小鼠结肠癌肝转移模型的构建

杨 扬* 李乃卿

随着分子生物学的深入研究，基因芯片作为基因组及后基因组时代的主要研究技术，已成为揭示药物作用机制的重要方法。基因芯片检测技术的前提是成功而适用的动物模型，首先需要获得足够的RNA检测量，所以成功的造模方法是研究课题成败的关键所在。下面就我们近期进行的结肠癌肝转移的造模方法总结如下。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物

4～6周龄体质量20～24g的BALB/C小鼠雄性（♂）81只，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，动物许可证号：京动许字（2000）第004号总049号，在Ⅱ级动物实验室饲养。

1.1.2 瘤株

小鼠结肠癌C26细胞株（美国引进，广安门医院肿瘤实验室惠赠）。经3次皮下接种传代后，无菌条件下摘取瘤体，生理盐水洗涤，剪成小块，匀浆，离心后取沉淀，反复3次，培养于10%新生牛血清和RPMI1640培养液（含青霉素100U/mL、链霉素100U/mL），置37℃、含5%CO2培养箱中3d，每日换液。将细胞液机械吹打成单个细胞，离心取沉淀，加生理盐水调整细胞浓度为7×105/mL，观察细胞活力＞95%，备用。

1.2 方法

1.2.1 脾脏注射切脾法

随机选取39只小鼠称重，采用0.5%的戊巴比妥钠（50mg/kg）腹腔内注射麻醉，3～5min麻醉成功后，用胶布固定小鼠于手术台上。安尔碘皮肤消毒，左侧腋后线肋缘下纵行切口，长0.5～1cm，进腹后于腹外侧找到柳叶状脾脏，牵出腹腔外，用1mL注射器从脾下极进针，将瘤细胞液0.2mL注射于脾内，拔针后，酒精棉球按压针眼，轻轻按揉脾脏5min，使瘤细胞经脾静脉进入肝脏，注射区苍白隆起消失后，结扎脾蒂，切除脾脏，查无出血，依次间断缝合肌肉、皮肤关腹。……