不同贮藏温度对雪胆块茎褐变相关酶及底物的影响

陈庚 李思琪 高青青 李霞 段柯兆 张广辉 杨生超 赵艳

DOI：10.3969/j.issn.2095-1191.2023.06.010

摘要：【目的】研究贮藏温度对雪胆块茎褐变相关酶、底物及有效成分的影响，为控制褐变、提高雪膽块茎中药材的稳定性提供理论支持。【方法】将鲜切雪胆块茎放置在3个贮藏温度（-20、4和25 ℃）下，分别于贮藏第0、2、4、8和10 d时取样，测定其褐变度、过氧化物酶（POD）活性及丙二醛（MDA）、总酚、雪胆甲素和雪胆乙素含量等指标，并进行褐变度与其他测定指标间的相关分析。【结果】随着贮藏时间的延长，鲜切雪胆块茎褐变度均上升，贮藏至第10 d时，25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎褐变度较-20和4 ℃显著升高（P<0.05，下同）；3个贮藏温度下的鲜切雪胆块茎POD活性均呈先上升后下降的变化趋势，整个贮藏期间25 ℃下的POD活性始终显著高于-20和4 ℃；贮藏温度越高，鲜切雪胆块茎的MDA含量越大，贮藏4～10 d，25 ℃的MDA含量显著高于-20和4 ℃，但-20与4 ℃的MDA含量间无显著差异（P>0.05，下同）；贮藏第4 d后，25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎总酚含量也始终显著高于-20和4 ℃。25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎中雪胆甲素含量在第4 d后急剧上升，在第6 d达最大值（1.1410 mg/g），显著高于-20和4 ℃，而雪胆乙素含量在贮藏2 d后开始急剧增加，至第8 d时达0.01143 mg/g，也显著高于-20和4 ℃。相关分析结果表明，3个贮藏温度下的褐变度均与贮藏时间呈极显著正相关（P<0.01，下同），与总酚、雪胆甲素和雪胆乙素含量均无显著相关性；-20和4 ℃的褐变度与POD活性分别呈极显著和显著负相关，-25 ℃的褐变度与POD活性无显著相关性；-20 ℃的褐变度与MDA含量呈显著负相关。【结论】低温（-20和4 ℃）下贮藏，可通过抑制褐变关键酶POD活性，或减少褐变底物酚类物质的生成而有效控制鲜切雪胆块茎的褐变，以-20 ℃的控制褐变效果更佳。

关键词：鲜切雪胆；块茎；褐变；过氧化物酶；总酚；贮藏温度

中图分类号：S567.909.3                      文献标志码：A 文章编号：2095-1191（2023）06-1689-08

Effects of different storage temperatures on browning-related

enzymes and substrates of fresh-cut tubers of Hemsleya chinensis

CHEN Geng1，2，3， LI Si-qi1， GAO Qing-qing1，2，3， LI Xia1，2，3， DUAN Ke-zhao4，

ZHANG Guang-hui1，2，3， YANG Sheng-chao1，2，3， ZHAO Yan1，2，3*

（1National-local Joint Engineering Research Center on Gemplasm Innovation & Utilization of Chinese Medicinal Materials in Southwest China，Yunnan Agricultural University，Kunming，Yunnan  650201，China； 2The Key Laboratory of

Medicinal Plant Biology of Yunnan Province，Yunnan Agricultural University，Kunming，Yunnan  650201，China；

3College of Agronomy and Biotechnology，Yunnan Agricultural University，Kunming，Yunnan  650201，China；

4Yunnan Kezhao Biological Technology Limited Company，Kunming，Yunnan  650200，China）

