复性_参考网

基于两亲性超分子的共价水凝胶辅助蛋白折叠

菌酶进行体外折叠复性研究. 结果表明, UPy-C6-HBA含量、 凝胶用量、 溶菌酶浓度和复性温度对复性效果均有影响. 当环境温度为25 ℃时, 含UPy-C6-HBA单体15%（质量分数)的水凝胶可以使0.25 mg/mL溶菌酶的复性率提高41%. 研究结果表明, 向凝胶体系中加入UPy-C6-HBA单体显著提高了溶菌酶的复性率, 对于高浓度变性溶菌酶的复性具有重要意义.2-{6-[3-(6-甲基-4-氧代-1,4-二氢嘧啶-2-基)脲基]己烷氨甲酰氧

高等学校化学学报 2023年11期2023-11-24

温度响应的黄曲霉毒素B1纳米抗体重组表达、复性及生物活性

种蛋白分别以稀释复性、ITC纯化、透析复性、柱上复性的方式进行复性。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）分析4 种复性方式得到4 种蛋白纯度与含量，间接竞争酶联免疫吸附实验（enzymelinked immunosorbent assay，ELISA）测定其IC50差异，相对浊度分析测定其相变温度，圆二色谱分析其二级结构组成

食品科学 2023年18期2023-10-21

性善情扰与息情复性：李翱《复性书》思想分析

分析和探究，著《复性书》，意图以此教化百姓。《复性书》以“性”与“情”为主体，对“性”“情”及其关系进行阐释，其目的在于恢复人的本性，继承并发展儒家的正统思想。《复性书》主要以《中庸》为蓝本，融汇《易》、《诗经》等经典，是对儒家先贤思想的继承和进一步发展。《复性书》有上、中、下三篇。上篇借圣人与百姓的差异性，阐述“性情”问题产生的原因，直言其写作的缘由；中篇通过问答的方式，借用各种经典文集，论述其“复性”的方法；下篇虽极为简短，却清晰地表述了“复性”的意义

华夏文化 2022年1期2022-11-23

scFv-DEC205-Trap重组包涵体靶向抗原复性及过程的优化①

的杂质，方便后续复性步骤［5-6］。包涵体在溶解的过程中高级结构遭到破坏，从而失去了生物活性，因此对重组蛋白进行复性操作成为重中之重。复性过程主要是变性的蛋白重新折叠的过程，但是在这个过程中会发生错误折叠和聚集等现象。传统的蛋白复性方法主要包括稀释复性法、透析复性法、超滤复性法，近几年来柱层析复性法、低分子添加物辅助复性法和分子伴侣辅助复性法等成为研究热点［7-8］。稀释复性法的优点是简单、可使还原剂及变性剂下降到一定浓度、复性蛋白易于后续检测。缺点是需要

中国免疫学杂志 2022年15期2022-10-02

青海血蜱重组rHq002 蛋白包涵体的纯化

体进行变性溶解后复性，可获得具有生物活性的重组蛋白。其具体过程为：将含有包涵体的大肠埃希菌裂解，经低速离心后弃上清液留沉淀，用含洗涤剂的洗涤液洗涤沉淀后获得包涵体粗提物；用增溶剂高浓度盐酸胍或尿素通过破坏蛋白质间的聚集达到增溶重组蛋白的目的；然后复性，通过将增溶剂的浓度降低或者完全清除，使蛋白恢复天然状态。为了提高蛋白的复性效率和减少聚集现象的产生，会添加少量还原剂、小分子聚合物、表面活性剂或者分子伴侣等。蜱是体外吸血节肢动物，可携带细菌、病毒、立克次体等

中国生物制品学杂志 2022年1期2022-01-19

表达重组包涵体蛋白的变性溶解及复性研究

结合力，以至于使复性过程更加有效。这种情况不包括洗涤剂在内。洗涤剂与蛋白的结合力决定于其临界胶团浓度(CMC)的大小。这种胶团结合往往在临界胶团浓度之上，即变性非折叠蛋白溶解性好的条件下发生，而这种胶团结合不能或者很少能在临界胶团浓度之下，即蛋白溶解性差的条件下发生[2]。这表明，只有在洗涤剂存在的条件下，蛋白复性过程才能发生，否则，去除洗涤剂后，蛋白质结构和溶解度又将形成原包涵体。2 蛋白复性复性过程是蛋白质构象从展开状态到折叠状态的变化过程。包涵体只能

今日畜牧兽医 2021年7期2021-03-28

小切口复位克氏针内固定治疗难复性儿童肱骨髁上骨折

病高峰[1]。难复性儿童肱骨髁上骨折一般采用手术治疗，但手术方式争议较多。2012年1月～2018年12月，我科采用外侧小切口辅助复位克氏针内固定治疗24例难复性儿童髁上骨折，取得了满意的疗效，报道如下。1 材料与方法1.1 病例资料本组24例，男15例，女9例，年龄2～14岁。Gartland分型：Ⅱ型2例，Ⅲ型22例。左侧9例，右侧15例。2例合并桡神经损伤。致伤原因：摔伤20例，高处跌落伤4例。受伤至手术时间8 h～11 d。1.2 手术方法全身麻醉

