细粒棘球绦虫(中国大陆株)亲肌肉抗原重组蛋白的免疫保护性研究*

马 锐,师志云,李昭宇,王娅娜,李宗吉,赵 巍

囊性包虫病(cystic echinocoecosis,CE)是由细粒棘球蚴绦虫(Echinococcus granulosus,Eg)幼虫引起的一种人畜共患寄生虫病,虽呈全球性分布,但主要流行于高原和气候寒冷的畜牧业地区,如亚洲,非洲,欧洲,北美洲、澳大利亚等〔1〕。据 WHO 报告〔2〕:发病最为严重的北非突尼斯人群的发病率为1.5～2.05/10万。我国是包虫病发病最高的国家之一,以疆、青、甘、宁、藏、内蒙和川西较为严重。疫苗防治是控制包虫病流行的最有效的方法〔3-4〕。本课题小组根据GenBank公共数据库检索出细粒棘球蚴亲肌肉抗原基因的已知序列并设计引物,通过RT-PCR技术克隆出目的基因,并在大肠埃希菌(E.coli)中表达重组蛋白(rEgmyophilin),研究证明原核表达的重组蛋白具有较好的抗原性和免疫原性〔5-6〕。本次研究以Egmyophilin为候选疫苗抗原分子免疫小鼠,细粒棘球蚴原头蚴攻击后观察其诱导的免疫保护力和抗体水平,为疫苗研制研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 6-8w龄雄性ICR小鼠,体重(18±2)g,共24只,购自宁夏医科大学实验动物中心。

1.1.2 细粒棘球蚴原头蚴 从宁夏医科大学附属医院肝胆外科包虫病患者手术摘除的完整包囊中无菌条件下抽取囊液,分离原头蚴,经PBS(pH7.2)洗涤3次后,弃去上清液,用0.5%伊红染色计数原头蚴的着色率及形态,原头蚴的存活率＞90%,用PBS配成1.5×104个原头蚴/mL悬液,用于攻击感染ICR小鼠。

1.1.3 细粒棘球蚴重组蛋白Egmyophilin:由本室构建〔5-6〕。

1.1.4 主要试剂 辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗鼠IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b IgG3和 IgE 购自华美生物工程公司北京分公司。

1.2 方法

1.2.1 动物分组及免疫 将ICR小鼠随机分为蛋白免疫组和佐剂对照组,每组12只。……