秦安蜜桃叶中黄酮正交提取工艺模式的建立

杨劝生

( 甘肃工业职业技术学院化工学院，甘肃 天水 741025 )

秦安素有“瓜果之乡”的美称，所产蜜桃以个大、色艳、味美、质优、环保、营养丰富而誉满全中国，享有“天有王母蟠桃，地有秦安蜜桃”之美誉。据秦安县志记载，秦安蜜桃早在汉代时就已广泛栽培，在唐宋时期，“齐桃”、“二格子桃”和“秋桃”就以个大、色艳、味美而远近闻名。相传，唐太宗李世民在病中想吃故乡的蜜桃，专门派遣使者快马兼程到秦安采摘，从此秦安蜜桃被作为朝廷贡品，名扬四海。北宋时期秦安就有“城北十里桃花川”之说。长期的蜜桃栽培，在葫芦河流域形成了自兴国镇庙咀村到郭嘉镇邵咀村全长30余公里的数万亩桃园，每到春季，桃花竞放，香气四溢。 目前， 全县蜜桃栽培面积超6 667 hm2，年产量99 200 t，产值达33 810万元。

建成日光温室桃棚637座，结果517座。已建成万亩蜜桃基地2个，千亩以上桃基地20处，蜜桃专业村64个，全县桃农有47 600余户。人们除了把蜜桃作为鲜果品尝外，主要副产物-叶极少数被用作动物饲料或燃料灰肥返田，大部分作为固体废物而抛弃，不能发挥应有的作用，相反存在寄生病虫、污染环境等诸多弊端。查阅有关研究资料，秦安蜜桃叶富含多种人体有益成分，尤以黄酮类化合物芦丁(Rutin)含量较高，黄酮类化合物具有抗氧化、保护心脑血管系统、抗癌、止血等生理活性,且低毒。对动物体内自由基有较好地清除作用，有效减轻和消除动物体的炎症。在畜牧产业中，蜜桃叶配方饲料能够加快牲畜生长速度，增加产奶、产蛋、产肉量，改善奶、蛋、肉品质和繁殖性能，防预疾病等有重要的意义。本研究以秦安蜜桃叶为原料，通过正交实验设计，以乙醇回流提取蜜桃叶黄酮类化合物，建立并优化了秦安蜜桃叶叶中芦丁提取工艺，HPLC法测定秦安蜜桃叶中黄酮类化合物的含量，以确定最佳提取工艺参数，为蜜桃副产物中有效成分的提取分离提供了一定的参考，同时进一步促进蜜桃叶配方牲畜饲料、预防及治疗性兽用药等系列产品的开发。

1 材料与仪器

1.1 药材

2020年9月于天水市秦安县西川镇王存生、秦安县刘坪镇张二娃、兴国镇李桂生、王尹镇缑来虎等10余个蜜桃园采集“北京七号”蜜桃叶，经自然风干，粉碎，过筛。

1.2 仪器

Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪、KQ-500D型数控超声波清洗器、RE52-99型旋转蒸发仪、UV751GD型紫外-可见分光光度计、JY系列电子天平、色谱工作站为CAG Bootp Serier、色谱柱为Eclipse×DB-C18柱等。

1.3 试药

芦丁对照品(中国食品药品检定研究院，批号：11844-200505)，95%乙醇、NaOH，以及其它分析纯试剂。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备

精密称取芦丁对照品0.0251 g，用25 mL 80%乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，摇匀，得质量浓度为25.1 mg/mL的芦丁对照品溶液。

2.2 供试品溶液的制备

称取秦安蜜桃叶粉末10.0 g，加入不同体积分数的乙醇，在室温下浸泡5～7 h后，经300 W超声波50 ℃处理80 min。将超声处理过的物质全部转移索氏提取器中加热回流提取，得到回流液。用旋转蒸发仪将回流液减压浓缩至无醇味之后立即将浓缩液转入100 mL锥形瓶中，得抽滤样品液。重复此操作三次，将三次实验的抽滤样品液合并，减压浓缩至粘稠状，趁热移入150 mL锥形中，加入质量分数为10%NaOH调pH至8～10，密封静置24 h。经减压抽滤，将滤液移入100 mL容量瓶中，加入95%乙醇定容至刻度，封口4 ℃保存备用。

2.3 黄酮含量测定色谱条件

检测器：Eclipse×DB-C18柱(4.6 mm×250 mm)，波长：254 nm，流动相：甲醇∶1% 冰醋酸 = 60∶40(v/v)，柱温：30 ℃，进样量：20 μL，流速1.0 mL/min 。

2.4 正交提取结果与分析

取45%、60%、75%不同体积的乙醇，液料比7.51、12.51、17.51 mL/g,提取温度40 ℃、60 ℃、80 ℃，设定正交试验表，考察黄酮含量的提取率，结果取3次试验结果的平均值，见表1、表2，方差分析见表3。

表1 正交试验因素水平表

表2 正交试验结果

表3 黄酮含量方差分析表

2.5 验证试验

经分析优选出的A2B2C3工艺未包括在正交设计的试验表中,再按A2B2C3工艺进一步验证试验。分别称取蜜桃叶5份，各30 g，以蜜桃叶黄酮含量为验证指标进行试验，黄酮含量平达1.250 mg/g，稳定性和重现性好，可建立蜜桃叶中黄酮的提取工艺。

3 结论

本试验以秦安蜜桃“北京七号”的叶子为实验材料，在单因素试验的基础上进行L9(33)正交实验，优选乙醇体积分数、料液比、提取温度等主要影响因素，确定了最佳提取工艺(乙醇体积分数60%、料液比12.51、提取温度70 ℃),黄酮类化合物含量可达1.250 mg/g，并发现三种影响因素之间存在一定的交互作用。由于蜜桃叶来源广泛、绿色天然无污染，廉价易得，叶中所含黄酮类化合物有较强的抗氧化能力，且在机体内低残留，可作为较理想的自由基清除剂，用于保护机体健康和食品安全领域，并有望开发成为新型的食品添加剂或配方饲料、预防与治疗性兽药。通过一系列研究，为当地蜜桃产业深入开发和研究提供理论依据。