临床骨科杂志 2020年3期2020-07-01

人源溶菌酶在大肠杆菌中的表达与复性研究

其空间结构和蛋白复性中具有重要作用（图1-B）［9］。人源溶菌酶广泛分布于人体器官、细胞和体液中［6，10］。已报道的含有人源溶菌酶的器官有肺、肾、胎盘等；细胞有巨噬细胞、白细胞等；体液有眼泪、唾液、尿液、血清和乳汁等［11］。其作为一种非特异性免疫因子和抗炎因子，人源溶菌酶在人体防御机制中扮演着重要角色［12］。此外，很多研究表明人源溶菌酶还具有抗真菌和抗病毒的作用［13-14］。在活性方面，其抗菌活性是鸡蛋清溶菌酶的3倍，是牛溶菌酶的10倍［15］。目

生物技术通报 2020年3期2020-03-19

应用杂交技术在腹腔镜难复性疝修补术中15例报道

泛应用。其中的难复性疝临床中会经常遇到，以前我们都是通过开放性手术来处理，近年来我们对于其中非急诊的应用杂交技术来处理，均取得非常好的手术效果。回顾性分析自2017年1月～2019年12月期间保定市徐水区人民医院普外科，其中应用杂交技术治疗原发性单侧难复性腹股沟疝患者15例，其中斜疝6例，股疝9例。现将具体手术方式介绍如下：（1）手术采用喉罩全身麻醉。（2）术中采用标准的腹腔镜TAPP三孔法布局。镜下疝内容物均不能应用腹腔镜器械还纳。术中对于其中不能回纳的

临床医药文献杂志(电子版) 2020年38期2020-02-28

大分子拥挤环境对不同糖基化MUC5AC折叠和聚集的影响①

5AC)的变性和复性 Li等[7]在研究大分子拥挤环境对葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6pDH)和蛋白质二硫异构酶复性的影响时，使用了Ficoll70、Dextran70、PEG2000、BSA、卵清白蛋白和溶菌酶作为不同拥挤试剂，浓度梯度为0 g/L、50 g/L、100 g/L、150 g/L和200 g/L。因此本实验利用BSA、Ficoll70、Dextran70和PEG2000作为拥挤试剂体外模拟四种不同的大分子拥挤环境。分别取15 μl n-MUC

中国免疫学杂志 2019年23期2019-12-27

基于模型建构突破“PCR技术”教学难点的策略

CR技术中变性、复性、延伸三个环节及其循环，应用概念模型、物理模型及数学模型等方法构建，将抽象微观的知识通过亲手构建变成具体的模型，从而突破学习难点.关键词：模型建构;PCR技术;变性;复性;延伸PCR技术（聚合酶链式反应）是高中生物人教版选修三基因工程中目的基因体外扩增的重要学习内容，在刑事侦破、古生物研究、基因序列分析、基因检测等方面，只要提供微量的DNA分子就能通过PCR技术进行体外扩增，获得大量的DNA分子，因此，应用广泛，为生物学命题提供大量的素

理科考试研究·高中 2019年8期2019-09-19

人胱抑素C大肠杆菌表达载体构建及包涵体复性研究

表达及蛋白纯化、复性进行深入研究，本研究采用基因工程的方法构建了人cysC大肠杆菌表达载体，并探讨了CysC蛋白包涵体胞外复性的方法，为降低体外诊断试剂的成本，提高产品竞争力做出了一定的贡献.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌种与质粒：大肠杆菌E.coli DH5α、BL21菌株由本实验室保存，原核表达载体pET32a购自TaKaRa公司.1.1.2 试剂：BamHⅠ与HindⅢ限制性内切酶购自Promega公司；Taq DNA聚合酶、DNA连接酶购

惠州学院学报 2018年6期2019-01-24

彩色多普勒超声对小儿腹股沟疝的诊断价值

儿股骨沟均出现可复性包块，可将其置入阴囊中，患儿双侧腹股沟不对称。排除标准：（1）排除合并凝血功能障碍或其他血液系统疾病患儿。（2）排除合并免疫系统以及代谢系统疾病患儿。（3）排除合并心、肺、肝、肾等其他脏器疾病患儿。（4）排除对临床检查依从性低的患儿。1.3 方法参与本次研究的患儿均采用彩色多普勒超声诊断仪对患者腹股沟区进行扫描，探头扫描频率在5MHz至7MHz，对患儿腹股沟管4壁2口等生理解剖结构逐一进行扫描，并探测患儿腹股沟管扩张程度、腹股沟斜疝、疝

影像研究与医学应用 2019年3期2019-01-24

Bacillus sp.肌氨酸氧化酶的脱辅基与重构

D的SOX包涵体复性的方法，对肌氨酸氧化酶进行脱辅基以及与天然辅基的复合，探究如何在复性的过程中添加辅因子[8]，促使酶蛋白本体在正确折叠的过程中螯合辅因子，并呈现出酶学活性[9]。研究SOX酶蛋白与不同的、潜在的辅基之间存在着什么样的关系，对改造乃至提高此类黄素酶的催化特性，将提供有意义的参考价值[10]。1 材料与方法1.1 菌种E.coli BL21（DE3）/pET28a-soxopB：由作者所在实验室保存[11]。1.2 培养基1.2.1 种子培