Abstract：【Objective】To investigate the factors that affected the browning of tuber of Hemsleya chinensis under sto-rage temperature，and to study the mechanism and change law of the browning process，to provide theoretical support for controlling browning and improving the stability of tuber of H. chinensis. 【Method】The fresh-cut tubers of H. chinensis were placed at three different storage temperatures（-20，4 and 25 ℃），and samples were taken on the 0，2nd，4th，8th，and 10th d of storage respectively，to study the degree of browning，changes in peroxidase（POD） activity，malondialdehyde （MDA），total polyphenols， cucurbitacin IIa and cucurbitacin IIb contents，and the correlation analysis between the degree of browning and measured indexes was carried out. 【Result】With the prolongation of storage time，the browning degree of fresh-cut tubers of H. chinensis increased. At the 10th d， the browning degree of fresh-cut tuber of H.chinensis stored at 25 ℃ was significantly higher than that at -20 and 4 ℃（P<0.05， the same below）. At this time，the POD activities of H.chinensis tubers at three temperatures showed a trend of first increasing and then decreasing，and the POD activities du-ring the whole storage period were significantly higher than those under -20 and 4 ℃. The higher the storage temperature， the greater the MDA content of fresh-cut tubers of H. chinensis， stored at 4-10 d， the MDA content at 25 ℃ was significantly higher than -20 and 4 ℃， but there was no significant difference in MDA content between -20 and 4 ℃ （P>0.05， the same below）； the total phenolic content of resh-cut tubers of H. chinensis stored at 25 ℃ after 4 d was always significantly higher than-20 and 4 ℃. At 25 ℃， the content of cucurbitacin IIa in fresh-cut tubers of H. chinensis increased sharply after 4 d and reached the maximum value on day 6 （1.1410 mg/g）， significantly higher than at -20 and 4 ℃， the content of cucurbitacin IIb began to increase sharply after 2 d of storage， and on day 8， the content of cucurbitacin IIb reached 0.01143 mg/g， which was significantly higher than at -20 and 4 ℃. The results of correlation analysis showed that the BD at the three storage temperatures had an extremely significant positive correlation with the storage period （P<0.01， the same below），but no significant correlation with total polyphenols，  cucurbitacin IIa and cucurbitacin IIb contents. BD had extremely significant and significant correlation with POD activity at -20 and 4 ℃ respectively， BD at -25 ℃ had no significant correlation with POD activity， BD at -20 ℃ had significant negative correlation with MDA content. 【Conclusion】Storage at low temperatures （-20 and 4 ℃） can inhibit the activity of POD， a key enzyme in browning， or reduce the production of browning substrate phenolic substances to effectively control the browning of fresh-cut tubers of H. chinensis. The browning control effect is better at -20 ℃.

Key words： fresh-cut Hemsleya chinensis； tuber； browning； peroxidas；total phenolic； storage temperature

Foundation items： National Natural Science Foundation of China（81960691）；Yunnan Major Science and Technology Project（2018ZF011）； Independent Research Project of Yunnan Characteristic Plant Extraction Laboratory （2022YK ZY001）

0 引言

【研究意义】褐变是药材和果蔬食品加工中普遍存在的一种变色现象。在新鲜药材和果蔬食品干燥加工的大规模生产中，受机械损伤或氧气、温度等因素影响，产品极易发生褐变并严重影响其外观、营养价值及市场价格（徐菲等，2011）。一般研究认为 0～5 ℃适宜贮藏鲜切果蔬而不发生冷害，但更低温度贮藏鲜切中药材后褐变度和内部理化性质的变化规律尚不清楚。雪胆（Hemsleya chinensis）是一种具有膨胀大块茎的多年生攀援草本植物，集中分布于我国西南地区，少量分布于中南地区（刘钰莹等，2017），具有清热解毒、消炎抗菌等功效（李莹等，2015；曾祥飞等，2016）。雪胆药用价值最高的部位是附着在根部半裸露于地表的块茎，初加工时需对其进行剥皮、切片、切碎等，易导致其块茎表皮细胞破裂，从而造成细胞组织脱水和微生物入侵，出现块茎腐烂、褐变等现象，严重影响雪胆药材的产量与品质。因此，研究贮藏条件对鲜切雪胆块茎褐变及生理生化特性的影响，对保证其药材的产量与品质具有重要意义。【前人研究进展】低温贮藏可直接抑制酶的活力，减缓褐变反应的速度和强度，是抑制果蔬褐变最直接有效的方法，且简单易行、安全性高，国内外普遍将其作为鲜切果蔬保鲜的基本手段（Xu，2005；刘芳等，2015）。有研究表明，在药材贮藏过程中以酶促反应褐变为主，多酚氧化酶（PPO）和过氧化氢酶（POD）在酶促褐变中是关键因素，引起药材褐变或加剧褐变；而低温条件下贮藏能抑制PPO和POD活性，从而减缓褐变发生速度（孙国东等，2017；朱玉芸，2018；李东辉等，2022）。王静等（2008）研究表明1～5 ℃冷藏可通过抑制PPO和POD活性延缓鲜切牛蒡的褐变，延缓产品衰老，提高产品质量。王彦博（2009）、赵梅（2012）研究发现0～4 ℃是鲜切山药适宜的贮藏温度，能较好地保持鲜切山药的品质。张福平等（2014）、李蓉等（2022）发现低温贮藏条件可有效預防新鲜余甘子果实的褐变，且有效延缓余甘子果实感官及品质的下降，延长贮藏期，以5 ℃贮藏保鲜效果最佳。谢荣娟等（2017）研究北青龙衣由鲜品到干品的贮藏期间出现失水、颜色变深等褐变现象的原因，为控制褐变、提高药材的稳定性提供依据。朱玉芸等（2018）研究发现酶促褐变是导致花类药材品质裂变的主要原因之一，其中POD是引起新鲜菊花酶促褐变的一类氧化还原酶。【本研究切入点】关于雪胆的研究，近年来主要集中在驯化栽培（杨秋容，2014）、块茎的化学成分生物活性（Wang et al.，2018）和化学成分含量测定（杨程等，2019；陈庚等，2020）及内生真菌分离鉴定（赖清玉等，2019）等方面，而针对雪胆块茎采收后不同贮藏温度条件下褐变相关酶、底物及有效成分变化的研究鲜见报道。【拟解决的关键问题】分析鲜切雪胆块茎在不同贮藏温度下褐变相关酶、底物及有效成分的变化规律，探索出减弱鲜切雪胆块茎褐变的有效贮藏方法，为提升雪胆药材的品质提供参考依据，也为控制富含酚类的其他中药材酶促褐变提供思路。

