男方年龄对冻融胚胎移植周期妊娠结局的影响

程玲

厦门大学附属第一医院生殖医学中心，厦门 361003

近年来，随着社会环境、女性生育意愿的变化，许多夫妇计划生育的时间推迟。多数研究认为女性年龄是影响体外受精-胚胎移植（IVF/ICSI）妊娠结局的重要因素，随着女性年龄增加，卵子质量降低、线粒体功能下降、卵泡环境改变导致妊娠率、活产率降低，流产率增高，妊娠期并发症和围产期病死率增高［1］，新生儿先天畸形增加。而男方年龄对胚胎质量和妊娠结局的影响，研究较少且结论不一致［2-3］。本研究回顾性分析了 2017 年 1 月至 2020 年 12 月在厦门大学附属第一医院生殖医学中心首次接受冻融胚胎移植（frozen-thawed embryo transfer，FET）的484对不孕不育夫妇的临床资料，探讨男方年龄对妊娠结局和新生儿出生情况的影响。

资料与方法

1、资料来源

采用回顾性分析，收集2017年1月至2020年12月就诊于厦门大学附属第一医院生殖医学中心首次接受FET 移植的484 对不孕不育夫妇临床资料，按男方年龄分为A 组（＜35 岁，389 例）、B 组（≥35 岁，95 例）。纳入标准：（1）女方年龄＜35 岁；（2）IVF/ICSI 后首次进行 FET 移植；（3）女方卵泡刺激素（FSH）＜12 mIU/ml；（4）在月经第 2～3 天女方窦卵泡数＞3 个；（5）女方体质量指数（BMI）在正常范围内（18.5 kg/m2≤BMI＜24.9 kg/m2）。排除标准：（1）女方多囊卵巢综合征、子宫内膜异位症；（2）子宫畸形；（3）夫妻双方染色体异常；（4）复发性流产等。本研究经医院伦理委员会批准。

2、方法

2.1、控 制 性 超 促 排 卵 （controlled ovarian hyperstimulation，COH）和胚胎培养 根据女方年龄、抗苗勒氏管激素（AMH）、基础窦卵泡数目和基础性激素水平等选择不同的促排方案，采用阴道B 超和雌二醇（E2）水平监测卵泡发育。当直径≥17 mm 的卵泡达到3 个或者直径≥18 mm 的卵泡达到1 个时，注射人绒毛膜促性腺激素进行扳机诱发排卵，36～37 h 后阴道超声引导下取卵。取卵当日，视精液质量行IVF 或ICSI 授精，受精后第3 天进行卵裂胚形态学评分，依据胚胎发育情况进行移植、冷冻或养囊，D5 或D6 胚胎依据Gardner 形态学标准进行评估后移植或冷冻。

2.2、冻融胚胎移植 采用激素替代周期或自然周期。（1）激素替代周期排卵障碍或月经周期不规律的患者自月经第2～3天口服戊酸雌二醇，当子宫内膜厚度≥8 mm时，给予黄体酮注射液，同时口服地屈孕酮片3～5 d 后移植卵裂胚或囊胚。（2）自然周期月经周期规律者自月经第10 天起经阴道B 超监测卵泡和内膜，当子宫内膜厚度≥8 mm，出现黄体生成素（LH）峰后4～6 d移植卵裂胚或囊胚。

3、观察指标

（1）比较两组患者的一般资料：包括男方年龄、女方年龄、促性腺激素（Gn）天数、Gn总量、基础E2、睾酮、抗缪勒氏管激素、促黄体生成素、垂体泌乳素、孕酮、不孕年限、转化日内膜厚度、不孕情况、体外授精方式、内膜准备方案、胚胎移植情况等；（2）比较两组患者的妊娠结局：包括临床妊娠率、种植率、活产率、流产率、早产率、新生儿体质量、新生儿性别等。

4、统计学方法

采用SPSS 26.0 软件，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用独立样本t检验；计量资料用百分率（%）表示，组间比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。采用二元logistic回归分析男女年龄对妊娠率和活产率的影响。以P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

1、一般资料比较

男方年龄、女方年龄、Gn 总量、人绒毛膜促性腺激素（HCG）日E2水平、基础E2、转化日内膜厚度在两组间比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。其余观察指标在两组间比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表1。

表1 两组行体外受精-胚胎移植之后首次接受冻融胚胎移植患者的一般资料比较

2、妊娠结局比较

两组患者的临床妊娠率、种植率、活产率、流产率、早产率、新生儿体质量（低体质量儿比重、正常体质量儿比重、巨大儿比重）、新生儿性别等比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表2。

表2 两组行体外受精-胚胎移植之后首次接受冻融胚胎移植患者妊娠结局比较

3、男女方年龄对妊娠率和活产率的影响

二元logistic 回归结果显示，以A 组作为对照组，B 组妊娠率比值比（OR）值为0.741［95% 置信区间（CI）0.469～1.171］，校正女方年龄后，OR值为 0.769（95%CI0.470～1.258），差异无统计学意义（P＞0.05）。B 组活产率OR值为0.791（95%CI0.505～1.240），校正女方年龄后，OR值为0.837（95%CI0.516～1.357），差异均无统计学意义（均P＞0.05）。见表3。