食品与生物技术学报 2018年9期2018-11-06

李翺人性论探析

善情恶”和“灭情复性”的人性论。李翺认为人性本善，只是受了七情的影响而失去善的本性，因此只要灭情就可以恢复人的善性了。在复性过程中，李翺强调的是向内寻求自身的反省。但是李翺的人性论中包含有善之性产生的邪情的矛盾，因此，对这一个矛盾的回答就产生了宋明时期的性二元论。关键词：李翺；人性论；性善情恶；复性中图分类号：F24 文献标识码：A doi：10.19311/j.cnki.1672-3198.2018.23.0511 李翺人性论思想产生的背景李翺生于公元7

现代商贸工业 2018年23期2018-09-20

人血小板衍生生长因子BB亚型包涵体复性与纯化

是表达量非常低，复性率不高，纯化条件不稳定，生物活性也不高。本实验室根据原核表达特点，参照生物信息学和软件Vector NTI suitor7.0分析结果，提高了PDGF-BB的表达量，占菌体总蛋白的25%[5]。在此，我们对基因工程下游技术进行探索，对PDGF-BB包涵体的变性、复性方法和条件，以及纯化工艺的优化进行多次尝试，提高了PDGF-BB包涵体的复性率达40%以上，同时稳定了重组蛋白的纯化工艺，获得了纯度大于95%且具有良好生物活性的重组PDGF

生物技术通讯 2018年3期2018-06-13

厚壳贻贝抗菌肽mytichitin-CB的固相化学合成、复性及功能

in-CB的氧化复性和功能研究。上述研究为进一步揭示mytichitin-CB的结构与功能关系奠定了基础。1 材料与方法1.1 试剂9-芴甲氧羰基(Fmoc)氨基酸、二氯甲烷、二异丙基乙胺、HOBt(1-羟基-苯并-三氮唑)、TBTU(1-氧-3-双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐)、DMF(N,N-二甲基甲酰胺)等固相化学合成试剂购自上海吉尔公司。NMM(N-甲基吗啉)、piperidine(哌啶)、Fmoc-Rink-AM-Resin 合成树脂、TFA(

浙江海洋大学学报(自然科学版) 2018年1期2018-05-16

包涵体蛋白的纯化层析复性技术研究进展

的过程中必须通过复性操作技术对其进行复性。层析复性技术是一种蛋白质分离纯化的方法并且得到了相对广泛的应用；按照目前纯化实验中机制的不同，可将层析技术大致分为凝胶过滤层析、吸附性层析，本次研究则主要分析以上两类包涵体蛋白的层析复性技术详情（如下表1），现将研究概况做出整理报道。表1 层析复性技术1 凝胶过滤层析复性凝胶过滤层析复性也称体积排阻复性或分子筛复性。和常用的稀释复性法（或透析法）比较，凝胶过滤层析复性能在较高的起始蛋白浓度下对蛋白进行复性，其具有较

商品与质量 2018年38期2018-04-16

四氢嘧啶对热变性凝乳酶复性作用的研究

后，会发生显著的复性作用，这与四氢嘧啶对植酸酶热稳定性的影响完全不同[6]。蛋白质的复性是变性蛋白质在适当条件下恢复其天然构象和生物活性的过程。蛋白质复性要求有一定的条件，如pH、温度、离子强度、蛋白质浓度等。多种添加剂能促进蛋白质复性，包括：表面活性剂、低浓度变性剂、分子伴侣蛋白等[7]。目前，蛋白质从伸展态转变为具有生理活性的天然态结构的复性过程与机理还没有完全阐明。酶结构的变化是时间和温度2个因素的复合作用所致[8]。笔者研究了四氢嘧啶存在条件下，热

安徽农业科学 2018年3期2018-01-19

脲对Flt3配体包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用研究

包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用研究余秀娟1，张如月1，卢金铭2(1.河北北方学院药学系，河北 张家口 075000；2.华北电力大学科技学院，河北 保定 071000)目的研究小分子脲对包涵体蛋白质体外复性与同时纯化的作用。方法考察在高效疏水相互作用色谱(HPHIC)流动相中添加脲时，不同浓度的小分子脲对包涵体蛋白重组人酪氨酸激酶配体(recombined human Flt3 ligand,rhFL)复性效率的影响，并采用荧光光谱技术，进一步研究目

河北北方学院学报（自然科学版） 2017年12期2018-01-11

浅析程朱理学范式下薛瑄思想的转向

即性之说。薛瑄的复性说简化了程朱理学的程序，把形而上的理置于易于把握的性之下，提高了穷理的操作性与可行性，是理学的新发展，也是对程朱理学的修正。在薛瑄复性思想的构建中，《易》起着不可替代的作用。《易》开辟了儒家视野中的宇宙本体论哲学，既完成了对先秦儒家形而上的构建，也为儒学以后的发展提供了理论源泉。薛瑄的性与复性说学正是其理论体系形而上的构建，《易》以宏大的形而上体系，独特的宇宙生产模式，为薛瑄性体构建、复性理论建设提供了基础，是薛瑄复性说的支点之一。[关