1 材料与方法

1. 1 试验材料

雪胆植株的块茎采自昆明市云南柯兆生物科技有限公司的雪胆资源圃，经云南农业大学杨生超教授鉴定为雪胆。雪胆甲素和雪胆乙素标准品购自四川省维克奇生物科技有限公司，生产批号分别为wkq16072205和wkq16072904，纯度大于98%；乙腈为色谱级，水为纯净水，其他试剂均为分析纯。主要仪器设备：Agilent1260系列高效液相色谱仪、Agilent Chem Station工作站（安捷伦公司）；UV-2450紫外分光光度计（日本岛津公司）。

1. 2 试验方法

1. 2. 1 试样处理 试验用具（刀具、处理台等）用75%乙醇进行消毒处理。用200 μmol/L次氯酸钠清洗、浸泡雪胆2 min，擦干后快速削皮，将其切成相同厚度的雪胆块茎切片，然后分别置于-20、4和25 ℃下贮藏，每2 d取1次切片，立即用液氮冷冻并打磨成粉，测定褐变度、POD活性等指标，每个指标重复测定3次。

1. 2. 2 褐变度测定 参考谢荣娟等（2017）的方法，修改测定。取1支离心管，加入2 g雪胆样品和10.0 mL 80%乙醇，充分混匀，放置于避光处30 min，放置期间每隔5 min搅拌1次；然后6000 r/min下离心，使上清液完全澄清，不含任何杂质，用紫外分光光度计在410 nm波长处测定其吸光值，测定3次取平均值，用80%乙醇作空白对照。

BD=A410×V/M

式中，BD为褐变度，A410为410 nm吸光值，V为提取液体积（mL），M为样品质量（g）。

1. 2. 3 POD活性测定 取1支试管，先加入0.1 mL 0.75%过氧化氢溶液，再加入2.0 mL 0.2 mol/L乙酸—乙酸钠缓冲液（pH 5.5）和1.0 mL 0.05 mol/L愈创木酚溶液，最后加入0.05 mL离心得到的上清液，快速充分混匀，用紫外分光光度计在470 nm波长下每隔15 s记录1次数值。

POD活性（μg/min）=A470×Vt/W×Vs×0.01×t

式中，A470为470 nm吸光值，Vt为提取酶液总体积（mL），Vs为测定时所取酶液体积（mL），W为样品重量（g），t为反应时间。

1. 2. 4 丙二醛（MDA）含量测定 取1支离心管，加入1 g雪胆样品，再加入5.0 mL 10%三氯乙酸（TCA）充分混匀，在4 ℃、1000 r/min的条件下离心20 min，之后收集上清液备用。

取1支离心管，加入上清液2.0 mL和0.67% 2-硫代巴比妥酸（TBA）2.0 mL；另取1支离心管，加入10% TCA溶液2.0 mL和0.67% TBA 2.0 mL作空白对照，将2支离心管内的溶液充分混匀，水浴20 min，冷却后离心，利用紫外分光光度计测量上清液分别在450、532和600 nm波长处的吸光值，测定3次，取平均值。

消除误差：C（μmol/L）=6.45×（A532-A600）-0.56×A450

MDA含量（μmol/g）=C×V/Vs×W×1000

式中，C为反应混合液中MDA含量（μmol/L），A450、A532和A600分别为450、532和600 nm吸光值，V为样品提取液总体积（mL），Vs为测定时所取样品提取液体积（mL），W为样品重量（g）。

1. 2. 5 总酚含量测定 称取2 g雪胆样品，加入32.0 mL 50%乙醇，充分混匀，进行59 min冷凝回流提取，提取结束后趁热过滤，冷却后將全部上清液加入100 mL容量瓶中，用50%乙醇定容，所得即为雪胆多酚提取液，保留备用。雪胆多酚提取、没食子酸标准曲线制作和雪胆多酚提取率计算参考段思宇等（2021）的方法进行。