表3 男方年龄对体外受精-胚胎移植之后首次接受冻融胚胎移植妊娠结局的logistic回归分析

讨 论

在IVF/ICSI 中，女方年龄对妊娠结局的影响，已有比较统一的共识，多项研究证实随着女方年龄的增长，卵母细胞质量下降，导致临床妊娠率、活产率下降等不良妊娠结局［1］。而关于男方年龄对辅助生殖妊娠结局的影响不甚明确。本文通过回顾性分析484 对不孕不育夫妇的临床资料，分析男方年龄对首次接受FET 的不孕夫妇妊娠结局的影响，同时分析男方年龄对新生儿体质量及性别等是否产生影响。

在本研究中，男方年龄＞35 岁时，不会对冻融移植周期的临床妊娠率、活产率、早产率、流产率、新生儿体质量、新生儿比例等造成影响，与Kong 等［4］的研究结论一致。周小丹等［5］通过对1 407 例患者临床资料的分析，认为在常规长方案IVF-ET 周期中，控制女方年龄因素影响后，男方年龄对临床妊娠率无明显影响。单春霞和孙洪英［6］在常规IVF-ET 周期中，控制女方年龄因素影响后，男方年龄对生化妊娠率无明显影响。Lai 等［7］研究了 2004—2014 年香港地区接受辅助生殖技术的3 549例患者的临床数据，认为父亲年龄与部分精液参数呈负相关，40 岁后精液质量显著下降，但父亲的年龄与活产率无关。这些研究结论与本文研究结果一致。也有学者有着不一样的观点，McPherson 等［8］回顾性分析2009—2013 年首次进行IVF/ICSI 的4 057 对夫妇的妊娠结局，发现父亲高龄组的临床妊娠率和活产率低于父亲低龄组。Murugesu 等［9］进行了一项包含 32 484 个周期、28 项研究的meta 分析，结果表明，父亲年龄增加对IVF/ICSI 有不利影响。Marsidi 等［10］将 77 209 个 IVF/ICSI 周期纳入研究，得出结论，父亲年龄高于46岁时接受IVF的夫妇妊娠 率和活 产 率较低 。 Van 等［11］研 究 者于 2015 年 4 月 至2017年9月间在比利时招募了接受辅助生殖技术的87对不孕不育夫妇，对他们的1 000 多个胚胎进行研究，发现随着父亲年龄的增加，胚胎发育质量下降。可能原因是由于父亲年龄增大，导致遗传精子缺陷（如精子头部突变、端粒长度变化等）。Goisis 等［12］分析了 1987—2000 年 10 652 名芬兰儿童的临床资料，发现父亲年龄＞40 岁时，孩子早产和低出生体质量风险增加。Morris 等［13］学者认为，父亲年龄超过50岁时会影响IVF/ICSI的活产率，对流产率没有影响。

关于男方年龄偏大导致妊娠率和活产率下降的机制，有研究认为可能是由于精子氧化DNA 损伤和精子表观遗传标记（如甲基化）的改变［14］。人类精子DNA 完整性对受精成功和胚胎正常发育至关重要，DNA 完整性较差的精子与怀孕成功和流产率增加呈负相关。精子DNA 损伤已被证明在父亲年龄偏大时升高，因此可能导致辅助生殖技术临床妊娠率和活产率降低。精子表观遗传修饰的改变（即甲基化）包括与男性不育相关的印迹基因和精子中重复元素的低甲基化，这些都可能导致妊娠率的降低。同时，高龄男性中精子5-羟甲基胞嘧啶和5-羟甲基胞嘧啶含量增加，精子甲基化的整体模式发生了改变，这种精子甲基化状态的变化可能对后续的妊娠状态产生影响。在动物模型中，已经观察到精子的这些甲基化变化可以在后代组织中遗传，导致转录和行为变化。父亲年龄增加可能使精子中心体缺陷而导致纺锤体的异常形成，损害胚胎的早期细胞分裂。中心粒复制的关键调控因子PLK4 序列中的单核苷酸多态性与胚胎有丝分裂错误相关。父亲年龄增加会导致男性内分泌［15］（如雄性激素减少、FSH 水平升高）和生殖表型（睾丸形态和体积的改变、精子产量的改变、精子特征和精子DNA 碎片的显著增加）的变化，再加上多年来DNA 损伤的积累和生殖细胞修复损伤的能力下降，导致精子基因组完整性下降，导致产生非整倍体精子，进而增加胚胎的非整倍体。但对于年轻女性来说，卵母细胞的质量能在一定程度上修复精子DNA 损伤，弥补由于男方年龄增大引起的精子质量下降等缺陷，降低男方年龄增加造成的影响。

综上所述，在女方年龄＜35 岁时，男方年龄对IVF/ICSI后首次FET周期妊娠结局和新生儿结局没有影响。