地方文化研究 2017年2期2017-05-30

小鼠PD-1胞外段重组蛋白表达及其包涵体复性

白表达及其包涵体复性江慧，康巧珍，黄夏冰，张成龙，刘鑫(郑州大学生命科学学院河南郑州 450001)旨在利用原核表达系统制备可溶性的PD-1胞外段(以下简称exPD-1)蛋白.以C57BL/6小鼠脾细胞cDNA为模板，扩增小鼠exPD-1基因，成功构建重组质粒pET-28a-exPD-1，并在E.coliBL21(DE3)中诱导表达.结果显示，小鼠exPD-1重组蛋白大小约为17 kD，以包涵体形式存在.exPD-1包涵体蛋白经8 mol

郑州大学学报（理学版） 2017年2期2017-04-17

脊柱关节病致敏蛋白HLA-B27的非经典同源二聚体的表达与纯化

，将包涵体溶解、复性和纯化。最终从20 mg HLA-B27包涵体中得到0.2 mg纯度高且性状均一的HLA-B27同源二聚体，为获得高质量HLA-B27同源二聚体蛋白晶体及结构数据奠定了重要基础。强直性关节炎;HLA-B27;同源二聚体;纯化1 引言强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis, AS)是脊柱关节病(spondyloarthritides, SpA)的一种，属于风湿性疾病。强直性脊柱炎与HLA-b27基因高度相关，94%的强

武汉轻工大学学报 2017年1期2017-04-11

人C反应蛋白在不同原核表达载体及菌株中的表达及免疫反应性分析

，亲和层析及透析复性等方法。成功构建了CRP原核表达载体及菌株。经IPTG诱导后，得到了不同的重组CRP蛋白。结果表明，相同表达载体在不同的表达菌株中的表达情况有一定差别，分别在大肠杆菌及Rosetta gami2（DE3）pLysS中表达并得到了重组CRP的包涵体，对复性后的CRP重组蛋白进行Westen blotting及ELISA检测，结果表明原核表达的重组CRP蛋白的免疫反应性很低，CRP蛋白发挥免疫活性需要以五聚体形式存在。C反应蛋白；原核表达；

生物技术通报 2016年3期2016-10-13

对大肠杆菌异源表达乳酸片球菌素包涵体复性方法的研究

酸片球菌素包涵体复性方法的研究檀茜倩,韩烨,肖华志,周志江*(天津大学化工学院食品科学与工程系,食品生物技术实验室,天津 300072)本研究对E.coliBL21(DE3)基因工程菌高效表达的乳酸片球菌素融合蛋白包涵体进行了提取和变性溶解,并采用稀释复性,反稀释复性,透析复性,CTAB辅助复性和CTAB和β-CD结合辅助复性五种方法对乳酸片球菌素融合蛋白包涵体的变性溶液进行了复性的研究。结果表明CTAB和β-CD结合辅助复性的复性方法优于其它的复性方法,

食品工业科技 2016年13期2016-09-13

重组融合蛋白Trx-IFN-CSP复性工艺研究

-IFN-CSP复性工艺研究黄演婷1，2，3卢雪梅2，3杨小蓉1金小宝2，3朱家勇2，3（1. 广东药学院附属第一医院，广州 510006；2. 广东药学院基础学院药用生物活性物质研究所，广州 510006；3. 广东省生物活性药物研究重点实验室，广州 510006）旨在建立并优化融合蛋白Trx-IFN-CSP的复性工艺。对重组融合Trx-IFN-CSP进行体外复性研究，考查pH、温度、蛋白浓度、氧化还原体系及辅助复性小分子等复性条件对融合蛋白重折叠的影响

生物技术通报 2016年6期2016-06-10

重组精氨酸脱亚胺酶的制备工艺

体洗涤、溶解稀释复性后经DEAE阴离子交换层析柱和Butyl疏水层析柱纯化；通过SDS-PAGE和RP-HPLC等方法检测表达和纯度；用体外测活法检测活性。将工程菌进行放大培养并诱导表达，获得了相对分子质量在46 kDa的rADIES。重组蛋白表达量占总蛋白的25%以上，经制备工艺获得的rADIES纯度高于95%，酶活性为42 IU。实验结果表明：该工艺具有可行性，可以获得较高活性的重组精氨酸脱亚胺酶。关键词：精氨酸脱亚胺酶；发酵；复性；分离纯化精氨酸脱亚

重庆理工大学学报(自然科学) 2016年4期2016-05-28

广西师范大学出版社集团公司成都分社成立

社集团主办，成都复性书院文化传播有限公司承办的“复性书院重建暨广西师范大学出版社集团成都分社成立揭牌仪式”，在成都望江路29号逸夫楼复性书院隆重举行，宣告了广西师范大学出版社集团成都分社正式成立。广西师范大学出版社集团成都分社的成立，将进一步完善、拓展出版社集团“内涵发展、自我裂变”的发展道路，通过突出主业、多元化发展，实现多领域、跨地域发展。成立后的成都分社将以“继承传统、弘扬国学、关怀大众、服务社会”的为宗旨，实践“国学人才培养”和“国学经典出版”两大

