血清miR-142在急性脑梗死患者中的表达及预后评估研究

周倩文 朱圆圆

1 湖北省第三人民医院神经内科，湖北省武汉市 430000； 2 宜兴市人民医院老年科

脑梗死是一种以高发病率、高残疾率和高死亡率为特征的急性缺血性脑血管病，也是导致死亡的第二大原因[1]。近年来，尽管缺血性卒中的诊疗有了巨大的进步，但大部分患者的预后依然不尽人意，因此，寻找早期评估脑梗死预后的指标是卒中领域研究的重点。microRNA(miRNA)在血清中可以稳定存在，在神经系统疾病的诊断、预后评估中具有良好的潜力。近年研究显示，miR-142在缺血再灌注小鼠模型中显著增加[2]，并与神经功能障碍程度密切相关，提示miR-142或可成为评估缺血性脑卒中病情和预后的外周血指标。本研究在此基础上，观察了急性动脉粥样硬化型脑梗死患者血清miR-142的表达变化，并评估了其对脑梗死早期病情相关性及其对脑梗死预后的预测价值，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取 2018年1月—2021年12月在湖北省第三人民医院神经内科住院治疗的首发急性脑梗死患者(脑梗死组)。入组标准：(1)首次发作，符合中国急性缺血性脑卒中诊治指南中急性脑梗死诊断标准，经CT或MRI证实为缺血性脑卒中；(2)发病时间在24～48h内；(3)TOAST分型符合大动脉粥样硬化型脑梗死。排除标准：(1)既往有脑卒中、中枢神经系统感染、癫痫等神经系统病史；(2)合并严重的肝肾功能不全、血液系统疾病、肿瘤、自身免疫系统疾病、精神疾病等；(3)存在其他原因导致的肢体功能障碍，或其他原因不能配合完成量表评分；(4)合并其他原因经研究者判断不宜入组。所有脑梗死患者接受脑梗死常规治疗，3个月后进行改良Rankin量表(mRS)评分，mRS≤2分的患者纳入预后良好组(共125例)，mRS>2分纳入预后不良组(共41例)。同时纳入年龄、性别与脑梗死组患者匹配的我院健康体检人员100例作为对照组，排除标准同上一致。本研究通过湖北省第三人民医院医学伦理委员会审核批准，所有受试者均签署知情同意书。

1.2 一般资料收集 所有受试者收集一般人口学资料，包括年龄、性别、吸烟史、饮酒史、高血压史、糖尿病史。

1.3 血清生化指标及miR-142测定 所有受试者入组后，于次日空腹采取黄色促凝管抽取静脉血5ml，静置30min后于3 000r/min离心10min，收集上清液检测糖化血红蛋白、空腹血糖、胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸。取500μl血清样品，Trizol法提取miRNA，并测定其RNA浓度。按照FastQuant RT Kit(with gDNase)试剂盒反转录cDNA。根据miRcute增强型miRNA荧光定量检测试剂盒(SYBR Green)加样上机检测，以U6为内参，采用2-ΔΔct法分析miR-142相对表达水平。

1.4 NIHSS量表和mRS量表评分 所有脑梗死患者入组后由固定的两名经验丰富的神经内科医生进行NIHSS量表评定并记录，并在90d随访时进行mRS评分判断预后。

2 结果

2.1 各组一般资料比较 脑梗死组患者男性比例、吸烟史、高血压比例、糖尿病比例、糖化血红蛋白、空腹血糖、甘油三酯、低密度脂蛋白、同型半胱氨酸明显高于对照组(P<0.05)，而年龄、饮酒史、胆固醇、高密度脂蛋白与对照组比较未见明显差异(P>0.05)。脑梗死预后良好组年龄、高血压比例、糖尿病比例、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸明显低于预后不良组。见表1。

表1 各组一般资料比较

2.2 脑梗死患者血清miR-142水平表达变化 脑梗死患者血清miR-142相对表达水平为5.37±1.07，对照组为2.90±1.17，脑梗死组miR-142水平明显高于对照组(P<0.01)。脑梗死预后良好组miR-142相对表达水平为4.79±0.95，预后不良组为5.91±1.14，预后良好组miR-142表达低于预后不良组(P<0.01)；差异均具有统计学意义(见图1)。