1. 2. 6 高效液相色谱（HPLC）测定雪胆素 称取1 g雪胆样品，加入正己烷和乙酸乙酯混合物（混合比例1∶4），振荡使其充分混匀，在37 ℃下放置30 min，然后超声30 min，离心至上清液澄清无杂质，取上清液备用。向沉淀物中加入1.0 mL甲醇，超声离心提取雪胆素。取上清液于浸提化合物样品瓶中，55 ℃水浴锅预热并用旋蒸仪浓缩后甲醇定容，最后用高效液相色谱仪测定化合物含量（陈庚等，2020）。

液相色谱条件：色谱柱为Phenomenex Kinetex C18 analytical column（4.6 mm×100 mm，2.6 μm），测定雪胆素流动相为0.2%磷酸水溶液（A）—乙腈（B），梯度洗脱：0～15 min，25%～33% B；15～20 min，33%～40% B；20～24 min，40%～60% B；24～28 min，60%～90% B。检测波长212 nm，流速1.0 mL/min，柱温30 ℃，进样体积10 μL。

1. 3 统计分析

采用Excel 2010和SPSS 20.0对试验数据进行整理统计和分析，以GraphPad Prism 8制图。

2 结果与分析

2. 1 鲜切雪胆块茎贮藏期间褐变度的变化

从图1可明显看出鲜切雪胆块茎在3个贮藏温度下的褐变情况，在25 ℃下贮藏的雪胆块茎褐变颜色最深，至第8 d已全部褐化，在4 ℃下贮藏的雪胆块茎褐变则相对缓慢，而在-20 ℃下贮藏的雪胆块茎至第8 d才出现轻微的褐化。

由图2可知，3个贮藏温度（-20、4和25 ℃）下鲜切雪胆块茎的褐变度均呈持续上升趋势，贮藏至第10 d，褐变度分别为4.58、7.96和10.46。表明褐变度与贮藏温度呈正相关，在不同贮藏温度下的鲜切雪胆块茎均会发生褐变，25 ℃下贮藏鲜切雪胆块茎的褐变程度最高，显著高于-20和4 ℃（P<0.05，下同）。

2. 2 鲜切雪胆块茎贮藏期间POD活性的变化

如图3所示，3个贮藏温度下的鲜切雪胆块茎POD活性均呈先上升后下降的变化趋势。25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎POD活性在第2 d快速升高，第4 d达最大值，整个贮藏期间POD活性均显著高于-20和4 ℃；在-20和4 ℃下贮藏时，鲜切雪胆块茎POD活性在整个贮藏期间变化较小，均在第2 d达最大值，4 ℃的POD活性显著高于-20 ℃。

2. 3 鲜切雪胆块茎贮藏期间MDA含量的变化

MDA是膜脂过氧化的最终产物，其含量反映植物的受损害程度。如图4所示，鲜切雪胆块茎的MDA含量在3个贮藏温度下均呈先升高后降低再升高的变化趋势。在-20和4 ℃下贮藏时，鲜切雪胆块茎的MDA含量在第2 d达峰值后逐渐下降，第4 d降至最低值；然而，25 ℃下贮藏时，鲜切雪胆块茎的MDA含量在第4 d达最大值，且显著高于-20和4 ℃。出现这种现象可能是由于削皮、切片等加工操作破坏雪胆块茎组织细胞，导致MDA含量快速升高，0～4 d内达峰值；25 ℃下贮藏时，MDA含量逐渐降低趋于正常，但由于贮藏时间的延长，雪胆块茎中MDA含量又开始升高。表明贮藏温度越高，膜脂过氧化越强，MDA含量越高，越不利于雪胆块茎的贮藏。贮藏4～10 d，25 ℃下的雪胆块茎MDA含量显著高于 -20和4 ℃，而后两者间无显著差异（P>0.05，下同）。

2. 4 鲜切雪胆块茎贮藏期间总酚含量的变化

没食子酸标准曲线的回归方程及线性关系为Y=63.457X-0.0005，相关系数（r）为0.9998。植物褐变的底物是酚类物质，雪胆块茎中酚类物质含量越高，其褐变度就越大。如图5所示，鲜切雪胆块茎的总酚含量在3个贮藏温度下均呈先升高后降低的变化趋势，均在第6 d达最大值且增速极快，25 ℃下的含量变化最大。在整个贮藏期间，25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎总酚含量始终高于-20和4 ℃，该变化与鲜切雪胆块茎褐变度基本一致，由此可知，总酚含量直接影响雪胆块茎的褐变程度。