出版广角 2016年3期2016-04-21

包涵体蛋白复性的研究进展

1)包涵体蛋白复性的研究进展付明娟1△，林接玉1,2(综述)，谢捷明1※(审校)(1.福建医科大学药学院药理学系，福州 350004； 2.福建医科大学附属协和医院药学部，福州 350001)摘要：包涵体是指外源重组蛋白在细胞内凝集的无活性的固体颗粒。经分离、洗涤除去一些膜蛋白或膜碎片后，用适宜试剂溶解,如高pH值加低浓度的尿素缓冲液、不同羟基的醇类或含小分子的变性剂。传统的稀释、透析等复性方法效率一般较低，目前可通过高静水压、沸石的高通量筛选及高通量筛

医学综述 2015年20期2015-12-10

甲胎蛋白的原核表达及复性优化

蛋白的原核表达及复性优化才蕾 矫丽媛 王继华 唐时幸（广州万孚生物技术股份有限公司，广州 510660）构建甲胎蛋白的原核表达载体pET32a-AFP，对包涵体形式表达的甲胎蛋白进行复性优化。将构建的重组质粒pET32a-AFP转化入E.coli，IPTG诱导表达后，经亲和层析纯化获得AFP包涵体，通过对复性过程、pH、添加剂等的研究摸索，获得最佳复性条件。当采用添加0.5 mol/L L-精氨酸的一步法透析复性方法，且透析液pH值为8.5，重组人AFP包

生物技术通报 2015年1期2015-10-25

重组瑞替普酶包涵体制备及其体外复性

涵体制备及其体外复性王俊雄，关怡新，姚善泾（浙江大学化学工程与生物工程学院，浙江杭州 310027）将携带重组瑞替普酶(reteplase, rt-PA)的质粒成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)后，诱导表达获得包涵体，考察了诱导剂浓度、培养温度和培养时间等条件对目标蛋白表达量的影响。在此基础上，对高效表达的rt-PA包涵体体外复性过程进行了详细研究。首先利用单因素实验考察了复性液pH、GSH浓度、GSH/GSSG比例、蛋白浓度等各种复性条件对复性效果的影

化工学报 2015年2期2015-10-15

大肠杆菌重组几丁质酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究

酶的表达、包涵体复性及酶学性质研究吕梦圆，吕永玲，夏 祥，林建国，王常高，蔡 俊，胡 瑛*（湖北工业大学轻工学部生物工程学院，发酵工程教育部重点实验室/工业发酵湖北省协同创新中心，湖北武汉430068）通过研究重组几丁质酶在大肠杆菌表达系统中诱导表达的浓度、时间和温度，获得表达的最佳条件。表达产物除了可溶性目的蛋白以外，仍存在于包涵体中。采用透析复性和Ni-NTA亲和层析柱上复性两种方法对包涵体中的目的蛋白进行复性，并比较对目的蛋白产率和比酶活的影响。并考

食品工业科技 2015年22期2015-04-24

重组中国明对虾溶菌酶包涵体的复性研究

虾溶菌酶包涵体的复性方法主要有稀释复性、透析复性、超滤复性等[2]。然而，关于重组蛋白复性后高回收率、高活性和高纯度的报道不多，特别是层析法复性包涵体蛋白的研究较少。亲和层析法复性包涵体蛋白不但可以实行纯化和复性同时进行，同时固相介质作为分子伴侣可以减少蛋白的错误折叠和聚合，并且可以实现大规模的工业生产[3]。因此，本实验运用稀释复性和亲和层析复性对重组对虾溶菌酶包涵体进行处理，并对2种方法复性的重组蛋白进行比较，以期为进一步深入研究对虾溶菌酶包涵体复性提

大连工业大学学报 2014年4期2014-09-19

抗HSV-2单链抗体和碱性磷酸酶融合蛋白的制备

并进行了包涵体的复性研究.1 材料与方法1.1 材料1.1.1 菌株及质粒大肠杆菌BL21(DE3)和DH5α由本实验室保存，质粒pLac-duet-1-AKP和pCANTAB5E-H3由杭州远方生物科技有限公司提供.1.1.2 酶及主要试剂限制性内切酶NotI、NcoI和T4 DNA连接酶购自TaKaRa公司，DNA和蛋白购自Fermentas公司，DNA凝胶回收试剂盒、质粒小量抽提试剂盒和碱性磷酸酶检测试剂盒购自碧云天公司，Ni2+-NTA基质购自Q

浙江工业大学学报 2014年1期2014-08-24

以Triton X－100处理重组E.coli制备重组人SOD 包涵体

包涵体进行了体外复性.1 材料与方法1.1 材料与仪器菌种为含重组质粒pTK－rhSOD的大肠杆菌DH5α（本研究室构建）.氧化型（GSSG）和还原型谷胱甘肽（GSH）（TaKaRa公司），β－巯基乙醇（β－ME）（Serva公司），三羟甲基氨基甲烷（Tris）（Amresco公司，进口分装），Triton X－100（上海生物工程公司），邻苯三酚和尿素等均为国产分析纯试剂.Model 250／2.5型电泳仪（Bio－Rad公司），WFJ 2100型可见分

