子痫前期患者不规则趋化因子表达及其与血清炎症因子水平和妊娠结局的关系

陈思宇, 白 兰, 周 宇

(四川省成都市双流区第一人民医院 医学检验科, 四川 成都, 610200)

子痫前期(PE)可导致孕妇心脏、肾脏、肝脏等靶器官受损,对母胎健康造成巨大威胁,是导致不良妊娠结局发生风险增加的重要疾病之一[1]。目前,临床尚缺乏治疗PE的有效方式,故合理预测PE患者的妊娠结局,对不良妊娠结局高风险患者进行重点监测和针对性干预,将明显改善患者和胎儿的预后。建立高效的风险预测模型是评估PE患者妊娠结局的重要方法,但现有预测指标的整体预测价值有限[2], 因此还需要不断探索与PE发生、发展密切相关的生物标志物,从而为建立风险预测模型提供新的实验室指标。不规则趋化因子(FKN)是趋化因子CX3C亚家族成员,参与调节树突状细胞、T淋巴细胞、单核细胞的迁移和黏附[3]。相关研究[4]显示, FKN在原发性高血压患者血清中呈异常高表达。另有研究[5]发现, FKN在PE患者血清中的表达水平高于健康孕妇,且FKN高表达是PE患者心功能受损的危险因素之一。目前, FKN与PE患者妊娠结局关系的研究较少见, FKN能否作为评估PE患者妊娠结局的新型生物标志物尚不明确。本研究分析PE患者血清与胎盘组织中FKN表达情况,并探讨FKN与血清炎症因子和妊娠结局的关系,现报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2020年6月—2022年3月本院收治的PE患者152例作为研究对象。纳入标准: ① 符合第9版《妇产科学》中PE诊断标准者; ② 在本院分娩,各项临床资料完整者; ③ 单胎妊娠者。排除标准: ① 合并严重心、肝、肾等脏器疾病者; ② 因PE以外的其他原因提前终止妊娠者; ③ 合并感染性疾病、恶性肿瘤、免疫功能疾病者; ④ 人工辅助受孕者; ⑤ 合并妊娠糖尿病等妊娠期特有疾病者。本研究经本院医学伦理委员会审核批准(2020-015), 且患者或其家属均签署知情同意书。

1.2 分组方法

统计所有PE患者的妊娠结局。若患者存在下列情况的1种及以上则纳入不良妊娠结局组[6], 包括子痫、HELLP综合征、颅内疾病、心力衰竭、肺水肿、胎儿宫内窘迫、胎盘早剥、胎死宫内等; 若患者未出现母儿不良妊娠结局,则纳入正常妊娠结局组。

1.3 研究方法

抽取所有PE患者入院待产时的空腹静脉血5 mL, 使用低温离心机高速离心10 min(3 000转/min)后收集上层血清。采用购自武汉博士德生物有限公司的酶联免疫试剂盒检测血清FKN、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用克曼AU5800生化分析仪检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。

收集所有患者的胎盘组织,常规石蜡包埋、切片,胎盘组织中FKN表达情况采用免疫组织化学法进行检测。将组织切片置于60 ℃恒温烤箱进行融蜡处理,二甲苯浸泡5 min, 梯度酒精(100%、95%、75%)水化处理,各浸泡5 min。用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗切片3次, 3 min/次,再用枸橼酸盐缓冲液进行抗原修复,煮沸15 min, PBS冲洗3次, 3 min/次。使用山羊血清进行封闭,加入一抗(1∶200, 购于美国Abcam公司),将切片置于4 ℃环境下孵育过夜。PBS冲洗3次, 3 min/次,辣根酶标记免疫球蛋白G聚合物孵育20 min后进行DAB显色,显色完成后以苏木素复染30 s, 梯度酒精脱水、二甲苯透明处理,中性树胶封片。在镜下随机选取4个高倍视野,观察染色细胞比例和染色强度。染色细胞比例评分: >75%、>50%～75%、>25%～50%、5%～25%、<5%分别得4、3、2、1、0分。染色强度评分: 棕褐色、棕黄色、浅黄色、无明显染色分别得3、2、1、0分。每项评分的结果均取4个视野的均值,将染色细胞比例评分和染色强度评分的乘积作为最终免疫组化评分,若免疫组化评分≥4分则判定为阳性表达, <4分则判定为阴性表达。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 2组患者相关指标比较

2组患者的年龄、孕前体质量指数(BMI)、孕次、高血压家族史比较,差异无统计学意义(P>0.05), 不良妊娠结局组的舒张压、收缩压、胎盘组织FKN阳性率和血清TNF-α、血清hs-CRP、血清FKN水平均高于正常妊娠结局组,妊娠时间短于正常妊娠结局组,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1、图1。

表1 2组患者相关指标比较

2.2 PE患者血清FKN表达与其他指标的相关性分析

相关性分析显示, PE患者血清FKN表达与舒张压、收缩压、血清TNF-α、血清hs-CRP水平呈正相关(P<0.05), 与年龄、孕前BMI、孕次、妊娠时间无相关性(P>0.05), 见表2。