2. 5 鲜切雪胆块茎贮藏期间雪胆素含量的变化

HPLC测定对照品及样品的结果见图6。分别使用雪胆甲素标准曲线Y=6804.5351X+18.9056（r=0.9999）和雪胆乙素标准曲线Y=2360.1633X-3.5358（r=0.9998）计算雪胆甲素和雪胆乙素含量，其测定结果见图7和图8。

如图7所示，25 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎雪胆甲素含量在第4 d后急剧上升，在第6 d达最大值（1.1410 mg/g），显著高于-20和4 ℃，第6 d后呈快速下降趋势。相比于25 ℃，-20和4 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎雪胆甲素含量呈波动式缓慢上升趋势，第6 d时分别升至 0.4346和0.1120 mg/g，二者间存在显著差异，第6 d后也呈下降趋势，贮藏至第10 d时均低于初始含量。

如图8所示，鲜切雪胆块茎在贮藏期间雪胆乙素含量极少，3个贮藏温度均有出现检测不到含量的情况，尤其是在4 ℃下贮藏的鲜切雪胆块茎未检测到雪胆乙素。-20 ℃下，贮藏前期鲜切雪胆块茎的雪胆乙素含量呈先上升后下降的变化趋势，但整体呈下降趋势，直至未检测到雪胆乙素含量。25 ℃下，鲜切雪胆块茎的雪胆乙素含量在贮藏2 d后开始急剧增加，至第8 d时雪胆乙素含量达最大值（0.01143 mg/g），显著高于-20和4 ℃，之后快速下降，贮藏至第10 d时未检测到雪胆乙素含量。可见3个贮藏温度条件下鲜切雪胆块茎的雪胆乙素含量变化大。

2. 6 鲜切雪胆块茎在不同贮藏温度下褐变度与各指标间的相关分析结果

以3个贮藏温度条件下的鲜切雪胆块茎褐变度与各测定指标进行相关分析，结果（表1）显示，3个贮藏温度的鲜切雪胆块茎褐变度均与贮藏时间呈极显著正相关（P<0.01，下同），与总酚、雪胆甲素和雪胆乙素含量均无显著相关性；-20和4 ℃的褐变度与POD活性分别呈极显著和显著负相关，-25 ℃的褐变度与POD活性无显著相关性；-20 ℃贮藏条件下，褐变度与MDA含量呈显著负相关，4和25 ℃贮藏条件下，褐变度与MDA含量无显著相关性。由此可知，鲜切雪胆块茎在贮藏过程中，其褐变与POD反应系统和酚类物质密切相关，将鲜切雪胆块茎低温（4和 -20 ℃）贮藏后，其褐变度与POD活性的相关性高于常温（25 ℃）贮藏。

3 讨论

前人研究发现褐变反应不仅存在于果蔬中，也存在于许多富含多酚类物质的中药、或作为中药使用的植物药中，在药材饮片中则可能会造成成分变化、药效改变（徐菲等，2011；谢荣娟等，2017）。本研究以雪胆块茎在不同贮藏温度下褐变度和相关酶活性变化来推测雪胆块茎此类植物药的褐变机制，并结合褐变过程中成分变化结果，以期得出应抑制褐变或促进褐变，从而提高雪胆药材质量。

在本研究中，鲜切雪胆块茎在不同贮藏温度条件下，随着贮藏时间的延长，褐变度均明显上升，且褐变度与贮藏时间呈极显著正相关，其中25 ℃下贮藏至第10 d时褐变严重，说明贮藏温度高会加快褐变速度，与鲜切牛蒡、鲜切山药、北青龙衣、亳菊等药材随贮藏时间延长其褐变度均上升的研究结果（王静等，2008；赵梅，2012；谢荣娟等，2017；朱玉芸等，2018）一致。雪胆药用部位为地表的膨大块茎，含有丰富的酚类物质（段思宇等，2021），对其进行剥皮、切片、切碎等初加工时，由于切割导致雪胆组织细胞严重受损，细胞膜的稳定性降低，使原来分布在细胞内的酚类物质流出，当与外界氧气接触后，POD作为植物体内重要的抗氧化酶，酚类物质可被POD氧化形成醌类物质，聚集后呈褐色发生褐变。本研究结果表明，3种贮藏温度下，POD活性在0～2 d内均急剧上升，推测雪胆块茎受切割损伤后，破坏了细胞膜系统的完整性，导致细胞壁降解，更容易与酚类化合物底物结合，使得POD活性增强。由于酶类物质易受温度影响，低温会抑制POD活性；在-20和4 ℃的低温环境下POD活性变化较小，但在25 ℃贮藏温度下鲜切雪胆块茎的POD活性有明显变化。随着贮藏温度的上升，POD活性与褐变程度呈明显的正相关，是导致鲜切雪胆块茎褐变的关键因素。其可能的机制是由于酶类物质易受温度影响，低温钝化POD活性，一定程度上导致褐变底物的合成减少、氧化速度降低，进一步延缓鲜切雪胆的褐变发生。由此可知，是由于POD所催化的雪胆多酚类物质氧化反应引起褐变，与亳菊中POD是引起新鲜菊花瓣酶促褐变的主要因素一致（朱玉芸等，2018）。

