氯代苯以同样的方法致敏3次。阴性对照组用0.2 mL赋形剂（蒸馏水）以同样的方法致敏3次。

（2）激发试验：末次诱导后14天，将0.2 mL受试物涂于豚鼠背部右侧2.0 cm×2.0 cm去毛区（接触前24 h脱毛），固定6 h。阳性对照组用0.1 mL质量浓度为10 mg/mL的2,4-二硝基氯代苯以同样的方法做激发接触，于激发接触后24 h和48 h观察结果。阴性对照组用0.2 mL精油以同样的方法仅做激发接触，于激发接触后24 h和48 h观察结果。

2 结果与分析

2.1 皮肤刺激试验

在染毒后观察期间，家兔皮肤可见红斑（清晰可见、易于确定）、轻度水肿（皮肤隆起轮廓清楚），观察至第4天恢复，于第4天试验结束，其红斑最高分值为2，水肿最高分值为2，每天每只动物平均积分为0.65。根据2015版《化妆品安全技术规范》第六章“4 皮肤刺激性/腐蚀性试验”的“表2 皮肤刺激强度分级”，判定本次试验皮肤刺激强度为轻度刺激，结果如表1所示。

表1 香榧精油急性皮肤刺激性/腐蚀性试验结果

2.2 眼刺激试验

染毒后，家兔可见受试右眼结膜弥散性充血，呈深红色，有明显水肿，虹膜和角膜未见损伤，于第3天恢复正常，观察至第3天试验结束。详情如表2所示。

表2 香榧精油急性眼睛刺激性试验结果

2.3 致敏试验

经致敏接触及激发试验后，精油试验组和阴性对照组动物染毒皮肤均未出现红斑与水肿，致敏率为0%；阳性对照组有9只动物染毒皮肤出现程度不一的红斑与水肿，致敏率为90.0%。根据2015版《化妆品安全技术规范》第六章“6 皮肤变态反应试验”中的“表3 致敏强度”，香榧精油属于弱致敏物，未见皮肤变态反应。

3 结论

本研究所用香榧种皮源于浙江省龙泉市龙南乡兴川村野生香榧，变废为宝，研发出香榧精油并衍生出一系列产品，如香榧精油手工皂、香榧精油氨基酸皂、香榧精油渲染皂等，促进了香榧市场的发展。

急性皮肤刺激试验主要通过对家兔皮肤表面的红斑水肿进行评分，检测香榧精油对皮肤局部是否有刺激作用及评价刺激的严重程度。与人类和豚鼠相比，新西兰兔在大多数情况下对具有刺激性的物质较为敏感。在本试验条件下，家兔皮肤封闭接触4 h出现了肉眼可见的红斑、水肿，而豚鼠皮肤封闭接触6 h未见红斑、水肿。急性眼睛刺激试验主要用于判断香榧精油对眼睛的刺激作用，通过动物试验，对结膜的充血、水肿和角膜的损伤进行评分，并判断其对眼睛急性刺激的可能性及严重程度，根据香榧精油对新西兰兔的眼部刺激程度外推其对人眼部的刺激作用。皮肤致敏试验可以确定重复接触香榧精油对豚鼠是否引起变态反应及其反应程度，本试验通过对豚鼠皮肤表面反复染毒，对皮肤红斑及水肿进行评分，判断香榧精油不引起豚鼠皮肤变态反应，在人群中大概率也不会引起变态反应。

香榧精油的纯度为99.0%，在实际使用时，需用基础油调和后以涂抹或按摩的方法施于皮肤，很少与人体皮肤直接接触。试验中使用封闭式接触是一种超常的实验室条件下的试验，在人实际使用化妆品的过程中很少存在这种接触方式。综上所述，香榧精油在日常生活中不易产生皮肤刺激性、眼睛刺激性和致敏性。