表2 PE患者血清FKN表达与其他指标的相关性分析

2.3 PE患者不良妊娠结局的危险因素分析

将2.1中差异有统计学意义的指标作为自变量,将PE患者是否发生不良妊娠结局作为因变量(发生不良妊娠结局=1, 未发生不良妊娠结局=0),纳入多因素Logistic回归模型。分析结果显示,血清TNF-α高表达、血清hs-CRP高表达、血清FKN高表达、胎盘组织FKN阳性均为PE患者不良妊娠结局的独立危险因素,妊娠时间长是PE患者妊娠结局的独立保护因素(P<0.05), 见表3。

表3 PE患者不良妊娠结局影响因素的多因素Logistic回归分析

2.4 各指标对PE患者不良妊娠结局的预测价值分析

ROC曲线显示,血清TNF-α、hs-CRP、FKN和胎盘组织FKN预测PE患者不良妊娠结局的曲线下面积分别为0.615(95%CI: 0.522～0.708)、0.681(95%CI: 0.595～0.767)、0.766(95%CI: 0.690～0.842)和0.702(95%CI: 0.619～0.785), 其中血清FKN和胎盘组织FKN的预测价值较高,曲线下面积均>0.7, 见表4、图2。

图2 各指标预测PE患者不良妊娠结局的ROC曲线

表4 各指标对PE患者不良妊娠结局的预测价值

3 讨 论

PE是以血压升高、蛋白尿等为主要临床症状的妊娠期特有疾病,其发病机制较为复杂,至今仍未完全明确[7]。“两阶段发病学说”认为, PE的发生与发展可分为2个重要阶段: 第1阶段,滋养细胞的侵袭、增殖能力受各类因素的影响明显降低,引起螺旋小动脉重铸障碍,进而出现胎盘血流灌注不足情况,导致大量胎盘因子被分泌,该阶段暂无明显临床症状[8-9]; 第2阶段,在分泌的胎盘因子作用下,机体出现氧化-抗氧化失衡和炎症反应,进而损伤血管内皮功能,出现一系列临床症状[10-11]。“两阶段发病学说”提示,炎症反应在PE发展过程中起着重要促进作用,相关基础研究[12-13]也发现, PE患者胎盘中存在明显的炎症反应,且经典的炎症信号通路核因子-κB也处于高度激活状态。

FKN基因定位于人染色体16q13片段,分子量为95 kD, 存在膜结合型和分泌型这2种分子形式,具有丰富的生物学功能,在恶性肿瘤、心脑血管疾病中均发挥着重要的调节作用[14]。相关研究[15-16]发现, PE患者血清和蜕膜组织中FKN水平高于健康孕妇,提示FKN在PE患者中呈异常高表达,可能参与疾病的发生与发展。本研究结果显示,不良妊娠结局组的血清FKN水平和胎盘组织FKN阳性率均高于正常妊娠结局组,且血清FKN高表达、胎盘组织FKN阳性均为PE患者不良妊娠结局的独立危险因素,表明FKN表达情况与PE患者妊娠结局密切相关。目前, FKN影响PE患者妊娠结局的具体作用机制尚不清楚,可能与其调节炎症反应有关。FKN又称CX3CL1, 其与特异性受体CX3CR1结合后可对白细胞产生趋化和黏附作用,进而促进炎症反应[17]; 膜结合型FKN具有黏蛋白样杆状结构,该结构能进一步紧密黏附聚集的白细胞,可进一步放大白细胞聚集引起的炎症反应[18]。NONN O等[19]研究结果显示,胎盘中的FKN可有效促进人单核细胞黏附,增强CD16+单核细胞亚群的促炎状态。本研究结果显示,不良妊娠结局组的血清炎症因子TNF-α、hs-CRP水平均显著高于正常妊娠结局组,且PE患者血清FKN表达与血清TNF-α、hs-CRP水平均呈正相关,提示FKN可能通过调节炎症反应而参与PE疾病进展。炎症反应可促进氧化应激反应,两者共同介导血管内皮功能损伤,促进PE进展,故FKN可能通过促进炎症反应而损伤PE患者的血管内皮功能,进而加重患者病情,影响妊娠结局。陈其敬等[20]研究结果显示,原发性高血压患者血清FKN高表达与血管内皮功能受损密切相关,验证了FKN对血管内皮功能存在不利影响。本研究ROC曲线显示,血清FKN、胎盘组织FKN预测PE患者不良妊娠结局的曲线下面积分别为0.766(95%CI: 0.690～0.842)、0.702(95%CI: 0.619～0.785), 曲线下面积均大于0.7, 具有较高的预测价值,提示FKN有望成为评估PE患者妊娠结局的新型标志物。值得注意的是,除了炎症因子和FKN外,妊娠时间也与不良妊娠结局存在密切关联,且妊娠时间长是PE患者不良妊娠结局的独立保护因素,提示临床医师在条件允许的情况下应尽量延长PE患者的妊娠时间,足月时再考虑终止妊娠。

综上所述, PE患者血清FKN和胎盘组织FKN均呈高表达,且其表达水平与血清炎症因子水平和不良妊娠风险有关,两者对PE患者不良妊娠结局的预测价值均较高。FKN有望成为PE的新型生物标志物,但目前相关研究尚较少, FKN调控PE发生与发展的具体作用机制还需开展更多的基础研究加以探讨。