本研究结果表明，在整个贮藏期间，3个温度下的POD活性变化与MDA含量呈正相关，即POD活性越大，MDA含量越高。多酚类物质是褐變的底物，底物积累增多，POD活性升高，氧化形成的醌类物质越来越多，导致雪胆褐变更加严重。因此，减少褐变底物酚类物质的生成以防止积累，抑制褐变相关酶POD活性，可有效阻止雪胆块茎的褐变，MDA含量也会相应减少。谢荣娟等（2017）研究发现鲜品北青龙衣在低温贮藏期间，膜系统损伤会破坏自由基代谢平衡，使超氧化物歧化酶（SOD）和POD代谢作用失调，H2O2积累，导电率增大，MDA含量增加，导致褐变发生。本研究中，低温（4和-20 ℃）贮藏下的褐变度、POD活性、MDA含量及总酚含量较低，不仅可有效减缓雪胆块茎组织细胞的衰老，降低POD活性，减缓酚类物质的生成，还可使雪胆块茎细胞的生长、繁殖和代谢减慢，降低雪胆块茎褐变度。

雪胆素（雪胆甲素和雪胆乙素）是重要的中药原料药，是生产中成药雪胆素片（中药保护品种）和雪胆素胶囊的原料药。本研究探索不同贮藏温度下雪胆块茎中有效成分的动态变化规律，发现25 ℃贮藏期间，雪胆块茎中褐变和相关酶活性变化可能会导致雪胆甲素转化为雪胆乙素或促进雪胆乙素的积累。本研究对比雪胆块茎在-20和4 ℃条件下的贮藏效果，发现-20 ℃贮藏能明显延缓鲜切雪胆块茎的褐变度、POD活性、MDA含量及总酚含量的上升，且在-20 ℃下贮藏鲜切雪胆块茎的有效成分（雪胆甲素和雪胆乙素）含量更高。在25 ℃贮藏期间，雪胆甲素含量在第6 d最高，雪胆乙素含量在第8 d最高，对应的鲜切雪胆块茎总酚含量在第6 d达最大值且增速极快，同时，褐变度也在快速增大。在不同温度贮藏期间，鲜切雪胆块茎褐变及相关酶和底物均剧烈变化会引起很多酶促反应和非酶促反应，可能导致雪胆药材中有效成分雪胆素相互转化和降解。-20 ℃的低温储存更有利于减缓褐变，且最大程度地保留雪胆块茎中的有效成分雪胆素，保持药材的质量和价值。

4 結论

随着贮藏时间的延长，鲜切块茎褐变严重；POD活性可反映褐变程度。低温（-20和4 ℃）下贮藏，可通过抑制褐变关键酶POD活性，或减少褐变底物酚类物质的生成而有效控制鲜切雪胆块茎的褐变，以-20 ℃的控制褐变效果更佳。

参考文献：

陈庚，卢迎春，赵艳，段绍凤，段柯兆，张广辉，杨生超. 2020. 雪胆属植物中雪胆素和齐墩果酸的含量测定［J］. 中药材，43（5）：1160-1164. ［Chen G，Lu Y C，Zhao Y，Duan S F，Duan K Z，Zhang G H，Yang S C. 2020. Analyses of the contents of hemslecin and oleanic acid in plants of Hemsleya Cogn［J］. Journal of Chinese Medicinal Mate-rials，43（5）：1160-1164.］ doi：10.13863/j.issn1001-4454. 2020.05.023.

段思宇，陈庚，高青青，郭兆宽，段柯兆，张广辉，杨生超，赵艳. 2021. 雪胆多酚的稳定性及其对α-淀粉酶的抑制作用［J］. 江苏农业科学，49（9）：167-171. ［Duan S Y，Chen G，Gao Q Q，Guo Z K，Duan K Z，Zhang G H，Yang S C，Zhao Y. 2021. Stability of Hemsleya chinensis polyphenols and their inhibitory effect on α-amylase［J］. Jiangsu Agricultural Sciences，49（9）：167-171.］ doi：10.15889/j.issn.1002-1302.2021.09.030.