图1 脑梗死患者血清miR-142水平表达情况

2.3 脑梗死患者血清miR-142水平与NIHSS评分相关性分析 对脑梗死患者血清miR-142水平与NIHSS评分行pearson相关性分析，结果显示血清miR-142水平与NIHSS评分具有正相关关系，其相关系数r=0.576，P<0.001，见图2。

图2 脑梗死患者血清miR-142与NIHSS评分相关性分析散点图

2.4 脑梗死患者预后不良危险因素的Logistics回归分析 以脑梗死患者预后为因变量，对预后不良组和预后良好组的年龄、高血压、糖尿病、低密度脂蛋白和同型半胱氨酸血清miR-142水平和NIHSS评分进行Logistics回归分析，结果显示，miR-142、低密度脂蛋白和NIHSS评分为脑梗死预后不良的危险因素。见表2。

表2 脑梗死患者预后不良危险因素Logistics回归分析

2.5 miR-142对脑梗死诊断和预后的评估价值 分别绘制miR-142应用于脑梗死诊断和预后不良预测的ROC曲线，结果显示，miR-142在脑梗死诊断的ROC曲线下面积为0.849，敏感性82.00%，特异性74.29%。miR-142在脑梗死预后预测的ROC曲线下面积为0.771，敏感性73.17%，特异性70.40%，而当联合低密度脂蛋白和NIHSS评分后，ROC曲线下面积为0.858，敏感性82.93%，特异性76.80%，见图3。

图3 miR-142在脑梗死诊断和预后评估中ROC曲线分析

3 讨论

脑梗死是脑卒中的常见类型之一，其中动脉粥样硬化型脑梗死占约60%，是人类致残和死亡的主要原因之一[3]。目前临床上脑梗死的诊断依据于客观的影像学数据及显著的临床特征，但预后因个体化差异仍局限于主观的临床经验[4]。miRNAs是真核生物中具有调控基因表达作用的一类内源性非编码RNA，可参与调节各种生理病理过程，甚至在疾病的早期诊断、治疗和预后评估中都发挥着重要作用[5]。既往大量研究显示，miR-142可参与调控炎症反应及免疫细胞功能，而卒中后炎症反应程度已被广泛认为是影响脑梗死预后的核心要素[6-7]。尽管诸多动物和细胞层面的证据表明miR-142在参与了脑缺血和再灌注的调控[8-9]，但miR-142在脑梗死患者中如何变化，能否作为脑梗死病情和预后评估的有效生物学标记物，目前尚未明确。在此基础上，本研究通过比对脑梗死患者与健康人群血清miR-142的表达水平，发现miR-142在AIS患者血清中表达升高，并且在不同预后分组中，亦发现了miR-142存在表达差异，高度提示了血清miR-142或可应用于早期评估脑梗死患者的预后。

影响脑梗死预后的因素众多，在本研究中，尽管一般资料的收集仍不全面，但脑梗死组与对照组间的差异因素及不同预后脑梗死患者间的差异因素均在既往研究中获报道[10-11]，而由于样本量和病例组成的差异，不同研究中呈现的结果也具有一定的差别。不仅如此，本研究在发现血清miR-142与脑梗死预后存在对应关系的基础上，分析了miR-142与NIHSS评分的相关性，高度提示了miR-142与神经功能缺损程度密切相关，可用于脑梗死早期的病情评估。随后跟进的Logistics回归对组间差异因素进行了进一步评估，结果显示血清miR-142、低密度脂蛋白和入院的NIHSS评分均为脑梗死不良预后的独立危险因素。结合既往文献报道，推测miR-142可能通过调控卒中后的炎症反应及免疫细胞功能从而影响了预后结局，这也需要动物和细胞实验进一步探索。此外，ROC曲线分析递呈的结果显示，miR-142在脑梗死的鉴别和预后结局的预测中均具有良好的应用价值，而在将低密度脂蛋白、入院时NIHSS评分和miR-142联合分析后，相应的ROC获得更好的曲线下面积、敏感性和特异性，值得临床推广和使用。

综上所述，血清miR-142在脑梗死患者血清中表达升高，可作为评估脑梗死病情和预后的良好外周血标记物。但本研究为小样本单中心研究，样本量较小，且仅关注了TOAST分型中的大动脉粥样硬化性脑梗死患者，相关研究仍待进一步完善。