河北大学学报（自然科学版） 2014年5期2014-07-24

一种从大肠杆菌包涵体中分离纯化GST-TRAF6融合蛋白的方法

性，通过逐级稀释复性的方法对尿素溶解后的GST-TRAF6融合蛋白进行复性，将复性后的GST-TRAF6融合蛋白进一步利用谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析的方法进行分离纯化，将分离纯化后的蛋白通过Western blot方法进行验证，最后利用体外泛素化反应检测经包涵体变性、复性和纯化后的GST-TRAF6融合蛋白的生物学活性。经过包涵体变性、梯度稀释复性和谷胱甘肽琼脂糖树脂亲和层析3个步骤后纯化得到纯度达90%以上、浓度为396 ng/μL的蛋白质溶液。利用GS

生物技术通报 2014年8期2014-04-09

复性之学与教化之乐

词：朱子；学而；复性；教化；成德中图分类号：B224.7 文献标识码：A 文章编号：1003-854X（2014）01-0088-06“学而时习”章为《论语》开篇之作，历来为学者所重视，但自古至今也聚讼纷纭，难有确诂。朱子作为宋代理学的集大成者，对本章的注解亦投入极大心力，他在继承二程理学，历经多年修改的基础上，作出了具有综合性而又别开生面的诠释，对后世产生了重要影响。但由于朱子诠释用词精密含蓄，“浑然犹经”，而且早晚思想颇有差异，致使其中精义不仅不为人知

江汉论坛 2014年1期2014-04-01

变性再复性方法提取高纯度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鉴定

0001）变性再复性方法提取高纯度Cav1.2片段GST-CT1及其生物活性的鉴定孙宇，封瑞，孙威，胡慧媛，郝丽英（中国医科大学药学院药物毒理教研室，沈阳110001）目的探寻诱导谷胱甘肽转移酶（GST）与Cav1.2钙通道片段CT1重组的易形成包涵体的大分子融合蛋白的提取与纯化的方法。方法在E.coliBL21中转化入pGEX-6p-3/CT1重组质粒并诱导表达，采用GST包涵体变性复性试剂盒和非离子去污剂B-PER分离纯化GST-CT1融合蛋白，用Pu

中国医科大学学报 2014年9期2014-03-22

牙鲆(Paralichthys olivaceus)β诺达病毒衣壳蛋白重组表达及复性条件优化*

会形成包涵体,需复性后才具有生物学活性,因此,复性效率的高低对产品质量和生产成本至关重要(吴正辉等,2008)。不同蛋白质结构和构象复杂多样,复性条件差别较大,因此,有针对性地探索目的蛋白的包涵体复性条件对工业化生产具有重要意义。本研究构建了感染牙鲆的β诺达病毒完整衣壳蛋白原核表达载体,优化诱导表达参数,在获得目的蛋白高效表达的基础上,利用正交分析获得包涵体复性的最适条件,为今后的工业化生产提供了重要依据。1 材料与方法1.1 材料、试剂和仪器1.1.1 

海洋与湖沼 2014年2期2014-03-08

体外蛋白质复性方法及小分子添加剂在复性过程中的作用

代密码。蛋白质的复性或折叠问题是生命科学研究中的核心问题之一，蛋白质从它的变性状态转变到它特定的生物学天然构象称为蛋白质复性，这个过程并不复杂。但是，一直以来将变性蛋白质恢复其天然的活性构象却是一项很艰难的工作。到目前为止，已发展了各种体外辅助蛋白复性方法。在众多体外辅助蛋白质复性的方法中，蛋白折叠液相色谱 （protein folding liquid chromatography，PFLC）法获得了长足的发展。与通常的液相色谱技术不同，PFLC除了能在

河北北方学院学报（自然科学版） 2013年2期2013-08-15

核糖核酸酶Onconase的稀释复性条件优化研究

涵体，再使包涵体复性得到有活力的Onconase蛋白。由于氧化型谷胱甘肽（GSSG）对蛋白质中二硫键的重新形成起到很重要的作用，尿素对蛋白质的复性也有意想不到的效果，因此，在复性缓冲溶液［4］中加入一定量的GSSG和尿素，并考察了复性温度、尿素浓度、GSSG加入时间对复性效果的影响，以确定最优稀释复性条件，并与传统的醋酸沉淀复性法进行了对比。拟为Onconase生产工业化、提高Onconase产量提供帮助。1 实验1．1 试剂与仪器牛血清白蛋白（BSA）、

化学与生物工程 2013年10期2013-08-14

梅毒螺旋体重组抗原TpN47的纯化工艺研究＊

然涉及到蛋白质的复性问题，以解决其溶解性。实际应用中，可以采用两种方式进行复性，一种是在变性条件下洗脱结合蛋白，然后进行透析或稀释复性，另一种是蛋白结合在柱上之后，用相对温和的溶液环境顶替变性溶液环境，待蛋白复性后再进行洗脱操作[3-4]。1 材料与仪器Urea，NaCl，NiSO4，Imidazol 均 为 国 产 分 析 纯 试 剂;Protein Molecular Weight Marker购自 Amersham;Tris，β-ME 及 SDSPA