赖清玉，赵明富，保颖，李瑞洁，杨林毅，文国松. 2019. 雪胆内生真菌的分离与鉴定研究［J］. 中药材，42（8）：1771-1776. ［Lai Q Y，Zhao M F，Bao Y，Li R J，Yang L Y，Wen G S. 2019. Isolation and identification of endophytic fungi from Hemsleya chinensis［J］. Journal of Chinese Me-dicinal Materials，42（8）：1771-1776.］ doi：10.13863/j.issn 1001-4454.2019.08.011.

李东辉，吴红伟，杨新荣，李国峰，李咸慰，宋沁洁，李阳，李越峰. 2022. 鲜大黄加工过程中褐变机制研究［J］. 时珍国医国药，33（5）：1127-1131. ［Li D H，Wu H W，Yang X R，Li G F，Li X W，Song Q J，Li Y，Li Y F. 2022. Study on the browning mechanism of fresh rhubarb during processing［J］. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，33（5）：1127-1131.］

李蓉，龙小妹，陈平，范源，朱培芳. 2022. 5 ℃贮藏条件下新鲜余甘子果实褐变相关指标研究［J］. 中国药业，31（12）：72-76. ［Li R，Long X M，Chen P，Fan Y，Zhu P F. 2022. Browning indexes of fresh-picked phyllanthi fructus under storage conditions at 5 ℃［J］. China Pharmaceuticals，31（12）：72-76.］ doi：10.3969/j.issn.1006-4931. 2022.12.017.

李莹，徐晓婷，郑重飞，李玲，姚庆强. 2015. 雪胆属植物的化学成分及生物活性研究进展［J］. 中草药，46（15）：128-132. ［Li Y，Xu X T，Zheng C F，Li L，Yao Q Q. 2015. Research progress on chemical constituents and biological activities of plants from Hemsleya［J］. Chinese Traditional and Herbal Drugs，46（15）：128-132.］ doi：10.7501/j.issn.0253-2670.2015.18.023.

刘芳，赵金红，朱明慧，甘芝霖，倪元颖. 2015. 多酚氧化酶结构及褐变机理研究进展［J］. 食品研究与开发，36（6）：113-119. ［Liu F，Zhao J H，Zhu M H，Gan Z L，Ni Y Y. 2015. Advances in research of the structure and browning mechanism of polyphenol oxidase［J］. Food Research and Development，36（6）：113-119.］ doi：10.3969/j.issn.1005-6521.2015.06.032.

刘钰莹，马越，赵晓燕，赵春燕，张超. 2017. 植物资源中葫芦素类化合物的分布［J］. 农产品加工，（10）：75-78. ［Liu Y Y，Ma Y，Zhao X Y，Zhao C Y，Zhang C. 2017. Distribution of cucurbitacin family in plant［J］. Farm Products Processing，（10）：75-78.］ doi：10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2017.05.050.

孙国东，霍金海，谢荣娟，王伟明. 2017. 基于UPLC-Q-TOF/MS技术的北青龙衣褐变过程中成分动态变化分析［J］. 中国中药杂志，42（16）：3112-3120. ［Sun G D，Huo J H，Xie R J，Wang W M. 2017. Dynamic variation of components in exocarp of Juglans mandshurica with browning based on UPLC-Q-TOF/MS［J］. Chinese Journal of Chinese Materia Medica，42（16）：3112-3120.］ doi：10.19540/j.cnki.cjcmm.20170614.003.

王静，徐为民，诸永志，王道营，汪志君. 2008. 贮藏温度对鲜切牛蒡褐变的影响［J］. 江苏农业学报，24（4）：492-496.［Wang J，Xu W M，Zhu Y Z，Wang D Y，Wang Z J. 2008. Effects of storage temperature on browning of fresh-cut burdock （Arctium lappa L.）［J］. Jiangsu Journal of Agricultural Sciences，24（4）：492-496.］ doi：10.3969/j.issn.1000-4440.2008.04.022.

王彦博. 2009. 低温及套袋处理对山药保鲜效果的研究［J］. 吉林中医药，29（10）：886-887. ［Wang Y B. 2009. Research on fresh-keeping effect for Chinese yam in low temperature and mantle bag［J］. Jilin Journal of Traditio-nal Chinese Medicine，29（10）：886-887.］ doi：10.3969/j.issn.1003-5699.2009.10.035.

谢荣娟，霍金海，王伟明. 2017. 北青龙衣褐变机制的研究［J］. 中国农学通报，33（12）：129-136. ［Xie R J，Huo J H，Wang W M. 2017. Browning mechanism of North Qinglongyi［J］. Chinese Agricultural Science Bulletin，33（12）：129-136.］

徐菲，李顺祥，周晋，曹亮，黄丹，董志程. 2011. 药食果蔬褐变机制及其干燥工艺研究现状［J］. 湖南中医药大学学报，31（11）：79-81. ［Xu F，Li S X，Zhou J，Cao L，Huang D，Dong Z C. 2011. Study on browning mechanism and drying controltechnology of medicines and medicinal foods［J］. Journal of Hunan University of Chinese Medicine，31（11）：79-81.］ doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2011. 11.025.079.03.

