添加菊科植物黄花蒿乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞脂肪酸组成的影响

王丽芳 卢德勋 高 民

CLA是一种含有共轭双键的十八碳二烯酸，具有抗癌、抗动脉粥样硬化及抗糖尿病等作用的脂肪酸。研究表明，菊科植物或其提取物可以增加乳中CLA的含量（Collomb等，2002；Cabiddu等，2006；Wallace等，2007）。

本试验采用奶牛乳腺组织体外培养法，研究添加菊科植物黄花蒿乙醇提取物对乳腺上皮细胞中CLA和其它脂肪酸组成的影响，旨在探讨菊科植物黄花蒿乙醇提取物对奶牛乳腺上皮细胞中CLA合成的作用效果。

1 材料与方法

1.1 试验仪器和试剂

二氧化碳恒温培养箱(Forma)、超净工作台（DLCJ-2N）、组织培养倒置显微镜(Olympuse，日本)、高压灭菌锅 (BGSB-3056 HIRAYAMA)、数显鼓风干燥箱（GZX-9140MBE）、超纯水机（21QX-P1518A Qunxian）、细胞计数板、电子天平、常温低速离心机、加样器、滤器(0.22 μm)、60 公分培养皿(Nuc)、RPMI1640 培养基（美国Gibco公司）、D-Hanks液(天津灏洋生物有限公司)、青霉素钠(Sigma)、硫酸链霉素(Sigma)。

1.2 试验材料

1.2.1 奶牛乳腺组织

乳腺组织来源于一头健康的泌乳期奶牛。取约1 g的乳腺组织，迅速置于含双抗的D-Hanks液的灭菌离心管中，带回实验室在超净台内移入含有双抗的D-Hanks液中反复冲洗组织，洗净乳腺组织上残余的乳汁和血污，尽量除去脂肪组织和结缔组织，然后用眼科手术剪将组织剪成约1 mm3左右的小块备用。

1.2.2 组织块培养

用牙科探针将剪碎的1 mm3左右的组织小块均匀种植于60 cm2的培养皿中，组织块间距以0.5 cm左右为宜。种植完成后，盖好培养皿盖，放置于37℃，5%CO2培养箱中培养3 h左右，使组织块贴壁。然后将培养皿从培养箱取出，轻轻加入3～5 ml RPMI1640培养液，让培养液慢慢覆盖瓶底上的组织小块，静置培养箱(37℃，5%CO2)中培养。

1.2.3 黄花蒿乙醇提取物