中国药业 2013年21期2013-04-17

析薛瑄的复性说 ——兼论黄宗羲在《明儒学案》中对薛瑄的评价

其学说看成性学或复性之学，为什么薛瑄这么重视性呢?薛瑄认为:“孟子之后道不明，只是性之一字不明。”［1］1445不明的原因是“自孔孟以后，皆不识性”［1］1042，这是薛瑄极力研究并探讨性学的主要原因。同时，薛瑄的性学与朱子的理学是大不一样的。朱熹在“性即理”的基础上提出“理一分殊”，薛瑄则在“理即性”的基础上提出了“性一分殊”。薛瑄认为:“万事万物一理贯之，理即性也。”［1］1473在此基础上，薛瑄提出:“一性散为万善，万善原于一性，一本万殊，万殊一本也

中国石油大学学报(社会科学版) 2013年4期2013-02-01

新一代重组人粒细胞集落刺激因子的工业化发酵、复性和纯化

子的工业化发酵、复性和纯化宋爽1蒋文宏2蒋永平1，2，*1(中国医学科学院北京协和医学院苏州方舟生物医药研发中心，苏州 215126)2(苏州方舟基因药业有限公司，苏州 215126)工业化大规模发酵、复性和纯化突变型人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSFa)，并测定其体外生物学活性。利用定点突变和DNA重组技术获得突变型G-CSF(rhG-CSFa)。通过40 L发酵罐发酵基因工程菌株获得rhG-CSFa包涵体，经过一系列透析后，通过离子交换柱和分子

中国生物医学工程学报 2012年4期2012-09-18

由《复性书》浅析李翱的心性论思想

00872）由《复性书》浅析李翱的心性论思想李冉（中国人民大学哲学院，北京 100872）李翱的心性论思想是儒学思想发展中的一个转折点，在儒学发展史上具有重要意义。本文旨在通过对《复性书》的研读，梳理李翱提出的心性论思想体系，并结合《中庸》以及中国佛教哲学中的相关思想，揭示李翱心性论思想的内涵及其重要意义。《复性书》；李翱；心性论汉唐时期的中国哲学是一个儒、释、道三教共同发展的阶段，各家各派在相互借鉴、吸取彼此思想内容的基础上使得自己的理论体系更加丰富和完

中共太原市委党校学报 2012年5期2012-08-15

鸡IFN－γ基因重组蛋白复性条件的优化及生物活性鉴定

包涵体进行变性、复性等后续处理工作，以获得具有生物学效应的重组表达产物。不同的重组蛋白的复性条件有非常大的差异，复性效率显著不同，这些严重制约鸡IFN－γ的工业化生产。因此，我们对蛋白质复性条件进行优化，力求找到一种简单、价格低廉、复性得率和效率较高的方法，为鸡IFN－γ的工业化生产奠定基础。1 材料与方法1.1 材料1.1.1 重组鸡γ干扰素（cIFN－γ）蛋白表达产物纯化的重组鸡γ干扰素由课题组制备[12]。1.1.2 SPF鸡胚 SPF鸡胚购于北京梅

动物医学进展 2012年3期2012-06-29

包涵体变复性技术研究进展

·综述·包涵体变复性技术研究进展罗莉，李坤，王保成，王明蓉现代生物技术的迅猛发展使大规模表达异源重组蛋白成为现实，这极大地促进了蛋白类产品的开发，尤其是重组蛋白药物的研发。目前非糖基化的重组蛋白表达多采用大肠杆菌的原核表达系统，该系统的突出特点是表达产物多以包涵体形式存在。与蛋白可溶性表达相比，包涵体具有产量高、蛋白稳定、容易纯化等优点，对毒性蛋白制备尤其适宜。因此，采用包涵体形式已成为规模制备重组蛋白产品的主要途径之一。包涵体形成的原因普遍认为主要是外源

中国医药生物技术 2012年4期2012-04-13

一心二门式的儒家复性思想评析

一心二门式的儒家复性思想评析韩 丽 华（苏州大学 政治与公共管理学院，江苏 苏州 215123）先秦儒家的告子性无善恶论、孟子性善论、荀子性恶论皆把人性单一化，不能合理地说明人性的构成及人行善或作恶的原因。儒家“一心开二门”模式的性善情恶复性论认为，人性具有先天善性和后天恶情两种因素，由一体之心开出性情二门，主张以复性的方式去掉恶情回复善性。复性就是由后天之恶情向先天之善性复性。一心二门、性善情恶的复性论是人向善复性的基础和道德教化的根本，为弃恶从善的道德

东方论坛 2012年1期2012-04-01

HLA-A*2402多肽复合物的两种构象——对Wolynes理论的补充

获得[18]，自复性方法获得有活性pHLA-A2后[19]，酶切方法被摒弃。复性后的 HLA-A*2402多肽复合体 (pHLA) 可以与 TCR结合，通过对结合力的比较，可以在一定程度上反映天然状态下HLA-A*2402的活性。本文通过研究复性所得 pHLA-A*2402，发现它存在两种不同构象。进一步研究了这两种不同构象的生物活性，发现它们并无差别。由此给出结论：如果在不同的能量陷阱下折叠成的蛋白构象在活性上没有差别，那么它们就不会被自然选择区分，也就