杨程，姜媛媛，吴一超，张利，王晓丽. 2019. HPLC同时测定雪胆属植物中3种活性成分的含量［J］. 基因组学与应用生物学，38（7）：3194-3199. ［Yang C，Jiang Y Y，Wu Y C，Zhang L，Wang X L. 2019. Simultaneous determination of three active ingredients in Hemsleya by HPLC［J］. Genomics and Applied Biology，38（7）：3194-3199.］ doi：10.13417/j.gab.038.003194.

杨秋容. 2014. 雪胆的驯化栽培与开发利用研究［J］. 亚太传统医药，10（7）：28-29. ［Yang Q R. 2014. The domestication，cultivation and exploitation of Hemsleya chinensis［J］. Asia-Pacific Traditional Medicine，10（7）：28-29.］

曾祥飞，张洪武，李国栋，郭蔚文，钱子刚，杨耀文. 2016. 云南雪胆属植物药用资源的初步研究［J］. 中药材，39（5）：996-1001. ［Zeng X F，Zhang H W，Li G D，Guo W W，Qian Z G，Yang Y W. 2016. A preliminary study on the medicinal resources of Hemsleya in Yunnan［J］. Journal of Chinese Medicinal Materials，39（5）：996-1001.］ doi：10.13863/j.issn1001-4454.2016.05.011.

張福平，王惠敏，郑道序，詹潮安，林文欢. 2014. 温度对余甘子采后贮藏期间感官及营养品质的影响［J］. 南方农业学报，45（7）：1248-1252. ［Zhang F P，Wang H M，Zheng D X，Zhan C A，Lin W H. 2014. Effects of storage temperature on sensory and nutritional quality of Phyllanthus emblica fruit during storage［J］. Journal of Southern Agriculture，45（7）：1248-1252.］doi：10.3969/j：issn.2095-1191.2014.7.1248.

赵梅. 2012. 不同贮藏温度对鲜切山药品质的影响［J］. 中国农学通报，28（36）：287-289. ［Zhao M. 2012. Effects of different storage temperatures on quality of fresh-cut yam［J］. Chinese Agricultural Science Bulletin，28（36）：287-289.］ doi：10.3969/j.issn.1000-6850.2012.36.051.

朱玉芸，吕新林，李祥溦，张东，董利华，朱晶晶，王智民，张金振. 2018. 亳菊POD酶的酶学特性研究［J］. 中国中药杂志，43（8）：1596-1601. ［Zhu Y Y，Lü X L，Li X W，Zhang D，Dong L H，Zhu J J，Wang Z M，Zhang J Z. 2018. Enzymatic characteristics of peroxidase from Chrysanthemum morifolium cv. Bo-ju［J］. Chinese Journal of Chinese Materia Medica，43（8）：1596-1601.］ doi：10.19540/j.cnki.cjcmm.2018.0059.

朱玉蕓. 2018. 酶促褐变对菊花品质的影响研究［D］. 合肥：安徽中医药大学. ［Zhu Y Y. 2018. Study on the effect of enzymatic browning on the quality of Chrysanthemum［D］. Hefei：Anhui University of Chinese Medicine.］

Wang W X，Yang H R，Li Y，Zheng Z F，Liu Y J，Wang H Y，Mu Y L，Yao Q Q. 2018. Identification of 16，25-O-diacetyl-cucurbitane F and 25-O-acetyl-23，24-dihydrocucurbi-tacin F as novel anti-cancer chemicals［J］. Royal Society Open Science，5（8）：180723. doi：10.1098/rsos.180723.

Xu J S. 2005. The effect of low-temperature storage on the activity of polyphenol oxidase in Castanea henryi chestnuts［J］. Postharvest Biology & Technology，38（1）：91-98. doi：10.1016/j.postharvbio.2005.05.011.

（责任编辑 罗 丽）

收稿日期：2022-07-24

基金项目：国家自然科学基金项目（81960691）；云南省重大科技专项（2018ZF011）；云南特色植物提取实验室自主研究项目（2022 YKZY001）

通讯作者：赵艳（1982-），https：//orcid.org/0000-0001-8088-4288，博士，副教授，主要从事药用植物研究工作，E-mail：zhaoyankm@126.com

第一作者：陈庚（1994-），https：//orcid.org/0009-0000-0484-1753，研究方向为药用植物有效成分途径解析，E-mail：1462415742 @qq.com