一种生物色标在冰余石蜡制片中的应用体会

李 晓，曹 卓，李明显，刘红英，黄镇栋，郑广娟，何青莲

近年来随着医疗水平的迅速发展，术中冷冻技术成为病理诊断不可或缺的手段之一，但由于冷冻制片的局限性，术中冷冻病理诊断存在一定的误诊率[1-2]。冰余术后石蜡切片技术能够明确诊断，并进一步佐证术中冷冻诊断的准确性，为临床后续治疗提供可靠依据。实际工作中有时会出现两者诊断相悖的情况[3]，这是因为冰余组织经脱水后难以还原冷冻的情况，从而导致原冷冻切面中具有诊断意义的病灶在石蜡切片中无法体现。为解决上述问题，本科室通过不断实践，运用生物色标来标记乳腺癌切缘标本的冷冻样本头，其能够有效提高冰余包埋及切片的工作质量和效率，从而提高冷冻诊断与石蜡诊断的符合率，现介绍如下。

1 材料与方法

1.1 材料收集2021年1～8月广东省中医院术中快速冷冻病理诊断为乳腺癌，且同时送检乳腺癌切缘标本进行术中冷冻切片106例，随机抽取53例作为实验组，53例作为对照组。对照组与实验组均由同一位病理技师分别应用传统方法与实验方法进行术中快速冷冻切片的相关操作。

1.2 主要设备及耗材Thermo NX70冷冻切片机，汉谷医疗HRS-18C冷冻切片快速染色机，SAKURA VIP6全自动组织脱水机，SAKURA TEC5组织包埋机，Leica RM2245石蜡切片机，SAKURA全自动染色封片工作站，OLYNPUS BX51显微镜，SAKURA OCT包埋剂，BLADEX绿色生物色标，冰醋酸。

1.3 方法(1)对照组(图1)：按照传统方法将已完成术中冷冻诊断的乳腺癌切缘组织固定于10%中性福尔马林中，依次脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。(2)实验组(图2)：对于已完成术中冷冻诊断的乳腺癌切缘组织，用干净棉签蘸取适量绿色生物色标涂抹于冷冻样本头的切面，放回冷冻切片机内等待3 s，待生物色标略干后，另取干净的棉签蘸取1%冰醋酸水溶液涂抹于冷冻样本头切面，等待6 s，待冰醋酸略干后，固定于10%中性福尔马林中，依次脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。

图1 A.对照组传统未标记冷冻样本头；B.未标记组织石蜡包埋效果 图2 A.实验组生物色标标记冷冻样本头；B.已标记组织石蜡包埋效果

2 结果

对照组冷冻切片与常规石蜡切片病理诊断判定为符合49例，基本符合3例，不符合1例，此例乳腺癌切缘组织冷冻切片HE染色结果为未见癌，石蜡切片HE染色结果为原位癌(图3A、B)，符合率为92.45%(表1)；实验组冷冻切片与常规石蜡切片病理诊断判定为符合53例，符合率为100%(表1)，如冷冻切片与石蜡切片HE染色结果均为导管上皮不典型增生(图3C、D)。

表1 两种方法冷冻切片与常规石蜡切片病理诊断符合情况

图3 两种方法乳腺癌切缘标本HE染色结果对比：A.对照组冷冻切片染色，未见癌；B.对照组石蜡切片染色，原位癌；C.实验组冷冻切片染色，可见导管上皮不典型增生；D.实验组石蜡切片染色，可见导管上皮不典型增生

3 讨论

冷冻条件下，肿瘤组织内的细胞形态会发生改变，使得肿瘤细胞被拉长或破坏，而石蜡制片具有定位准确、定量可测、定性可靠的特点，一般术中冷冻切片质量不及术后石蜡切片的质量[4-6]。因此，冷冻诊断难以确诊的标本，经过对冰余组织石蜡制片而变得容易诊断，比如术中诊断为可疑癌的病例在石蜡制片后可以确诊为癌。然而由于冰余组织经脱水后难以还原冷冻的情况，特别是乳腺癌切缘标本等较小的组织，石蜡包埋时冰余组织切面不易辨认，本对照组采用传统方法时发生冷冻切面与其对应石蜡切面不一致的情况，严重时可造成诊断结果不一致。因此对于乳腺癌切缘等较小组织，从取材、包埋、切片等步骤都应注意哪一面是“真正的切缘”[7]。本实验组借助生物色标涂墨标记冷冻切面的方法，能清晰明确地标记冷冻切面，即“真正的切缘”，使冷冻切面与石蜡切面一一对应，提高包埋质量和效率，进而提高术中冷冻切片与术后石蜡切片病理诊断的符合率。

使用生物色标以标记冷冻切面的方法不仅适用于乳腺癌切缘标本，也适合于其他组织的冷冻标本切面标记，特别是甲状腺微小乳头状癌的标记。由于甲状腺微小乳头状癌结节直径小于10 mm[8]，如果用生物色标标记出结节所在的位置，可提醒技术员包埋时高度重视，注意包埋切面并仔细包埋平整，还有助于技术员切片时少修，以切到涂墨的结节为准，防止过度修蜡把结节修没了。应用生物色标进行标记时需注意以下几点：(1)在涂抹生物色标的时候要均匀，并且需要其稍微干燥后再进行下一步操作，避免卸样本头时由于OCT包埋剂的融化导致生物色标浸染到标本冷冻切面的反面而影响实验。(2)若冷冻切缘中存在较小的癌结节或具有诊断意义的小病灶，标记切缘时对该区域进行准确、重点地涂墨，这样在石蜡包埋及石蜡切片时都能为技术员提供必要的提醒作用，从而保护了组织的重点部位，防止造成同一标本冷冻与石蜡切片前后诊断不一致的医疗差错。

综上所述，术中冷冻制片后使用生物色标涂墨以标记冷冻切面的方法在乳腺癌切缘标本等较小组织的冰余石蜡制片中起到较好的提醒效果，提高了冰余石蜡制片质量，为提高病理诊断的准确率提供了重要依据。