生物工程学报 2012年11期2012-02-09

高频超声在腹股沟斜疝诊断中的应用

区或阴囊内出现难复性或反复出现可复性包块来我所行高频超声检查,其中男性66例,女性12例;年龄4个月～15岁,平均47.6岁;右侧55例,左侧15例,双侧8例。1.2 仪器与方法使用惠普8500超声诊断仪,探头频率(5～13)MHz。采用平卧位大腿外展及站立位,并嘱患者咳嗽或做Valsalva动作[1],仔细观察病灶部位、大小、形态、边界、内部回声特点,特别注意疝囊颈部的位置,疝内容物与腹腔的关系,疝囊与阴囊(或阴唇)的关系,必要时双侧对比检查和加做腹盆腔

中国卫生产业 2011年17期2011-08-15

重组人骨形态发生蛋白-2原核表达及单克隆抗体制备

合其推广应用，如复性困难、工艺难以放大等。本研究利用简单的原核表达系统 (E.coli)获得具有生物学活性的rhBMP-2m并制备能检测真核细胞表达rhBMP-2m的单克隆抗体，为rhBMP-2m研究和商业化生产奠定基础。材料和方法材料雌性Balb/c小鼠 (北京维通利华实验动物技术有限公司);辣根过氧化物酶标记的兔抗鼠IgG(北京义翘神州生物技术有限公司);小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心);SP琼脂糖

中国医学科学院学报 2011年5期2011-08-09

拟南芥转录因子AGL47的原核表达与包涵体复性研究

体的纯化，变性和复性后，初步获得了可溶性目的蛋白，为进一步研究AGL47转录因子的功能奠定了重要基础.1 材料与方法1.1 材料工程菌 E.coli DH5α 和 E.coli BL21(DE3)表达载体pET-28a由河南农业大学生命科学学院微生物实验室保存;At5g55690全长CDS克隆pENTR-At5g5569 为前期研究构建［14］.限制性内切酶BamHⅠ/XhoⅠ，T4 DNA连接酶、IPTG，蛋白质分子量标准(低)购自TaKaRa公司;尿素

河南农业大学学报 2011年3期2011-05-10

敬钊毒素-XI与突变体R3A-JZTX-XI的合成、复性及其药理活性鉴定

索合成产物的氧化复性条件，结合电生理膜片钳技术研究合成毒素对 HEK293T细胞上瞬时转染表达的钾通道亚型 Kv2.1和钠通道亚型Nav1.5电流的抑制作用，为下一步通过蛋白质工程将JZTX-XI改造成一个高效特异性的Kv2.1通道亚型或Nav1.5通道亚型的抑制剂提供实验依据。1 材料与方法1.1 材料9-芴甲氧羰基 (Fmoc) 氨基酸、N-甲基吗啡啉(NMM)、哌啶 (Piperidine) 购自吉尔生化 (上海) 有限公司；Rink Resin树脂

生物工程学报 2011年6期2011-02-10

西维因单链抗体基因克隆、表达及活性分析

利用不同条件进行复性，结果显示最佳复性时间为48h，最佳起始蛋白浓度为200μg/mL，含有精氨酸的复性液效果最佳；利用亲和层析纯化scFv，并利用竞争ELISA检测其活性，结果显示该scFv对西维因具有良好的亲和性和特异性。西维因，单链抗体，克隆，表达，活性西维因（Carbaryl）是氨基甲酸酯类农药的一种，广泛用于防治稻、麦、棉、果树、蔬菜等作物害虫，畜禽外寄生虫和卫生害虫。它是一种接触性杀虫剂，兼有内吸活性，如残留在体内，能抑制胆碱酯酶，使乙酰胆碱在

食品工业科技 2010年11期2010-11-14

层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质

90层析辅助体外复性含有多对二硫键的融合蛋白质谢伟全1,2，张贵锋2，高玲1，刘永东2，余蓉1，苏志国21 四川大学华西药学院，成都 610041 2 中国科学院过程工程研究所 生化工程国家重点实验室，北京 100190为建立一种基于阴离子交换介质辅助的含多对二硫键的抗凝溶栓双功能水蛭素 12肽-瑞替普酶融合蛋白质(HV12p-rPA)的复性方法，采用Q Sepharose XL作为层析复性介质，通过正交实验考察蛋白质上样量、流速、脲梯度、洗脱液中精氨酸浓

生物工程学报 2010年8期2010-10-16

L-精氨酸助溶菌酶复性过程动力学研究

白，必须进行体外复性。蛋白质复性技术对于重组蛋白的大规模生产具有重要意义，其中稀释复性是一种最常见的蛋白质复性方法。实现蛋白质复性首先需要提供能使蛋白质以能量最低状态存在的溶液环境，其次在操作过程中需抑制蛋白质聚集体的生成[2]。蛋白质折叠过程中存在两种疏水作用，即分子内和分子间疏水作用。前者促进蛋白质正确折叠成天然活性态，而后者导致变性蛋白质发生不可逆聚集和沉淀[3]。稀释复性过程中往往由于聚集体的生成而严重影响复性收率。抑制蛋白质肽链之间的聚集作用、提

化学与生物工程 2010年10期2010-06-05